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宁夏布鲁氏菌多位点串联重复序列分型研究 被引量:4
1
作者 马学平 高建炜 +6 位作者 韩坤 杨聪 海娥 朴东日 姜海 崔步云 赵建华 《宁夏医学杂志》 CAS 2020年第5期397-401,共5页
目的分析宁夏布鲁氏菌多位点串联重复序列分型特征。方法采用传统细菌学和分子生物学方法鉴定菌株,对16个可变数目串联重复序列位点进行PCR扩增,产物经毛细管电泳测序,生物信息学软件Bio Numerics进行聚类分析。结果经细菌学和分子生物... 目的分析宁夏布鲁氏菌多位点串联重复序列分型特征。方法采用传统细菌学和分子生物学方法鉴定菌株,对16个可变数目串联重复序列位点进行PCR扩增,产物经毛细管电泳测序,生物信息学软件Bio Numerics进行聚类分析。结果经细菌学和分子生物学方法鉴定近期宁夏人群感染分离44株布鲁氏菌均为羊种布鲁氏菌,对选取的20世纪分离的24株菌重新鉴定结果为羊种12株、牛种3株和猪种9株。多位点串联重复序列分析方法(MLVA)分型结果显示,68株菌被分为8大基因群39个基因型,并将羊种、牛种和猪种布鲁氏菌分成3个基因群,其中56株羊种菌分为33个基因型,基因型存在地域性分布特点,同一基因型的部分菌株具有流行病学关联。结论 MLVA分型方法能将布鲁氏菌在种的水平上区分,宁夏感染人体布鲁氏菌具有丰富的遗传多样性,部分菌株采用MLVA分型方法结合流行病学资料可溯源。 展开更多
关键词 布鲁氏菌分离株 宁夏 多位点串联重复序列分析 分型
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儿童结核病101例临床分离结核分枝杆菌多位点串联重复序列分型 被引量:6
2
作者 王均 黄延风 +1 位作者 张爱华 许红梅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期1408-1410,共3页
目的了解重庆地区儿童结核病中结核分枝杆菌临床分离株的数目可变串联重复序列(variable numbertandem repeats,VNTR)的分布特征,寻找适合的VNTR位点组合。方法采用多位点串联重复序列(multiple locus VNTRanalysis,MLVA)分型方法,选择... 目的了解重庆地区儿童结核病中结核分枝杆菌临床分离株的数目可变串联重复序列(variable numbertandem repeats,VNTR)的分布特征,寻找适合的VNTR位点组合。方法采用多位点串联重复序列(multiple locus VNTRanalysis,MLVA)分型方法,选择标化的24个VNTR位点,对101例结核分枝杆菌临床分离株DNA进行检测,结果采用BioNumerics 6.1数据库软件进行聚类分析和单位点Hunter-Gaston分辨率指数(Hunter-Gaston index,HGI)分析,并比较分析国际推荐的分组(12、15、24位点)的基因分型鉴定能力。结果 MLVA分析结果显示24个VNTR位点在不同菌株中存在明显的多态性,101例结核分枝杆菌临床分离株可分为1个基因群83种基因型,其中69种基因型只有1个菌株,占68.32%(69/101),另有32株临床分离株表现出14种基因型,占31.68%(32/101),成簇率为17.82%;24个VNTR位点的HGI具有较大差异(0.168~0.829),HGI能达到0.5以上的VNTR位点数有16个;24个VNTR位点进行不同的位点组合:12、15个和24个位点组合的HGI分别为0.995、0.996、0.996。结论 重庆地区儿童结核病中结核分枝杆菌存在基因多态性,国际推荐的15个VNTR位点组合的MLVA分型方法适用于其流行病学的研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 多位点可变数目串联重复序列 基因分型
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多位点串联重复序列分析在钩端螺旋体基因分型和流行病学中的应用 被引量:3
3
作者 张翠彩 蒋秀高 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期405-408,共4页
由于许多致病性细菌在遗传学上非常相似,使得细菌间的鉴别非常困难。近年来,随着越来越多的细菌全基因组序列分析和测定,DNA串联重复序列逐渐吸引了人们关注的目光。
关键词 钩端螺旋体 多位点串联重复序列分析 多位点串联重复序列 基因 流行病学
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河北省鼠疫耶尔森菌多位点串联重复序列分析 被引量:5
