“外转内”背景下浙江商贸流通业态结构优化与升级

自2008年以来,面对全球经济危机,欧美等发达国家经济下滑,依靠外单生产加工为主的浙江外销制造业企业面临利润缩水与发展转型,即许多外贸制造业企业已经试着将市场关注重点由外销转为内销,简称"外转内"。基于"外转内"背景,文章对浙江商贸流通业态结构构建了优化、整合与升级的模型和路径,并提出优化与升级的对策,这在一定程度上对解除浙江外销制造业企业产品的营销困境有转嫁与促进作用,对浙江整体商贸流通业结构的优化与升级有重要的现实意义。

“外转内”时代下我国商贸流通业态的结构及优化升级

近年来,在人民币不断升值、贸易壁垒日趋严峻等形势的影响下,我国商贸流通业在出口方面受到了明显的挑战,不少商贸流通企业开始积极寻求"外转内"转型战略。面对"外转内"的迫切要求,在此环境背景下如何优化升级我国商贸流通业态结构,是当前商贸流通业的关注重点。本文即从内与外两方面对商贸流通企业"外转内"原因进行分析,并对"外转内"背景下我国商贸流通业态现状进行了阐述,提出优化升级我国商贸流通业态结构的对策。

稳住外贸外资“杀手锏”Ⅱ:打通加工贸易外转内“堵点”

加工贸易在我国经济发展、产业升级、劳动就业等方面发挥着重要作用。受世界范围内的新冠肺炎疫情大肆流行影响,外贸加工企业面临的出口订单大量减少或取消,而同时原料又进不来,其出路何在?4月10日,国务院联防联控机制举办的新闻发布会上传出的消息,为外贸加工企业外转内打通"堵点"带来了政策红利并指明了方向。这也是我国为稳住外资外贸祭出的第二大"杀手锏"。

疫情前后转外就医变化及原因分析

目的:分析某地级市三甲医院疫情前后转外就医变化,并对原因进行分析,提出合理化建议。方法:采用回顾性调查研究方法、对比分析法,描述分析2017-2019年与2020-2022年转外就医人次、转出科室、转外就医地点、外转病种等情况。结果:2020-2022年较2017-2019年转外就医人次、转外病种减少,转外病种变化明显,转外科室和转外地域无明显变化。结论:疫情影响转外就医频次和病种,疫情期间患者一般疾病选择区域内诊疗,但疫情对部分肿瘤患者,尤其恶性肿瘤转外就医影响程度不大。

脂质体介导外源基因体外转染牛胎儿成纤维细胞条件的优化

通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。

用于体外基因转染的氨基硅烷Fe_3O_4复合纳米粒子的合成及表征

利用2-吡咯烷酮和乙酰丙酮铁为原料制备Fe3O4磁性纳米颗粒,用XRD和TEM对样品进行了表征.选择偶联剂γ-氨丙基三乙氧基硅烷[NH2C3H6Si(OC2H5)3]对纳米粒子进行表面修饰,制得APTTS/Fe3O4复合载体材料.以此复合粒子作为传递载体,将CD基因转染U251胶质瘤细胞.采用RT-PCR,Western blot及免疫荧光等方法检测CD基因的表达及功能.结果表明,制备的Fe3O4颗粒粒径为8～10nm,结晶度较高;经表面修饰后,粒子表面负载—OH,—NH,—NH2,—C—O和—C—OH等多种功能基团.DNA结合分析及DNase-I消化结果表明,APTTS/Fe3O4粒子能够有效地结合和保护DNA.体外细胞转染实验证实,该复合纳米颗粒能够高效地传递CD基因进入U251胶质瘤细胞内,并进行稳定表达.

阳离子膜融合脂质体包裹DNA体外转染和稳定性研究

目的 研究阳离子膜融合脂质体包裹DNA的体外稳定性以及体外细胞转染。方法 采用表达E .coilβ 半乳糖苷酶的pSV4 0 β报告基因质粒及组化染色评价阳离子膜融合脂质体的转染效率。用DNase 1考察阳离子膜融合脂质体的体外稳定性。结果 当阳离子膜融合脂质体 (CFL)及阳离子脂质体 (CL)与DNA电荷比为 (2∶1)时 ,CFL的转染效率为 (4 2 .3±4 .3) % ,明显高于CL的转染效率 (2 3.9± 2 .1) % ,且有很较高的稳定性。结论 CFL可作为载体有待进一步研究。

