多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究

目的 开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 选择小鼠精子 /睾丸特异性抗原SP1 7、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架 ,按一定连接方式设计、合成新抗原 35肽 ,并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB/C小鼠。结果 在 430A固相自动肽合成仪上成功地合成 35肽 ,并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达 95 %以上 ;免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达 1∶6 0 0 0 ,阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达 1∶30 0 ;小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达 50 %左右 ,淋巴细胞分泌的INF γ和IL 4分别为 60、1 0 8μg/ml;实验组BALB/C雌鼠妊娠率平均降至 60 % ,每胎产仔数平均降低 58%～71 %。结论 含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫 ,并使小鼠受孕率下降 。

A组轮状病毒多个结构蛋白抗原表位的串联表达及其免疫原性的检测

从北京腹泻婴儿粪便提取的轮状病毒(rotavirus,RV)(T114株)的RNA中,克隆到轮状病毒结构蛋白基因vp4,vp6和vp7的全长cDNA,对它们编码的蛋白质序列和可能的抗原表位肽进行了预测,选择了RV主要抗原蛋白VP7、VP6和VP4的4个抗原表位肽,通过人工合成DNA的方式将这些抗原表位肽基因串联融合成一个阅读框RME(rotavirus multipleepitopes,RME)并构建原核表达载体.大肠杆菌表达的RME在ELISA反应中可被RV多克隆抗体识别,纯化的RME蛋白注射免疫小鼠可诱导特异性免疫应答,产生高滴度的同源氨基酸序列特异抗体和人RV抗体,其中针对RME的IgG抗体滴度达到l∶40 000,针对单个抗原表位EV7、EV6和EV4的IgG抗体滴度达l∶10 000～l∶20 000,针对RV Wa株的IgG抗体滴度较低为l∶2 500,但能特异地中和该病毒对MAC145细胞的侵染.上述结果为新型RV基因工程疫苗的研发提供了论据和基础.

乳糖诱导重组多价人精子表位肽在大肠杆菌中的表达

旨在研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组多价人精子抗原表位肽的表达及诱导表达的优化条件。在摇瓶发酵条件下,通过改变培养基组成、诱导时机、诱导温度、诱导剂浓度、诱导时间和诱导方式等条件,利用SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统,研究以上条件改变对GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白表达量的影响,并与IPTG诱导结果相比较。结果显示,在摇瓶试验中,最优表达条件为选用TB培养基,在菌体对数生长的中期进行诱导,诱导温度37℃、乳糖诱导终浓度3 mmol/L、诱导时间6 h。GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的30.5%,且主要以可溶形式表达,与IPTG的诱导结果相同。分批流加乳糖和一次性加入乳糖诱导,效果一样。乳糖可以替代IPTG作为诱导剂诱导GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白的表达,优化条件下可获得与IPTG相同的诱导表达效果。