4
作者 王海峰 杨顺林 +4 位作者 周松 史献明 胡乐乐 刘合智 梁莹 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2015年第2期141-144,共4页
目的对分离自河北省长爪沙鼠鼠疫疫源地的116株鼠疫菌株进行基因分析研究。方法根据鼠疫基因组比对,选择15对引物对测试菌株进行PCR扩增,并对扩增结果进行分析。结果 15对引物对116株实验菌株均得到相应的扩增结果,同一引物测试菌株扩... 目的对分离自河北省长爪沙鼠鼠疫疫源地的116株鼠疫菌株进行基因分析研究。方法根据鼠疫基因组比对,选择15对引物对测试菌株进行PCR扩增,并对扩增结果进行分析。结果 15对引物对116株实验菌株均得到相应的扩增结果,同一引物测试菌株扩增结果目标条带长度均一致,串联重复序列的重复数相同。不同引物扩增目标条带长度不同,串联重复序列的重复数也不同,如引物M52对所有菌株扩增产物长度均为153 bp,串联重复序列的重复数均为3,而引物M59的扩增产物长度为250 bp,重复数均为7。结论多位点串联重复序列分析(MLVA)证实河北省鼠疫自然疫源地的鼠疫菌基因稳定,鼠疫菌MLVA数据库将对未来的鼠疫菌变异和溯源提供技术支持。 展开更多
关键词 鼠疫菌 多位点串联重复序列分析 基因分型
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脉冲场凝胶电泳和多位点串联重复序列分析应用于中国鼠伤寒沙门菌分型能力的评价 被引量:6
5
作者 张京云 聂艳妮 +4 位作者 陈春霞 刁保卫 娄静 阚飙 闫梅英 《疾病监测》 CAS 2011年第4期264-270,共7页
目的比较脉冲场凝胶电泳(PFGE)和两种国际多位点串联重复序列分析(MLVA)分型方法用于我国鼠伤寒沙门菌分子分型的能力,并初步确定适用于我国鼠伤寒沙门菌MLVA分型中的VNTR位点。方法根据国际Pu lseNet公布的沙门菌PFGE分型方案、MLVA分... 目的比较脉冲场凝胶电泳(PFGE)和两种国际多位点串联重复序列分析(MLVA)分型方法用于我国鼠伤寒沙门菌分子分型的能力,并初步确定适用于我国鼠伤寒沙门菌MLVA分型中的VNTR位点。方法根据国际Pu lseNet公布的沙门菌PFGE分型方案、MLVA分型方案(包含7个VNTR位点,简称MLVA_PN)及欧洲食源性疾病监测网公布的鼠伤寒沙门菌MLVA分型方案(包含5个VNTR位点,简称MLVA_EU),对来自我国5个省(直辖市)的175株鼠伤寒沙门菌进行分子分型分析,并结合流行病学资料,评价这三种分型方法对我国分离的鼠伤寒沙门菌的分型能力。结果 175株鼠伤寒沙门菌经XbaⅠ酶切,PFGE后,获得56种带型,其分辨能力(D值)为0.8823。对其中的主优势带型JPXX01.CN0001菌株55株进一步用第二种内切酶BlnⅠ酶切后,获得6种带型。用MLVA_EU分型,获得96种型别,D值为0.9758。应用MLVA_PN分析,获得98种型别,D值为0.9763。两种MLVA分型方法对菌株的分辨能力几乎相同,且分型结果具有较高的一致性。对流行病学调查显示为鼠伤寒沙门菌暴发患者和食物来源的菌株进行PFGE双酶切及MLVA分型,三种分型方法获得一致性结果,均显示这些菌株具有明显的聚集性。结论两种MLVA分型方法的分辨能力均高于PFGE,在确认鼠伤寒沙门菌引起的暴发事件时,采用需时较短,操作更方便的5个VNTR位点的MLVA分型方法可满足菌株聚集性分析。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 脉冲场凝胶电泳 多位点串联重复序列分析 分子分型
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多位点串联重复序列分析应用于中国肠炎沙门菌分型能力的评价 被引量:3
6
作者 刁保卫 聂艳妮 +3 位作者 李杰 娄静 阚飙 闫梅英 《疾病监测》 CAS 2013年第12期1021-1026,共6页
目的比较脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点串联重复序列分析(MLVA)分型方法用于我国肠炎沙门菌分子分型的能力,建立我国肠炎沙门菌MLVA分型标准操作方法及数据库。方法根据国际PulseNet公布的肠炎沙门菌PFGE和MLVA分型方案,对来自我国6个省... 目的比较脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点串联重复序列分析(MLVA)分型方法用于我国肠炎沙门菌分子分型的能力,建立我国肠炎沙门菌MLVA分型标准操作方法及数据库。