单胎臀位妊娠行外转胎位术的影响因素及妊娠结局分析

目的分析单胎臀位行外转胎位术的影响因素及妊娠结局。方法收集产检单胎臀位妊娠的102例患者临床资料,比较胎头外倒转成功者(成功组)与胎头外倒转失败者(失败组)产妇的年龄、外倒转孕周、孕前BMI、孕期BMI增加、产次、羊水深度、胎盘位置、脐带绕颈等危险因素,以及外转胎位术后妊娠结局(包括分娩的间隔、孕周、方式和新生儿pH值、黄疸、转儿科ICU、早产等差异。结果 102例中,成功63例(61.8%),失败39例(38.2%),成功组与失败组患者的年龄、实施外转胎位术的孕周、孕前BMI、孕期BMI增加、产次、羊水深度、胎盘位置、脐带绕颈及新生儿体质量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。与失败组比较,成功组患者的分娩间隔和分娩孕周均较长、阴道顺产率较高(P均<0.05)。2组新生儿的pH值、黄疸和转科率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论对单胎臀位妊娠实施外转胎位术,可增加阴道顺产率,降低剖宫产率。

载报告基因壳聚糖纳米粒制剂体外转染活性考察

目的 考察壳聚糖纳米粒体外基因转染活性及壳聚糖纳米粒经表面修饰的体外转染活性变化。方法 用复凝聚法制备纳米粒 ,透射电镜观察粒子形态 ,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性 ,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察递送不同剂量的基因和转染后不同时间的转染效率 ,寻找本递送系统较好的转染条件。用纳米粒表面连接PEG以及半乳糖基白蛋白 ,对纳米粒进行修饰 ,通过体外转染实验 ,评价表面修饰对其转染活性的影响。结果 未经表面修饰的载基因纳米粒能够转染人胚胎肾细胞 (HEK2 93)和肝癌细胞 (HepG2 ) ,但转染效率仍不如脂质体转染试剂 ,且在转染实验后约 72h较高 ,递送基因较佳的剂量是 4 μg ,在以上两种细胞中 ,转染效率也不同。经PEG表面修饰的纳米粒仍保持纳米粒的体外转染活性。连接半乳糖基牛血清白蛋白的纳米粒转染活性却反而略有下降。结论 壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内 ,并且报告基因能在细胞内表达。因此 ,可以用作基因递送的载体系统 ,值得进一步研究。经PEG表面修饰和冷冻干燥处理 ,保持生物活性 ,为基因药物制剂化的可能性提供了证据。对于靶向配基的选择 ,宜继续进行筛选。

臀高仰卧位联合口服舒喘灵后B超引导下行外转胎位的临床研究

目的评价臀高仰卧位联合口服舒喘灵后B超引导下行外转胎位术纠正臀位与传统纠正臀位方法的临床效果。方法将300例患者随机分为两组,对照组采用传统的平卧位行外转胎位术;研究组采取臀高仰卧位联合口服舒喘灵后B超引导下行外转胎位术。记录两组的纠正成功率。结果研究组纠正成功率为94.7%,对照组为71.3%,差异有统计学意义(χ2=28.93,P<0.01)。结论臀高仰卧位联合口服舒喘灵后B超引导下行外转胎位术,不仅能够提高转胎位成功率,减少孕妇施术中的痛苦,而且能够随时监测施术效果,保证母婴安全,值得临床应用推广。

外能源转管机枪间歇制高功率密度永磁电机设计

外能源转管武器的驱动电机是一种具有短时高过载的特种电机,提高其功率密度有利于武器系统的最小化和一体化设计。通过分析不同射频下转管自动机与供输弹阻力矩测试数据,结合自动机短时间歇制工作特点,确定了电机初始设计参数;利用电磁仿真软件Maxwell建立了12槽10极电机模型,通过多参数匹配的方式对磁路结构、定子槽参数、永磁体结构进行优化设计,降低了转矩波动;分析电机工作点的铁心磁密与定子铁心的饱和磁密,提高电机过载能力和功率密度。研究结果表明:数值模拟结果与试验数据吻合较好,验证了仿真模型的可靠性;设计电机转速为5000 r/min最大输出功率为16.3 kW,峰值功率密度可达5.8 kW/kg,在1000~3000发/min的射频下,自动机的启动速度可以达到200 ms左右,在稳定射频下的转速波动小于10%。

明胶-多聚乙烯亚胺-DNA复合物的构建及对细胞的体外转染

[目的]探讨多聚乙烯亚胺(PEI)-DNA复合物的制备方法及对细胞的体外转染率.[方法]将带有阳离子的明胶a和带有阴离子的明胶b分别与PEI-DNA复合物混合孵育,得到明胶a-多聚乙烯亚胺-DNA(GPDa)和明胶b-多聚乙烯亚胺-DNA(GPDb).用激光粒度仪测定GPDa,GPDb的zeta电位,并用荧光蛋白测定仪观察对C 3小鼠子宫癌细胞及Hela人子宫癌细胞的转染率.[结果]GPDa复合物的zeta电位随明胶a用量的增加而升高,而GPDb复合物的zeta电位则随明胶b用量的增加而降低.GPDa复合物对C 3小鼠子宫癌细胞和Hela人子宫癌细胞的转染率比阳性对照组高15%～20%;GPDb复合物对C 3小鼠子宫癌细胞的转染率随明胶b用量的增加而升高,而对Hela人子宫癌细胞的转染率则随明胶b用量的增加而降低.[结论]GPDb复合物对C3小鼠子宫癌细胞具有靶向性.

