布鲁氏菌外膜蛋白22基因克隆与原核表达

本试验以布鲁氏菌外膜蛋白22(omp22)基因作为研究对象,通过基因序列克隆、表达载体构建、大肠杆菌原核表达与亲和纯化,对蛋白的表达与纯化进行了研究。结果显示,omp22基因的核苷酸序列含有639bp,编码212个氨基酸残基,预测分子质量为22ku,电泳结果显示重组omp22蛋白的分子质量为47ku,与理论值相符。本试验结果为进一步研究重组omp22蛋白的免疫刺激与免疫保护作用奠定了基础。

布鲁菌外膜蛋白Omp22基因的原核表达与生物信息学分析

克隆布鲁菌Omp22基因,原核表达后进行生物学信息分析。根据GenBank中羊种布鲁菌M5-90株基因组PCR扩增出639bp的目的基因片段,构建克隆重组质粒pMD-20T-Omp22,转化入E.coli DH5α。测序正确后构建表达重组质粒pET-28a-Omp22,转化入E.coli BL21(DE3)。IPTG诱导表达,Western blot鉴定诱导融合蛋白。结果表明,成功克隆Omp22基因,构建pET-28a-Omp22原核表达载体,在E.coli BL21(DE3)中表达Omp22基因。DNA Man和BIOEDIT软件生物性息学分析Omp22融合蛋白二级结构中α-螺旋占22.17%;伸展链占19.81%;β-折叠占2.83%;无规卷曲占55.19%。说明该蛋白具有较高亲水性。

羊布氏杆菌3型外膜蛋白Omp22基因的克隆及生物信息分析

为大量制备重组布氏杆菌外膜蛋白Omp22及其免疫原性和相关功能研究奠定基础,同时为布氏杆菌病的诊断、防治药物及疫苗研究提供参考,以羊种布氏杆菌3型青海省海晏县分离株为研究对象,对其外膜蛋白Omp22基因进行克隆,并利用相关软件系统对外膜蛋白Omp22的生物信息学进行分析。结果表明：在布氏杆菌Omp22基因两端加上BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,通过PCR方法获得海晏县分离羊种布氏杆菌3型菌株的Omp22基因,成功克隆入pMD19-T载体上。羊种布氏杆菌3型Omp22分子一级结构的氨基酸序列中存在4段可能的抗原表位区段,其中28～40aa、109～121aa和141～154aa的抗原指数和B细胞表位较高,成为抗原决定簇的可能性很大。