金黄色葡萄球菌耐药基因分析及多位点序列分子分型

目的对临床来源金黄色葡萄球菌(金葡菌)进行分子分型及溯源,研究耐药基因与克隆复合体(CC)关系。方法检测94株金葡菌中的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)并分型,测定氨基糖苷类耐药基因[aac(6')/aph(2'')、aph(3')-Ⅲ、ant(4',4'')]、大环内酯类耐药基因(ermA、ermC、msrA)、四环素类耐药基因(tetM、tetk)共8个耐药基因;用多位点序列分子分型(MLST)进行克隆分析。结果 94株菌株中共检出MRSA菌株36株,其中,医源MRSA(HA-MRSA)29株,包括Ⅲ型28株,Ⅰ型1株;社区源MRSA(CA-MRSA)7株,包括V型6株,Ⅳd型1株。94株菌株中,耐药基因aac(6')/aph(2'')、aph(3')-Ⅲ、ant(4',4'')、ermA、ermC、msrA、tetM、tetk的携带率分别为55.3%、58.5%、26.6%、37.2%、34.0%、19.1%、37.2%、25.5%;共84株菌株耐药基因阳性,共形成35种耐药基因谱;含3种以上耐药基因的菌株占48.9%(46/94)。MLST分型共得到27个ST型,6个同源复合体;有3个重要同源复合体CC239、CC630、CC5及1个重要ST398型。HA-MRSA均属于CC239,而多数CAMRSA属于CC630;HA-MRSA耐药基因携带率与CA-MRSA及所有甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)携带率差异有统计学意义(P<0.01)。CC239克隆与所有其他克隆菌株耐药基因的携带率差异有统计学意义(P<0.01)。结论引起感染的MRSA主要是HA-MRSA-Ⅲ,其次为CA-MRSA-Ⅴ。CC630是国际上新出现的克隆;ST398主要是起源于人而非动物。MRSA主要存在于几类特定克隆中,主要来源于相同克隆的MSSA;金葡菌获得及携带耐药基因主要与CC克隆有关,推测此类复合体中含有相关分子构型,有利于耐药基因如SCCmec插入。

铜绿假单胞菌耐药基因分析及多位点序列遗传分型

目的了解2011-2012年深圳市南山区医院病人,各医院、诊所内环境台面涂抹样、医护人员手涂抹样分离的铜绿假单胞菌,抗生素耐药基因分布及基因的遗传多样性。方法采用聚合酶链反应技术检测铜绿假单胞菌的20种耐药基因:TEM、VEB、CARB、OXA、SHV、PER、GES、GTX、SPM、GIM、IMP、VIM、DHA、oprD、Aac(6′)-Ⅰ、Aac(6′)-Ⅱ、Aac(3′)-Ⅰ、Aac(2″)-Ⅰ、qacE1-sull及Ⅰ类整合子基因。采用多位点序列分子分型方法进行聚类和克隆分析。结果检出11种耐药基因:TEM、SHV、IMP、DHA、Aac(6’)-Ⅰ、Aac(6′)-Ⅱ、Aac(3′)-Ⅰ、Aac(2″)-Ⅰ、qacE1-sull、Ⅰ类整合子及oprD基因,检出率分别为8.1%、6.4%、4.8%、9.7%、4.8%、14.5%、4.8%、56.5%,8.1%,8.1%,oprD基因缺失率为61.2%。52株铜绿假单胞菌检出耐药基因,形成19种耐药基因谱。多位点序列分型方法将62株铜绿假单胞菌,分为39个ST型,5个克隆群,1个优势克隆群CC244,1个优势独特型ST856。结论不同类型样本分离菌株携带耐药基因存在差异,部分病人分离株携带多种耐药基因。本研究铜绿假单胞菌具有遗传多样性,存在优势克隆群。

深圳地区环境中创伤弧菌携带质粒分析及多位点序列遗传分型

目的了解2010-2013年深圳市南山区环境中不同样品中分离的创伤弧菌质粒携带情况及基因的遗传多样性。方法采用聚合酶链反应技术检测深圳市南山区环境样品中创伤弧菌的6种质粒基因:seq25、seq51、Tra I、Tra I2、Tra D及Vep07。采用多位点序列分子分型方法进行分子分型及聚类分析。结果 50株创伤弧菌中,43株菌(43/50,86%)携带质粒,形成19种质粒图谱:20株(20/50,40%)同时存在毒力与结合质粒,13株(13/50,26%)仅存在毒力质粒,2株(2/50,4%)仅存在结合质粒。多位点序列分型方法将50株创伤弧菌,分为43个ST型。结论质粒广泛存在于深圳市南山区环境样品分离的创伤弧菌中,不同类型样本分离菌株携带质粒存在差异且具有遗传多样性。