淋球菌外膜蛋白PI基因重组子的构建和表达

目的 扩增四株淋球菌外膜蛋白 PI基因 ,构建 p ET30 b- PI- NG重组子 ,在大肠杆菌中诱导表达外膜蛋白 PI。方法 采集临床淋球菌四株 ,提取细菌基因组 DNA,PCR扩增外膜蛋白 PI基因 ,与克隆载体 p BS- T连接 ,构建 p BS- T- PI- NG重组子 ,测序 ,目的基因插入表达质粒载体 p ET30 b中 ,构建 p ET30 b- PI NG重组子 ,转化表达宿主大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,IPTG诱导蛋白质表达 ,SDS- PAGE初步分析。结果 成功构建了四株淋球菌的p ET30 b- PI大肠杆菌表达重组子 ,经 IPTG诱导表达后 ,其中三株获得表达的目的蛋白 PI。结论 本研究为 PI蛋白免疫学特性的研究、抗体制备、以及预防淋病疫苗的研制奠定了基础。

淋球菌临床分离株PI基因序列的测定与分析

目的 :分析比较 4株临床分离的淋球菌和 2株标准菌株外膜蛋白PI基因及蛋白质序列 ,初步探索我国淋球菌的变异情况 ,为淋球菌多态性研究、PI基因的表达和疫苗研制提供依据。方法 :构建pBS T PI克隆重组子并进行测序 ,用blastn和CLUSTALW分析基因和蛋白质序列的相似性 ,并与已发表的序列进行比较 ,预测并分析所得PI基因的loop (表面暴露区域 )结构。结果 :在GenBank中搜索到相似性大于 98%的序列 ,6条序列分别属于PIA和PIB两个亚型 ,其中PI 4的序列与GenBank中的相应序列有 18个位点的差异 ,可能为我国特有的流行株。位于 7个loop结构中的变异位点占 3条PIA蛋白间总变异的 6 7% ,占 3条PIB蛋白间总变异的 84 % ,变异程度较高。结论 :成功克隆了临床分离的淋球菌株和标准菌株的PI基因并进行序列分析 ,为深入研究我国流行的淋球菌菌株的多态性、PI基因的表达和疫苗研制奠定了基础。