方法根据国际PulseNet公布的肠炎沙门菌PFGE和MLVA分型方案,对来自我国6个省(直辖市)的289株肠炎沙门菌进行分子分型分析,并结合流行病学资料,评价这两种分型方法对我国肠炎沙门菌分离株的分型能力。结果 289株肠炎沙门菌经XbaⅠ酶切,PFGE后获得55种带型,其分辨能力(D值)为0.8433。PFGE优势带型为JEGX01.CN0003及JEGX01.CN0001,带型频率分别为35.6%、25.6%,但二者仅表现两个条带的差异,其余型别均低于5%。采用MLVA分析,获得63种型别,分为2个群,D值为0.8608,说明MLVA分辨能力高于单酶切PFGE,但分型能力仍然有限。MLVA主要型别ST1包含了97株菌株,占37.5%,分布于各省及各年份。若联合PFGE及MLVA分型,则产生104种型别,D值为0.9058。对流行病学调查显示为肠炎沙门菌暴发病例菌株进行PFGE双酶切及MLVA分型,结果均显示这些菌株具有明显的聚集性,但不能与同期散发菌株完全区分开。结论 MLVA与PFGE分型方法的分辨能力在肠炎沙门菌中较低,在确认肠炎沙门菌引起的暴发事件时,需紧密结合流行病学调查资料,采用双酶切PFGE或MLVA进行分型分析。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 脉冲场凝胶电泳 多位点串联重复序列分析 分子分型
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多位点串联重复序列分析和脉冲场凝胶电泳对伤寒沙门菌基因分型 被引量:1
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作者 吴伟元 王辉 +6 位作者 陆坚 刘映霞 卢月梅 吴劲松 李文青 程锦娥 吴文苑 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期264-268,共5页
目的:比较多位点串联重复序列分析( MLVA)和脉冲场凝胶电泳( PFGE)对伤寒沙门菌基因分型的能力,构建适合伤寒沙门菌的MLVA分型方法。方法根据国外文献报道选出5个多变的伤寒沙门菌串联重复序列( VNTR)位点( SAL02、SAL11、SAL1... 目的:比较多位点串联重复序列分析( MLVA)和脉冲场凝胶电泳( PFGE)对伤寒沙门菌基因分型的能力,构建适合伤寒沙门菌的MLVA分型方法。方法根据国外文献报道选出5个多变的伤寒沙门菌串联重复序列( VNTR)位点( SAL02、SAL11、SAL16、SAL20、TR4699)设计MLVA分型方案,运用MLVA分型方案和国际PulseNet公布的沙门菌PFGE分型方案对2002至2007年21株流行病学不相关的深圳社区感染伤寒沙门菌基因分型,比较这两种分型方法对伤寒沙门菌基因分型的能力。结果5个单一VNTR位点对深圳地区伤寒沙门菌的分型能力( D值)为0.838~0.943;使用MLVA分型方法,获得19种MLVA型别;使用PFGE分型方法,获得19种PFGE型别;两种分型方法的D值均为0.99,且结果完全一致。结论5个VNTR位点的MLVA分型方法可作为一种简单快速准确的基因分型方法用于伤寒沙门菌感染流行的分析。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 基因分型 多位点串联重复序列分析 脉冲场凝胶电泳
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应用多位点串联重复序列分析方法鉴定布鲁氏菌变异株 被引量:1
8
作者 田国忠 姜海 +2 位作者 赵鸿雁 杨晓雯 朴东日 《疾病监测》 CAS 2020年第7期646-650,共5页
目的对常规的生物学鉴定方法无法准确分类的布鲁氏菌变异菌,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)方法进行种型分类。方法 39株经常规生物学方法鉴定为布鲁氏菌变异株,应用MLVA方法进行种型分类。结果 39株菌株与粗糙型血清R凝集,可被Bk2... 目的对常规的生物学鉴定方法无法准确分类的布鲁氏菌变异菌,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)方法进行种型分类。方法 39株经常规生物学方法鉴定为布鲁氏菌变异株,应用MLVA方法进行种型分类。结果 39株菌株与粗糙型血清R凝集,可被Bk2噬菌体裂解,Wb、Tb噬菌体不裂解,其生物型别不确定;9株菌株与血清A和M弱凝集,2株菌株与血清M弱凝集,其他28株菌株与血清A和M都不凝集;33株菌株可被粗糙型Iz噬菌体裂解,确定39株菌株为布鲁氏菌变异株。应用16个位点串联重复序列分析,结合布鲁氏菌参考标准菌株,经聚类分析,39株菌中2株菌与牛种布鲁氏菌生物2和4型高度相似,37菌株与羊种布鲁氏菌生物3型高度相似。结论常规生物学鉴定方法与分子生物学分型方法的联合运用,可以更好地解决布鲁氏菌分离菌株的分类,尤其是适合布鲁氏菌变异菌株的鉴定。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 变异菌株 生物学特征 多位点串联重复序列分析
