TP-ELISA试剂盒3种外膜脂蛋白抗原联合应用对检测结果影响分析

目的通过对大连地区无偿献血者梅毒单试剂阳性和双试剂阳性血清标本中TP15、TP17、TP47抗体分别进行检测,分析梅毒A试剂所包被的这3种不同外膜脂蛋白抗原对检测结果的影响。方法收集大连市血液中心2017年11月—2018年11月梅毒A试剂单阳性标本36份和171份TP双试剂阳性标本,采用A试剂厂家3种分别包被不同外膜脂蛋白抗原的TP-ELISA试剂进行检测,所有阳性标本都进行电化学发光和TPPA确证实验,记录结果,并对数据进行统计分析。结果 1)TP单试剂阳性(A厂家)和双试剂阳性标本进行确认实验后,假阳性率分别为100%和10.83%(P<0.05)。2)单试剂阳性(A厂家)标本36份,3种抗体检测结果筛查频率P分别为:TP15-,TP47-,TP17-(P=0.17);TP15+,TP47-,TP17-(P=0.22);TP15-,TP47+,TP17-(P=0.56);TP15-,TP47-,TP17+(P=0.06);TP15+,TP47+,TP17-、TP15-,TP47+,TP17+、TP15+,TP47-,TP17+、TP15+,TP47+,TP17+频率P均为0。3)梅毒双试剂阳性标本(确认阳性)140份,3种抗体检测结果筛查频率P分别为:TP15+,TP47-,TP17-(P=0.01);TP15-,TP47+,TP17-(P=0.01);TP15+,TP47+,TP17-(P=0.04);TP15-,TP47+,TP17+(P=0.01);TP15+,TP47-,TP17+(P=0.01);TP15+,TP47+,TP17+(P=0.92);TP15-,TP47-,TP17-和TP15-,TP47-,TP17+频率P为0。4)梅毒单阳性的标本3种抗体检测结果两两进行χ~2配对检验,TP17和TP47 2种抗体的阳性检出率有差异(P<0.05);TP17和TP15 2种抗体的阳性检出率无差异(P>0.05);TP15和TP47 2种抗体的阳性检出率有差异(P<0.05)。5)梅毒双试剂阳性的标本(确认阳性)3种抗体检测结果两两进行χ^2配对检验均无差异(P>0.05)。结论 TP-ELISA检测试剂A包被的TP47外膜脂蛋白可能是引起其假阳性率升高的主要原因,针对TP47外膜脂蛋白在梅毒检测试剂A中的应用价值试剂厂家应该进行进一步的研究。

问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定

目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。