肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗的研制及其在幼小鼠体内诱导的免疫应答

目的研制肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗,并通过幼小鼠的动物实验检测其免疫原性。方法用19F 型肺炎球菌多糖以氨基还原法分别与牛血清白蛋白及鸡卵清蛋白偶联结合,以凝胶柱纯化,加入铝佐剂制备成疫苗,然后分别以3种不同多糖含量的结合疫苗腹腔接种3wk 龄幼小鼠,每隔2wk 复种一次,接种3次后采血。多糖对照组幼小鼠以19F 型肺炎球菌多糖疫苗接种,阴性对照组以0.15 M PBS 接种。用 ELISA 法检测动物血清中抗肺炎球菌多糖抗体水平。结果经层析后肺炎球菌多糖蛋白结合物的 OD 峰值较多糖及载体蛋白的各自峰值均明显前移,以多糖含量分别为0.25μg、1.0μg、4.0μg的结合疫苗接种的3组幼小鼠血清中抗肺炎球菌多糖抗体平均滴度分别为1:400、1:800、1:1600,多糖对照组为1:50(P<0.05)。结论已建立制备肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗的方法,该疫苗能在幼小鼠体内引起明显的免疫应答。

细菌性多糖-蛋白质结合疫苗的免疫学

本文对细菌性表面多糖 (CPS ,O SP)的免疫原性、影响多糖免疫原性的因素、多糖 蛋白质的免疫学机理进行了综述。

11价肺炎链球菌多糖-蛋白D结合疫苗在婴儿中的免疫原性和安全性[英]Narkka A…／／Pediatr Infect Dis J．

在过去的10年中，对于一系列以不同蛋白和多糖作为载体的多糖．蛋白复合物型抗肺炎链球菌疫苗的研究表明，在众多的疫苗中，只有1种带有CRM197载体蛋白的7价疫苗(PncCRM)能够有效地阻止致病性肺炎链球菌的感染。在欧美地区，这种疫苗广泛应用于高危人群，但其血清型是4、6B、9V、14、18C、19F和23F，缺少了亚洲等众多发展中国家普遍存在的血清型1和5。为了有效地抑制更多型别的肺炎链球菌，

破伤风类毒素-细菌多糖结合疫苗中载体蛋白识别的结构性标志物

细菌性脑膜炎的全球负担主要是由于奈瑟脑膜炎球菌和肺炎链球菌的侵袭性感染造成的。发达国家在1987年引入b型流感嗜血杆菌（Hib）结合疫苗前,Hib是许多细菌性脑膜炎的病因。Hib结合疫苗降低了Hib发病率达80%或更多,这依赖于疫苗的普及程度。单价脑膜炎球菌C群（Men C）疫苗于1999—2000年上市,在英国降低了由Men C引起的侵袭性脑膜炎球菌病90%以上。

不同剂量肺炎链球菌荚膜多糖与蛋白结合物的免疫原性比较

用肺炎链球菌 19F型、2 3F型的荚膜多糖 (C PS)分别和破伤风类毒素 (TT)蛋白结合 ,制备了两个型别的多糖 蛋白结合物 (19F TT ,2 3F TT)。为探讨结合物的最适免疫剂量 ,以 10 μg多糖和含 1μg、3 μg、9μg、2 7μg多糖的结合物经腹腔免疫NIH小鼠 ,ELISA方法检测小鼠血清中多糖和含不同多糖的结合物所产生的特异性IgG抗体。结果在不同的剂量免疫小鼠后 ,3 μg剂量组在免疫三针后可诱生高浓度的抗体 ,但随着免疫剂量的增加 ,9μg与 2 7μg诱生的抗体浓度较 3 μg诱生的抗体浓度之间并无显著性差异。含多糖 3 μg的 19F型和 2