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多位点串联重复序列分析方法在嗜麦芽窄食单胞菌分子分型中的应用
9
作者 李文革 田国忠 卢金星 《疾病监测》 CAS 2013年第9期753-756,共4页
目的探讨多位点串联重复序列分析方法(multiple-locus variable-number tandem repeat analysis,MLVA)在嗜麦芽窄食单胞菌分型中的应用。方法选用文献报道的12个嗜麦芽窄食单胞菌串联重复序列位点及引物,采用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖... 目的探讨多位点串联重复序列分析方法(multiple-locus variable-number tandem repeat analysis,MLVA)在嗜麦芽窄食单胞菌分型中的应用。方法选用文献报道的12个嗜麦芽窄食单胞菌串联重复序列位点及引物,采用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳,根据凝胶电泳图谱计算出各位点的串联重复单元拷贝数,通过BioNumerics(Version 4.0,Applied Maths BVBA,Belium)聚类分析。结果设置12个位点串联重复单元拷贝数100%的相似性为判断标准,可将106株嗜麦芽窄食单胞菌分为34个MLVA基因型,流行病学上有关联的菌株具有相同的基因型。设置12个位点串联重复单元拷贝数45%相似性为判断标准,将106株菌株分为11个群,相同的地域、分离来源和分离部位的菌株具有相关性。结论串联重复序列位点分型技术具有简便、快速、特异、可比性、可重复性和高鉴别力等优点,适合嗜麦芽窄食单胞菌的分子流行病学研究。 展开更多
关键词 嗜麦芽窄食单胞菌 分子分型 多位点串联重复序列
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老年住院患者肺炎克雷伯菌临床分离株多位点可变数目串联重复序列基因分型特征分析 被引量:5
10
作者 张媛媛 徐雅萍 +5 位作者 杜鹏程 强裕俊 张雯 陈晨 于季红 郭军 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期434-437,共4页
目的探讨老年住院患者肺炎克雷伯菌分离株多位点可变数目串联重复序列分析的基因分型特点。方法收集解放军总医院南楼临床部老年住院患者肺炎克雷伯菌临床分离菌株184株,提取基因组DNA,采用多重PCR和毛细管电泳对7个位点进行分析,利用Bi... 目的探讨老年住院患者肺炎克雷伯菌分离株多位点可变数目串联重复序列分析的基因分型特点。方法收集解放军总医院南楼临床部老年住院患者肺炎克雷伯菌临床分离菌株184株,提取基因组DNA,采用多重PCR和毛细管电泳对7个位点进行分析,利用Bio Numerics 5.1软件进行聚类分析。结果 184株肺炎克雷伯菌临床分离株共产生139种基因型,呈现明显的基因多态性;聚类分析结果显示,全部菌株可分为3个基因群,其中Ⅰ群包含93.06%的菌株。结论本医疗中心老年住院患者的肺炎克雷伯菌临床分离株具有明显的优势菌群,其感染来源仍以院内感染为主。 展开更多
关键词 老年住院患者 感染 肺炎克雷伯菌 多位点可变数目串联重复序列分析
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婴幼儿淋巴结核病原体及多位点可变数目串联重复序列分析 被引量:2
11
作者 邓桂林 钱雪琴 +4 位作者 武洁 沈鑫 张军 卢水华 沈芳 《微生物与感染》 2014年第2期89-95,共7页
为了解婴幼儿淋巴结核的主要病原体及其分子生物学信息,对分离自73例0~3岁淋巴结核患儿的79份淋巴结穿刺液阳性培养物进行结核分枝杆菌鉴定、3个不同区域片段(RD1、RD9、RD10)扩增及多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)。结果... 为了解婴幼儿淋巴结核的主要病原体及其分子生物学信息,对分离自73例0~3岁淋巴结核患儿的79份淋巴结穿刺液阳性培养物进行结核分枝杆菌鉴定、3个不同区域片段(RD1、RD9、RD10)扩增及多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)。结果显示,婴幼儿淋巴结核以卡介苗(BCG)感染为主(95.9%),其次为人型结核分枝杆菌感染(4.1%)。通过MLVA分离出4个基因型,3个为独立基因型、1个为成簇基因型。76株属成簇基因型,均为BCG ;3个独立基因型均为人型结核分枝杆菌。研究表明,BCG是引起婴幼儿淋巴结核的主要病原体,临床分离的BCG MLVA分型无差异。 展开更多
