布鲁氏菌Omp2b蛋白抗原表位的生物信息学分析

目的利用生物信息学软件分析布鲁氏菌外膜蛋白2b(Omp2b)蛋白的抗原表位。方法从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌Omp2b蛋白的氨基酸序列。通过ProtParam软件分析Omp2b蛋白的理化性质;利用SOMPA在线软件分析Omp2b蛋白的二级结构;使用SWISS-MODEL在线分析和构建Omp2b蛋白的三级结构,并使用RasMol2.7.2.1软件分析。利用IEDB、DNAStar软件预测Omp2b蛋白的B细胞抗原表位;利用SYFPEITHI、IEDB软件预测Omp2b蛋白的T细胞抗原表位。结果对Omp2b蛋白的一级结构分析发现,Omp2b蛋白是一种稳定亲水性蛋白质;在Omp2b蛋白的二级结构中,无规卷曲和β转角构成较多;Omp2b蛋白的三级结构是环状的,非常稳定,其表位主要位于三级结构的上部和下部。经DNAStar、IEDB软件预测,Omp2b蛋白具有8个B细胞抗原表位,其位点分别位于66~85、115~131、169~176、184~188、196~212、268~286、306~316、328~352。经SYFPEITHI、IEDB在线软件预测,Omp2b蛋白具有7个CTL优势表位,其位点分别位于76~84、102~110、231~239、241~249、290~298、329~337、335~343;Omp2b蛋白具有3个Th优势表位,其位点分别位于133~147、178~192、202~216。结论布鲁氏菌Omp2b蛋白具有7个CTL优势表位、3个Th优势表位和8个B细胞抗原表位,具有良好的免疫原性。这为布鲁氏菌病诊断和疫苗研发提供了一定理论依据。

牛型布鲁氏菌A19株外膜蛋白OMP2b的表达及鉴定

根据GenBank中的牛型布鲁氏菌基因序列,设计了1对特异性引物,以A19菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出外膜蛋白OMP2b的全长基因,将OMP2b经T-A克隆后进行了序列测定和分析。结果表明,OMP2b全长1 128bp,编码376个氨基酸。将OMP2b定向克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-OMP2b,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白His-OMP2b。SDS-PAGE分析结果显示,His-OMP2b约为93ku,与预期大小一致,表明His-OMP2b表达成功;经Wes-tern-blot分析,His-OMP2b能与牛型布鲁氏菌A19株全菌兔抗血清发生特异性反应,表明His-OMP2b具有免疫反应性。