基于NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路探讨萝卜硫素对脂多糖诱导的小鼠肺炎的改善作用

目的探讨萝卜硫素对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺炎的改善作用及核苷酸结合域样受体蛋白(NLRP)3/白细胞介素(IL)-1β/转化生长因子(TGF)-β1信号通路的影响。方法ICR小鼠随机分为对照组、模型组、萝卜硫素组(腹腔注射20 mg/kg的萝卜硫素)、抑制剂组(腹腔注射50 mg/kg的NLRP3通路抑制剂)、萝卜硫素+激活剂组(腹腔注射20 mg/kg萝卜硫素、1.5 mg/kg的NLRP3通路激活剂),每组10只,除对照组滴入相同体积的生理盐水,其余各组均滴鼻LPS(2 mg/kg)构建肺炎模型,造模成功后24 h开始药物干预,对照组、模型组腹腔注射等量生理盐水,每天干预1次,连续干预1 w。血气分析仪测定各组动脉血氧分压(PaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))值,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清、肺泡灌洗液中炎症因子水平,计数肺泡灌洗液中炎症细胞数量,计算肺湿/干比,苏木素-伊红(HE)染色检测各组肺组织病理变化,以Western印迹检测肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组肺组织受损严重,PaO_(2)值显著降低,PaCO_(2)、肺湿/干值、血清及肺泡灌洗液中炎症因子水平、炎症细胞数量、肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路相关蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,萝卜硫素组、抑制剂组肺组织损伤得到缓解,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、肺湿/干值、血清及肺泡灌洗液中炎症因子水平、炎症细胞数量、肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路相关蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与萝卜硫素组相比,萝卜硫素+激活剂组肺组织损伤加重,PaO_(2)值显著降低,PaCO_(2)、肺湿/干值、血清及肺泡灌洗液中炎症因子水平、炎症细胞数量、肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路相关蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论萝卜硫素对LPS诱导的小鼠肺炎具有一定的改善作用,可能是通过抑制NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号通路实现的。

23F型肺炎球菌多糖与CRM197蛋白结合物制备及特性研究

目的采用改良胺化还原法,白喉无毒突变体CRM197蛋白作为载体,制备23F型肺炎球菌多糖蛋白结合物。方法在还原胺法的基础上,以1,6-己二酰肼(ADH)为分子臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下衍化CRM197蛋白,衍化后蛋白再与多糖上的醛基反应,形成共轭结合;采用高效液相色谱技术(HPLC)、免疫扩散等方法分析结合物,并将获得的结合物免疫NIH小鼠,用ELISA方法检测多糖IgG水平。结果 HPLC图谱和免疫扩散检测结果证明了结合物的获得;动物免疫产生了较多糖高的抗23F肺炎多糖抗体,并有免疫记忆发生。结论采用改良还原氨化法可以制备出动物免疫原性良好的23F型多糖蛋白结合物。

液相色谱-质谱联用技术在疫苗分析中的应用

近年来,疫苗领域迎来了快速发展期,同时也面临着最严格的监管。与一般药品不同,疫苗主要用于预防,面向健康人群,婴幼儿是重要的接种人群,其质量直接关系着公众的生命安全。疫苗的研发及质量评价工作极具挑战性,为此,对其相应的分析技术也提出了更高的要求。质谱技术是目前最为重要的分析技术之一,其既可提供分子质量和结构等方面的信息,也可采用内标法或外标法对目标化合物进行定量分析,广泛应用于生物制品的早期发现、研发及生产等环节。本文结合多篇已发表的文献或技术文章,详细概述了液相色谱-质谱联用技术在疫苗分析中的应用,包括重组蛋白疫苗、病毒疫苗、多糖蛋白结合疫苗、核酸疫苗及辅料和佐剂的质量控制,以期为新型疫苗的研发和质量控制提供有效的分析方法。

肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗中4-二甲氨基吡啶残留量高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗中4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,DMAP)含量检测的高效液相色谱(HPLC)法,并对该方法进行验证。方法通过对色谱柱类型、流动相组成的优化建立检测肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗中DMAP残留量的HPLC法,对该方法进行专属性、准确度、重复性和重现性验证,并确定检出限、定量限及线性范围。用建立的方法检测13种不同血清型的肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗及1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟化硼(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化肺炎球菌多糖中间产物中DMAP残留量。结果优化后的色谱条件:色谱柱为Sepax HP-C18(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为5 mmol/L庚烷磺酸钠溶液(含20 mmol/L磷酸二氢钾,磷酸调pH至3.0)∶乙腈=87∶13(V/V);检测波长为280 nm;流速为1 mL/min;进样体积为10μL;柱温为35℃。该方法不受供试品机制和前处理溶剂的干扰,专属性好;检出限和定量限分别为3.6和14.4 ng/mL,在0.05~10μg/mL范围内线性良好,R2=0.9999;加标回收率为83%~105%,重复性RSD为0.28%~0.72%,重现性RSD为7.38%。13种不同血清型肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗中DMAP残留量为0.135~1.635μg/mL;CDAP活化肺炎球菌多糖第一步中间产物即可检测出DMAP,未检测到CDAP。结论建立的HPLC法操作简便,专属性、准确度、重复性和重现性均较好,可作为肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗质量控制的有效检测方法。

以蛋白为基础的新型肺炎球菌疫苗的安全性、反应原性和免疫原性:Ⅰ/Ⅱ期随机临床研究

背景：含有高度保守的肺炎球菌蛋白,例如肺炎链球菌溶血素类毒素（d Ply）和三联组氨酸蛋白D（Pht D）都正被开发出来以期提供抗肺炎球菌病的保护。这项研究评价了不同的含肺炎球菌蛋白的疫苗配方制剂的安全性、反应原性和免疫原性。试验在成人中进行。方法：在Ⅰ期双盲临床试验中,健康成人（18~40岁）被随机（1∶2∶2∶2∶2∶2∶2）分组,按2个月间隔，接受6种待测疫苗配方制剂中的一种制剂。

含有PspA家族1和2的双价结合疫苗具抗广谱肺炎链球菌菌株和伤寒沙门菌的潜力

先前作者发现,无需添加佐剂,肺炎球菌表面蛋白A（PspA）与伤寒沙门菌Vi荚膜多糖结合可增强抗PspA的免疫应答。目前研究由PspA家族1或2的α螺旋区结合到Vi多糖组成结合物用于免疫小鼠,以检测它抗静脉注射的能致死的肺炎链球菌各种菌株的能力。包含PspA家族1成分的结合疫苗对PspA家族1菌株的攻击提供了良好的保护作用,但对PspA家族2菌株的攻击没有保护作用。

多价肺炎链球菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗的研究进展

肺炎链球菌是人类致病率及死亡率极高的致病菌之一,严重威胁人类的生命健康。肺炎链球菌荚膜多糖具有良好的免疫原性,可激发机体产生保护性抗体,但单纯的荚膜多糖疫苗不能诱导产生免疫记忆抗体,将多糖与载体蛋白结合后可诱导产生记忆性抗体,有效提高疫苗的免疫原性,预防肺炎链球菌入侵性疾病。目前,7、10及13价肺炎链球菌多糖-蛋白结合疫苗(简称肺炎结合疫苗)已相继问世,15及20价肺炎结合疫苗处于临床研发阶段。本文就肺炎结合疫苗研发、制备方法、免疫原性影响因素及国内接种情况等方面的研究进展作一综述。

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌是引起全球所有年龄组高发病率和病死率的主要病原菌，其疫苗的研制和使用对肺炎链球菌感染的防治具有重要意义。目前临床投入使用的肺炎链球菌疫苗主要有23价荚膜多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗，两者都具有一定的效力和良好的安全性，但也存在许多局限性。其他肺炎链球菌多价多糖蛋白结合疫苗、蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗等也在研制和开发中。

肺炎链球菌疫苗研制进展

肺炎链球菌导致的疾病已成为全球一个重要的公共卫生问题。疫苗开发及使用成为重要的预防策略,目前肺炎球菌疫苗主要有多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗二类。对肺炎链球菌病原学、流行病学、所致疾病、疫苗研发进展及疫苗使用情况进行了综述。