关键词 淋巴结核 多位点可变数目串联重复序列分析 卡介苗
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副溶血弧菌的多位点可变数目串联重复序列分型方法的研究 被引量:5
12
作者 张金金 李迎慧 +6 位作者 石晓路 邱亚群 林一曼 陈琼城 姜伊翔 扈庆华 李连青 《实用检验医师杂志》 2012年第4期211-215,共5页
目的评价多位点可变数目串联重复序列分析(multiple locus variable number tandem repeat assay,MLVA)方法对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的分型能力,初步了解中国深圳地区VP分离菌株可变数目串联重复序列(variable... 目的评价多位点可变数目串联重复序列分析(multiple locus variable number tandem repeat assay,MLVA)方法对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的分型能力,初步了解中国深圳地区VP分离菌株可变数目串联重复序列(variablen umber tandemrepeat,VNTR)的基因分布特征。方法依据血清型和脉冲场凝胶电泳分析型别选择2006年一2011年分离自临床和食品中的108株VP菌株。采用MLVA方法对其进行基因分型,评价该方法对VP菌株8个VNTR位点的分型能力。结果MLVA8个位点将108株VP菌株分为101个型别,分辨系数为99.86%;将主流血清型03:K6共46株菌分为44个型别,分辨系数为99.71%。MLvA8个位点的多态性都较好(DI均〉0.60),各位点多态性指数由高到低,依次为TR7,TR4,TR10,TR2,TR1,TR8,TR5,TR9。结论MLVA8个位点的联合应用适合于对VP菌株的分型。MLVA对VP的分型研究具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 脉冲场凝胶电泳 多位点可变数目串联重复序列分析 可变数目串联重复序列 基因型
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数目可变串联重复序列用于江苏省168株结核分枝杆菌菌株的基因分型研究 被引量:8
13
作者 许卫国 虞浩 +2 位作者 杨丹丹 吕华坤 周扬 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1509-1512,1516,共5页
目的:初步了解江苏省结核分枝杆菌临床分离菌株的数目可变串联重复序列(Variable number of tandem repeats,VNTR)的基因型及VNTR基因分布特征。方法:在苏南、苏中、苏北三个地区13个结核病定点诊疗单位收集临床分离菌株。选取结核分枝... 目的:初步了解江苏省结核分枝杆菌临床分离菌株的数目可变串联重复序列(Variable number of tandem repeats,VNTR)的基因型及VNTR基因分布特征。方法:在苏南、苏中、苏北三个地区13个结核病定点诊疗单位收集临床分离菌株。选取结核分枝杆菌基因组中11个具有明显多态性特征的VNTR位点,通过PCR扩增,2%琼脂糖凝胶电泳和Bio Numerics(Version 3.0)软件进行结核菌株VNTR的多态性和聚类分析。结果:共收集到168株结核分枝杆菌。不同的菌株在同一位点上具有多态性。共分为10个基因型(Ⅰ,Ⅱ~Ⅹ型),其中以Ⅷ型为主要基因型,占75.0%、其次为Ⅱ型5.4%、Ⅳ型4.2%、Ⅶ型9.5%。不同地区之间,苏南、苏中、苏北三个地区也都以Ⅷ型为主要基因型,分别占各地区的83.5%,57.1%,76.6%;但是苏南、苏中、苏北三地的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ型菌株分布在各地菌株中的比例有差异显著性((2=54.710,P<0.0001),Ⅱ型以苏中为主(11.9%)、Ⅲ型以苏南为主(3.8%)、Ⅳ型以苏南、苏北为主(5.1%与6.4%)、Ⅶ型以苏中为主(31.0%)。结论:江苏省的结核分枝杆菌具有明显的多态性,以Ⅷ型为主要流行型,不同地区间同样以Ⅷ型为主要流行型,但菌型分布存在一定的差异。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 多位点数目可变串联重复序列分析 基因分型
