副猪嗜血杆菌广东分离株外膜蛋白P5基因的克隆及蛋白结构预测

根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从广东省HPS分离株外膜蛋白P5基因中扩增出与预期设计的1116bp大小相符的片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,克隆出HPS广东分离株的目的基因,核苷酸长为1116bp,共编码371个氨基酸,与已发表的HPS(SH0165)外膜蛋白基因核苷酸序列同源性100%,氨基酸同源性100%。生物学预测分析结果显示,HPS外膜蛋白是一种混合型结构蛋白,含有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,其β-转角和无规则卷曲区域可能形成抗原表位;其N端含有1个信号肽,最佳切割位点在21～22个氨基酸;有15个抗原决定簇;无跨膜区;同源建模分析,未见相似三维结构。

福建省猪副猪嗜血杆菌病血清学调查及菌株ompP5基因序列分析

应用血清抗体间接ELISA方法对福建省8个地市的23个猪场采集的378份血清进行Hps抗体检测;采集疑似副猪嗜血杆菌感染病例的病料,用脱纤马血TSA平板对Hps进行分离与鉴定;用琼扩试验对分离株进行血清型鉴定;根据GenBank登录的HS0165株的ompP5基因序列合成1对特异性引物,提取分离菌株的基因组DNA进行PCR扩增,回收目的片断并进行克隆、测序和同源性分析。结果显示,福建省23个猪场的Hps场阳性率为100%,猪群阳性率为36.78%;从疑似感染Hps的猪只中共分离到52株Hps,分别为血清2型、4型、5型、13型和未定型,其中血清13型Hps分离最多;3株Hps分离株的外膜蛋白P5基因(ompP5)序列与GenBank中提交序列的同源性达到了93%以上。

副猪嗜血杆菌病疫苗新制苗菌株FS0307的毒力和OMP P5基因研究

为了进一步研究副猪嗜血杆菌FS0307株的特性,本研究对该菌株的外膜蛋白P5基因进行测序分析,并进行其对豚鼠的致病力研究。结果显示,Hps FS0307株的序列与相同血清型的国际标准株SW124的同源性为98.3%,与多数国内分离株的同源性在98%以上,与美国分离株2170B的同源性为95.6%,而与3株其他血清型国际标准株的同源性在89.5%~95.1%之间;遗传系统进化树显示与4型国内分离株SC085(HM747106)在同一分支上。且能引起豚鼠100%发病,100%死亡。说明Hps FS0307株与国内流行菌株更相似,是1株优良的副猪嗜血杆菌病疫苗的制苗菌株。

福建地区副猪嗜血杆菌的主要生物学特性

为明确福建地区副猪嗜血杆菌的耐药性、血清型及其外膜蛋白P5(OmpP5)的同源性,对来自福建地区的患病猪进行了副猪嗜血杆菌的分离与鉴定,并采用琼脂扩散试验对其进行血清型鉴定和药敏试验;选取10株不同血清型代表株进行致病性试验;测定5株不同血清型菌株的OmpP5基因序列,比较相互间的同源性及与其他生物学特性的关系。结果显示,分离株的生化特性基本一致,代表株对小鼠有一定的致病性;所有分离菌株具有一种以上的耐药性,100%的菌株对青霉素、氨苄青霉素、新霉素和洁霉素敏感,93%和87%的菌株分别对链霉素和杆菌肽耐药;分离获得的52株菌株分属于5种血清型,其中24株为血清13型,12株为血清4型,11株为血清5型,2株为血清2型,3株未定型;5株代表菌株中OmpP5基因序列的同源性在93%以上,氨基酸序列同源性在91%以上。研究表明,该外膜蛋白P5基因与菌株的血清型和菌株的致病性无直接关系。