成人大角度外斜视术后侧转运动及单眼注视野的临床研究

目的对成人大角度外斜视患者术后眼位、双眼视功能、单眼注视野及侧转运动进行评估,以明确手术的安全性和满意度。方法收集2017年1月-2019年7月在我院符合要求的成人大角度外斜视共38例连续患者,其中29例行双眼外直肌后徙+内直肌缩短术,9例行单眼外直肌后徙+内直肌缩短术,并在术前、术后1.5m、6m对其进行眼位、双眼视功能、眼球侧转运动及单眼注视野的测量。结果末次随访时眼位正位率为81.58%,与术前相比,术后1.5m和6m双眼融合功能及立体视功能均有所改善(P<0.05),术前单眼注视野为(51.42±3.30)°,术后1.5m单眼注视野(42.21±4.47)°,术后6m单眼注视野(44.12±5.13)°。对三组单眼注视野进行比较,差异有统计学意义(F=28.54,P=0.00),侧转运动检查显示有78.94%患者术后出现2级以下的运动不足,末次随访时有2例在侧转时出现复视。结论对于成人大角度外斜视行超常量退截手术量,在对眼位和双眼视觉有良好恢复效果的同时,也需考虑到侧转复视和单眼注视野缩小的可能。

鸡胚精原细胞体外转染EGFP方法的比较

以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)为报告基因体外转染鸡胚胎精原细胞(Chicken embryonic spermatogonial cells,CESCs),比较磷酸钙、脂质体(梭华-Sofast)、电穿孔3种方法转染EGFP的效率,以获得高效的体外转染方法。本研究分离孵化16 d的鸡胚睾丸,获取CESCs,体外培养和传代扩增,传至第2代后进行碱性磷酸酶(AKP)活性和阶段特异性表面抗原-1(Stage specific embryonic antigen-1,SSEA-1)免疫荧光鉴定。运用磷酸钙、脂质体(梭华-Sofast)、电穿孔3种方法体外转染第2代CESCs,荧光细胞计数法分析转染效率。结果表明:与磷酸钙法、脂质体法相比,电穿孔法可获得更高的细胞成活率和转染率(68%vs39%、65%,19.70%vs2.92%、9.73%),差异显著(P<0.05)。因此得出,电穿孔法是将外源基因导入鸡胚精原细胞的适宜方法。

体外转染NHE-1核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 :探讨锤头状核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞Na+ /H+ 交换器 1 (NHE 1 )表达和活性、pHi的影响 ,及其与细胞增殖的关系。方法 :构建含锤头状核酶序列的 pLXSN反转录病毒重组载体 ,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,G41 8筛选后获取含有重组载体的细胞克隆 ,检测细胞NHE 1mRNA表达、2 2 Na摄取量、pHi和3H TdR掺入量。结果 :与转染 pLXSN空载体的细胞和正常对照组细胞比较 ,转染重组载体的肺动脉平滑肌细胞中NHE 1mRNA表达、2 2 Na摄取量减少 ,同时伴有 pHi降低和3H TdR掺入量减少 ,正常对照组和空载体组间无显著差异。结论 :NHE 1特异性锤头状核酶可对NHE 1mRNA进行特异性切割 ,减少其表达 ,从而诱导细胞酸化 。

pcDNA3.1(-)/tPA-交联明胶微球复合物体外基因转染的实验研究

目的:检测交联明胶微球结合和缓释pcDNA3.1(-)/tPA的能力及其转染体外培养人脐静脉内皮细胞的瞬时转染效率。方法:采用紫外分光光度法检测交联明胶微球结合pcDNA3.1(-)/tPA的最大包封率和体外缓释规律;采用免疫荧光染色法检测pcDNA3.1(-)/tPA-交联明胶微球复合物缓释的pcDNA3.1(-)/tPA转染内皮细胞的瞬时转染效率。结果:交联明胶微球能有效结合pcDNA3.1(-)/tPA,最大包封率为62.75±3.31%;且在体外能持续缓释质粒DNA超过4周。pcDNA3.1(-)/tPA-交联明胶微球复合物缓释的pcDNA3.1(-)/tPA能被转移进入人脐静脉内皮细胞中并有效表达,瞬时转染效率为12.74±2.53%。结论:交联明胶微球能良好结合和缓释pcDNA3.1(-)/tPA,并能成功进行体外基因转染。