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中国炭疽芽胞杆菌多位点可变数目串联重复序列分析基因型多态性
14
作者 张慧娟 张恩民 +2 位作者 贺金荣 李伟 魏建春 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期990-996,共7页
目的分析中国炭疽芽胞杆菌多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)基因型多态性,建立中国炭疽芽胞杆菌MLVA基因型数据库。方法收集1947年以来中国不同来源的炭疽芽胞杆菌分离菌株,采用MLVA15分型策略进行基因型鉴定,对基因型进行统一编... 目的分析中国炭疽芽胞杆菌多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)基因型多态性,建立中国炭疽芽胞杆菌MLVA基因型数据库。方法收集1947年以来中国不同来源的炭疽芽胞杆菌分离菌株,采用MLVA15分型策略进行基因型鉴定,对基因型进行统一编号和命名,分析不同来源菌株MLVA基因型的分布特征,同时通过Bionumerics软件绘制聚类图,分析不同基因型间的遗传关系。结果MLVA15分型可将533株中国炭疽芽胞杆菌分为4群91个基因型,其中54个基因型为中国独有的基因型。新命名的基因型MLVA15-CHN1~MLVA15-CHN6广泛分布于中国不同地区、不同年代和宿主,其余基因型具有地区和年代特征性。结论本研究建立了中国炭疽芽胞杆菌MLVA基因型数据库,掌握了MLVA基因型分布特征及其遗传多态性,为中国炭疽疫情防控及分子溯源技术提供了参考依据。 展开更多
关键词 炭疽芽胞杆菌 基因分型 多位点可变数目串联重复序列分析 遗传多态性
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沈阳市2012—2021年食源性致病菌监测蜡样芽孢杆菌多位点可变数量串联重复序列的分型分析 被引量:2
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作者 杜岩 连英姿 董桂华 《中国卫生工程学》 CAS 2023年第1期20-23,共4页
目的利用多位点可变数量串联重复序列分型(MLVA)技术,对沈阳市在各类食品检出的蜡样芽孢杆菌进行分子分型,为预防预警食物中毒提供技术支持。方法采集2012—2021年沈阳市食源监测样品中蜡样芽孢杆菌阳性菌株61株,利用PCR方法,结合毛细... 目的利用多位点可变数量串联重复序列分型(MLVA)技术,对沈阳市在各类食品检出的蜡样芽孢杆菌进行分子分型,为预防预警食物中毒提供技术支持。方法采集2012—2021年沈阳市食源监测样品中蜡样芽孢杆菌阳性菌株61株,利用PCR方法,结合毛细管电泳,对样品选择Bcms-08、Bcms-17、Bcms-18、Bcms-19、Bcms-20共5个位点进行蜡样芽孢杆菌MLVA分子分型。结果61株的蜡样芽孢杆菌有24个基因分型,共分为3个聚类群,其中食物来源相同的菌株基因分型基本一致,但相同食物来源的菌株又处在不同聚类群的基因分型中。结论蜡样芽孢杆菌MLVA分型呈较好的多态性,大部分菌株亲缘关系较近,相似度较高,无明显的聚集性。由于研究中缺少食物中毒爆发菌株及食品外环境分离株,样本数量有限,所以对致病菌的基因分布尚有局限性。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 多位点可变数量串联重复序列分析 聚合酶链式反应
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猕猴桃溃疡病病原菌MLVA分型引物的筛选及验证
16
作者 姚令 王海 +5 位作者 黄露 安星宇 陈文 王莉爽 薛原 吴石平 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1188-1198,共11页