肺炎球菌疫苗进展

人们对肺炎球菌的认识始于 19世纪 80年代初期 ,1911年开始用肺炎球菌疫苗来预防肺炎球菌性疾病。迄今已发现 90余个不同的肺炎球菌的菌型 ,但仅有少数是引起疾病的。本文对肺炎球菌疫苗的研究进展作一简要综述 ,主要包括全菌体疫苗 ,荚膜多糖疫苗 ,以及荚膜多糖 蛋白结合疫苗的研究进展概况。

九价肺炎链球菌荚膜多糖-蛋白质结合制剂对小鼠免疫应答的影响

肺炎链球菌荚膜多糖是主要致病抗原。根据荚膜多糖的抗原性分为不同的血清型，共有90个血清型，近30个血清型对人有致病性，可引起肺炎、中耳炎、脑膜炎等多种疾病，肺炎链球菌是导致婴幼儿、儿童和老人发病及死亡的重要原因。因此研发多糖蛋白结合疫苗以预防由该菌引起的疾病颇为重要。本研究通过选用单价含1、2、4μg多糖的九价肺炎链球菌多糖蛋白结合疫苗分别免疫NIH小鼠，采血后检测鼠血清中抗多糖IgG抗体的滴度，以比较九价肺炎链球菌结合疫苗的免疫剂量对NIH小鼠的免疫应答的影响。

从“质量源于设计”角度浅谈多糖-蛋白结合疫苗药学研发的考虑

多糖-蛋白结合疫苗生产工艺步骤多且涉及多步化学反应,产品结构复杂,关键质量属性极大程度依赖于早期研发确定的生产工艺。本文基于"质量源于设计(Qb D)"的理念,围绕对多糖-蛋白结合疫苗关键质量属性的分析和认识,讨论如何在早期研发阶段筛选出适宜的生产工艺、在临床验证中建立适宜的质量标准。

不同载体蛋白对18C型肺炎多糖结合疫苗稳定性影响的比较

目的比较以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)及破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)作为载体蛋白对18C型肺炎多糖结合疫苗稳定性的影响。方法采用点击化学法分别以BSA及TT作为载体蛋白制备18C型肺炎多糖结合疫苗。将2种疫苗在2~8℃条件下保存2、4、8个月,考察疫苗稳定性;分别于(25±2)℃条件下保存2、4、6周及(37±2)℃条件下保存7、14、21 d,考察疫苗的加速稳定性。每个时间点样品均进行外观检查、多糖含量、蛋白含量、pH测定、无菌检查及游离多糖含量测定。结果以TT及BSA作为载体蛋白制备的结合疫苗各项稳定性指标均符合《中国药典》三部(2010版)的相关要求,其中不同温度部分检测时间点结合物Ps-TT的游离多糖含量显著低于Ps-BSA(P<0.05)。结论 TT作为载体蛋白制备18C型肺炎多糖结合疫苗的稳定性明显优于BSA。

成人接种13价肺炎球菌多糖结合蛋白疫苗与23价肺炎球菌多糖疫苗的免疫原性及安全性差异的Meta分析

目的评价成人接种13价肺炎球菌多糖结合蛋白疫苗(PPCV13)与23价肺炎球菌多糖疫苗(PPSV23)的免疫原性与安全性差异。方法检索美国国家医学图书馆数据库(NCBI)和Cochrane协作网图书馆等数据库,将比较PPCV13和PPSV23的免疫原性和安全性的随机对照研究(RCT)纳入分析。合并计算抗菌调理吞噬活性的几何平均滴度(GMT)的比值(GMTR)和各类不良反应发生的相对危险度(RR)。结果共纳入5篇RCT文献,PPCV13组在接种1个月后针对10个血清型(1、4、5、6A、6B、9V、18C、19A、19F、23F)的GMT水平显著高于PPSV23组(P均<0.05);接种PPCV13和PPSV23,14 d后总体局部反应发生率并无显著差异(RR=1.08,95%CI:0.95~1.24),总体全身反应发生率并无显著差异(RR=0.97,95%CI:0.91~1.04)。结论成人接种PPCV13与PPSV23的安全性无显著差异,但接种PPCV13可以产生更好的免疫应答效果。