bFGF基因体外转染兔骨髓间充质干细胞及对其增殖的影响

目的:观察bFGF基因体外转染兔骨髓间充质干细胞(bMSCs)后细胞目的基因的表达及对其增殖的影响。方法:将兔骨髓来源的间充质干细胞分离培养扩增,用PCR扩增法获得绿色荧光蛋白-bFGF基因重组质粒,转染间充质干细胞,用荧光显微镜观察转染后绿色荧光蛋白基因的表达,计算转染率,用MTT检测转染细胞的增殖特性。结果:实验成功地构建了绿色荧光蛋白-bFGF基因重组质粒,倒置荧光显微镜下观察到转染后的bMSCs发出稳定的绿色荧光信号,转染率为(43.32±4.51)%,MTT法显示重组质粒组增殖速度显著高于空白质粒组和未转染细胞组(P<0.05)。结论:运用转染的方法实现了两种基因在MSCs中的共同表达,为监控MSCs细胞的转染和表达过程提供了一种手段。为后期利用MSCs细胞进行组织工程骨组织制造和移植提供了规范化的监控和程序化生产手段。

心肌肥厚大鼠心肌细胞核体外转录活性和RNA核孔转出的变化

目的研究大鼠心肌细胞核体外转录活性、RNA核孔转出和核外Ca2+浓度([Ca2+])对其的影响,以探讨心肌重塑时核Ca2+在其中的作用和意义。方法制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型、差速离心和密度梯度离心提纯心肌细胞核,同位素掺入法分析心肌细胞核体外转录活性和RNA核孔转出。结果腹主动脉缩窄术后4周大鼠心肌显著肥大,伴有明显的血流动力学异常。与正常对照组比较,腹主动脉缩窄心肌肥厚组细胞核体外转录活性和RNA核孔转出明显增加。在核外[Ca2+]大于10-4mol/L时,转录活性和RNA核孔转出发生显著变化(P<0.05)。结论压力超负荷心肌肥厚发生时,细胞核体外转录活性上调,RNA核转出量增加,可能在介导基因表达异常中起重要作用。

TPA基因体外转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨组织型纤溶酶原激活因子(tPA)基因体外转染对鼠血管平滑肌细胞(VSMC)黏附、增殖和迁移的影响,为tPA基因在预防移植血管再狭窄中的应用奠定理论基础。方法通过阳离子质体介导,将tPA基因转染体外培养鼠血管平滑肌细胞,RT-PCR、Western-Blot及ELSIA检测转基因平滑肌细胞基因表达,底物发色法检测转基因VSMC纤溶活性变化,MTT、细胞黏附、细胞迁移实验等方法,检测体外转染tPA基因对血管平滑肌细胞黏附、增殖和迁移的影响。结果RT-PCR和Western-Blot检测到转基因血管平滑肌细胞tPA基因转录及蛋白表达,转基因组、载体组和空白对照组tPA含量分别为(518.38±125.32)ng/106cells/24h、(12.53±4.27)ng/106cells/24h和(13.21±5.02)ng/106cells/24h,转基因组明显高于各对照组;转基因组tPA活性为(26.6±7.02)IU/106cells/24h,而载体组和空白对照组没有检测出tPA活性。转基因平滑肌细胞和对照组相比,其细胞的增殖、黏附和迁移能力没有明显变化。结论转tPA基因血管平滑肌细胞纤溶活性增高,但对血管平滑肌细胞的黏附、增殖和迁移能力没有影响。

壳糖体外介导血管平滑肌细胞内皮型一氧化氮合酶基因转移的初步研究

目的探讨壳糖作为非病毒载体介导质粒体外转染哺乳动物平滑肌细胞的可行性、转染效率及影响转染效率的因素。方法用壳糖包被携带绿色荧光蛋白(GFP)基因和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的质粒PAdTrack-CMV-eNOS,制备壳糖/质粒复合体(CPC-eNOS),在不同条件下将其和Wistar大鼠血管平滑肌细胞孵育,通过检测靶细胞是否表达GFP和eNOS,评价壳糖介导质粒转染的效率。并以裸质粒PAdTrack-CMV- eNOS和重组腺病毒表达载体Ad-eNOS分别作为对照。结果荧光显微镜下472nm观察,CPC-eNOS和重组腺病毒表达载体Ad-eNOS孵育的血管平滑肌细胞均观察到绿色荧光,Western印迹法检测均有eNOS蛋白表达,但裸质粒PAdTrack-CMV-eNOS组均为阴性。CPC-eNOS中氨基/磷酸基比值(N/P比值)为5、pH值为7.0时,对平滑肌细胞的转染效率最高。结论CPC-eNOS能够体外介导转染哺乳动物的血管平滑肌细胞。转染效率与CPC-eNOS的N/P比值和转染介质pH值有关。