【目的】筛选出一组可精准快速地对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)进行分型的引物组合。【方法】针对前期文献已报道的34对引物,采用PCR技术验证该34对引物对中国Psa菌株的扩增效率及准确性;利用... 【目的】筛选出一组可精准快速地对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)进行分型的引物组合。【方法】针对前期文献已报道的34对引物,采用PCR技术验证该34对引物对中国Psa菌株的扩增效率及准确性;利用模拟PCR获取菌株串联重复(TR)数;以辛普森指数(Simpson’s index,SI)作为筛选引物组合的标准,基于R软件平台,筛选最优引物组合。【结果】34对引物对中国Psa扩增效果均良好,其中TR14与TR11II、TR19与Psa-01引物序列相同;TR8与Psa-08、TR39II与Psa-10、GM-1834与TR10I、GM-1553与TR64II、TR19Psa-01与TR19II扩增同一TR;Psa-09扩增产物串联重复单元长度不唯一,TR2II扩增产物侧翼变异较大,不能通过电泳确定串联重复数;最终确定SI值与全部引物组合相同的最低引物数量为9对,使用该9对引物的组合可将Psa已知的5种生物型准确分开。【结论】TR23/Psa-04、Psa-03、Psa-05、Psa-06、TR10IGM-1834、TR30I、TR1II、Psa-10TR39II、TR64IIGM-1553等9对引物可代表当前文献报道的34对引物,进行Psa分型研究,探索猕猴桃溃疡病的传播和流行规律,为病害防控策略的制定提供科学依据。 展开更多
关键词 丁香假单胞菌猕猴桃致病变种 多位点串联重复序列分析 群体遗传结构 引物 筛选
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结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分型方法标准化操作程序的建立 被引量:28
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作者 吕冰 Christine Pourcel +6 位作者 刘敬华 董海燕 张媛媛 蒋毅 刘志广 赵秀芹 万康林 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期919-924,共6页
目的建立结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)的标准化方法,评价该方法的分型能力、应用价值。方法选取15个位点,采用核酸提取、PCR和琼脂糖凝胶电泳等技术,结合BioNumerics(Version5.0)软件,对中国54株结核分... 目的建立结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)的标准化方法,评价该方法的分型能力、应用价值。方法选取15个位点,采用核酸提取、PCR和琼脂糖凝胶电泳等技术,结合BioNumerics(Version5.0)软件,对中国54株结核分枝杆菌临床分离株进行分型。结果确定标准化的MLVA方法,包括细菌分离培养、核酸提取、PCR、琼脂糖凝胶电泳等实验步骤及标化参数的相关数据分析软件的使用。VNTR位点确定为ETRA、ETRB、ETRC、ETRD、ETRE、MIRU10、MIRU16、MIRU23、MIRU26、MIRU27、MIRU39、MIRU40、Mtub21、Mtub30和Mtub39。结论建立MLVA标准化技术方案,该方法操作简便,分型鉴定能力及实验室间结果可比性强,便于网络化,有利于结核病流行中追溯传染源,分析流行趋势。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 多位点可变数目串联重复序列分析 标准化操作程序
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多位点可变数目串联重复序列分析方法在布鲁杆菌病监测中的应用 被引量:14
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作者 赵鸿雁 杨杰 +5 位作者 张旭 朴东日 田国忠 李金平 崔步云 姜海 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期441-447,共7页
目的建立多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA),并评价其在布鲁杆菌菌株鉴定及流行病溯源中的价值。方法使用MLVA方法,对16株羊种菌、22株牛种菌、21株猪种菌和10株犬种菌株进行分析,使用BioNumerics(Version5.0),对16个... 目的建立多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA),并评价其在布鲁杆菌菌株鉴定及流行病溯源中的价值。方法使用MLVA方法,对16株羊种菌、22株牛种菌、21株猪种菌和10株犬种菌株进行分析,使用BioNumerics(Version5.0),对16个位点进行聚类分析,聚类方式用平均连锁聚类法(UPGMA)。计算每个位点的差异指数,菌株的基因型通过MLVA2010数据库确定。结果使用MLVA方法,通过Brace06、Bruce08、Bruce11、Bruce12、Bruce42、Bruce43、Bruce45、Bruce55共8个位点可以区分布鲁杆菌的种;通过Bruce04、Bruce07、Bruce09、Bruce16、Bruce30共5个位点可以对菌株进行溯源,确定菌株流行病学相关性。结论MLVA技术是一种分辨率高且易于在省级疾病防控系统监测实验室使用的标准化分型技术。可以加强布病监测能力。 展开更多
关键词 布鲁杆菌属 基因 多位点可变数目串联重复序列分析
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多位点可变数目串联重复序列分型方法检测布鲁氏菌分型标准化操作方法的建立和应用 被引量:16
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作者 杨杰 赵素莲 +3 位作者 崔步云 姜海 赵鸿雁 朴冬日 《疾病监测》 CAS 2012年第2期137-140,共4页
目的建立常用布鲁氏菌多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)的标准化方法及应用研究。方法选取16个位点,通过核酸提取、聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳等技术,结合BioNumerics(Version 5.0)软件,对16株布鲁氏菌标准菌... 目的建立常用布鲁氏菌多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)的标准化方法及应用研究。方法选取16个位点,通过核酸提取、聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳等技术,结合BioNumerics(Version 5.0)软件,对16株布鲁氏菌标准菌株和不同地区分离的32株菌株进行分型。结果利用所建立的MLVA方法可以区分16株布鲁氏菌标准菌株,并可以将32株地方株区分为牛种和羊种两大类。结论初步建立了MLVA标准化方法,可以在种的水平鉴定布鲁氏菌,还可以追溯传染源,确定流行趋势。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 多位点可变数目串联重复序列分析 分型 标准化操作程序
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多位点可变串联重复序列技术用于西藏地区结核分枝杆菌基因分型的初步研究 被引量:12
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作者 石荔 范昕建 万康林 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期477-481,共5页
目的 初步探讨多位点数目可变串联重复序列(MLVA)技术在西藏地区结核分枝杆菌基因分型中的应用和初步了解西藏地区结核分枝杆菌数目可变串联重复序列(VNTR)基因型种类及其分布。方法 在拉萨、山南、林芝、日喀则、那曲、昌都6个地... 目的 初步探讨多位点数目可变串联重复序列(MLVA)技术在西藏地区结核分枝杆菌基因分型中的应用和初步了解西藏地区结核分枝杆菌数目可变串联重复序列(VNTR)基因型种类及其分布。方法 在拉萨、山南、林芝、日喀则、那曲、昌都6个地区结核病防治中心收集结核分枝杆菌临床分离菌株,设计引物,采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分枝杆菌20个VNTR位点进行检测,并通过BioNumerics 4.5软件进行DNA指纹图谱多态性分析。结果 共收集到217株结核分枝杆菌,分为19个不同的VNTR基因型,其中以Ⅺ型为主要基因型占87.6%(属于北京家族),其次Ⅵ型、ⅩⅤ型、ⅩⅥ型各占1.38%,Ⅰ型、Ⅶ型、ⅩⅢ型各占0.92%,12株结核分枝杆菌为单一的基因型。不同地区之间,以Ⅺ型为主要基因型,分别占各地区的86.8%、91.3%、78.95%、88.2%、95.05、89.3%。结论 西藏地区的结核分枝杆菌存在明显的基因多态性,主要流行型为VNTRⅪ型(即北京家族基因型),初步研究结果显示北京家族基因型与卡介苗接种和耐药性无相关性。MLVA分型方法简单、快速,可以有效地用于结核分枝杆菌的基因分型和病原监测。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 多位点可变串联重复序列技术 基因分型
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