静脉血管平滑肌细胞中的多倍体细胞分析

目的探讨流式细胞术分析静脉血管平滑肌细胞多倍体细胞的方法和意义。方法选取普通级健康成年日本大耳白兔2只，雄性，8月龄，大约3 kg;普通级SD大鼠2只，雄性，8周龄，大约200 g。人大隐静脉为2例心脏冠状动脉旁路移植术中修补血管所得。在麻醉日本大耳白兔和大鼠后开腹腔获取下腔静脉，采用多种酶组合的消化液消化兔、大鼠以及人的静脉血管得到适合流式细胞检测的静脉血管平滑肌单细胞悬液，用碘化丙啶标记细胞，利用细胞流式仪分析兔、大鼠以及人的静脉血管平滑肌单细胞悬液各5 000个细胞，检测细胞DNA含量，DNA含量翻倍的细胞为多倍体细胞。并利用荧光原位杂交技术（FISH）验证阳性对照HEK293细胞系中的多倍体的存在。结果流式结果显示分析的5 000个细胞中，阳性对照HEK293细胞的多倍体细胞为1 355个（27.1%），从2例患者中取得的大隐静脉多倍体细胞为310个（6.2%）和250个（5.0%）;2只大鼠的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞为360个（7.2%）和450个（9%）;2只兔的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞分别为270个（5.4%）和305个（6.1%）。结论成年的静脉血管包括人大隐静脉的平滑肌细胞中普遍存在一定比例的多倍体细胞。

以混培法离体诱导油茶多倍体细胞的初步研究

为了研究秋水仙素诱导油茶多倍体细胞的效果,结合植物组织培养方法,以‘华硕’嫩叶为材料,用不同浓度的秋水仙素处理进行不同时间长度的培养,利用流式细胞仪测定培养获得的愈伤组织相对DNA含量,石蜡切片显微观察愈伤组织细胞形态。结果表明:在一定的浓度范围内,随着秋水仙素浓度的升高和处理时间的延长,叶盘的死亡率逐渐升高,愈伤率逐渐降低;相对于对照组而言,各处理组均可诱导获得多倍体细胞,其中以40 mg·L^(-1)的秋水仙素处理20 d和以20 mg·L^(-1)的秋水仙素处理30 d培养获得的油茶愈伤组织细胞其相对DNA含量倍数均在2.0以上,其核质比为(0.130±0.023),且在显微镜下还能观察到细胞分生团。

汉防己乙素衍生物LYY-47对三阴性乳腺癌细胞及其多倍体巨瘤细胞增殖、凋亡的作用和机制

目的探讨汉防己乙素衍生物LYY-47对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞及其多倍体巨瘤细胞(PGCCs)增殖、凋亡的作用和机制。方法取TNBC MDA-MB-231细胞和MDA-MB-436细胞培养至对数生长期,诱导形成PGCCs,培养35 d,采用苏木素-伊红(H&E)染色观察不同培养时间时2种细胞的PGCCs形态学特征并进行计数;收集MDA-MB-231细胞、PGCCs及其子代细胞,采用流式细胞仪检测分析细胞周期,采用Western blot检测周期相关蛋白[细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和细胞周期蛋白B1(CyclinB1)]、干性相关蛋白[乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)、白细胞分化抗原44(CD44)及白细胞分化抗原133(CD133)]、DNA损伤修复相关蛋白[布卢姆(BLM)、Rad51及乳腺癌易感基因1(BRCA1)]及凋亡相关蛋白[BCL2-相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤蛋白-2(Bcl-2)、裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)及裂解凋亡蛋白酶-8(cleaved Caspase-8)]的表达,采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验检测细胞活力和细胞集落数,采用细胞免疫荧光实验检测磷酸化组蛋白2AX(γ-H2AX)的表达;采用荧光偏振实验检测BLM DNA解旋酶的活性;收集对数生长期MDA-MB-231细胞,分为对照组(同等体积的完全培养基)、紫杉醇(PTX)组(500 nmol/L PTX)、3-CF 3,4-F-苯基类似物(ML216)组(3μmol/L ML216)及ML216+PTX组(500 nmol/L PTX和3μmol/L ML216),采用Image J软件计数各组细胞数;收集对数生长期MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞,分为对照组(0.00μmol/L)、LYY-47给药组(2.50μmol/L、5.00μmol/L及6.50μmol/L),采用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡情况;6周龄雌性无特定病原体(SPF)级无胸腺BALB/c裸鼠12只,皮下分别注射5×10^(6)个MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞,每隔3天测量1次肿瘤体积,连续29 d,处死裸鼠剥离肿瘤、称重,取肿瘤组织制作切片,采用H&E染色和免疫组织化学染色观察细胞形态和检测BLM、Ki-67的表达。结果与TNBC MDA-MB-231和MDA-MB-436细胞相比,PTX诱导的PGCCs出现增大的细胞核和细胞质区域,通过不对称分裂产生子代细胞;与MDA-MB-231细胞相比,PGCCs中S期和G2/M期细胞增加、CDK1和CyclinB1蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),其子代细胞中S期细胞增加、G2/M期细胞减少且CDK1、CyclinB1蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),PGCCs及其子代细胞中ALDH1A1、CD44及CD133蛋白表达上调(P<0.05),PGCCs子代细胞的增殖和克隆形成能力增强(P<0.05),γ-H2AX、BLM、BRCA1及Rad51蛋白表达上调(P<0.05);与PTX组相比,ML216+PTX组PGCCs形成的数量明显减少(P<0.01);PGCCs子代细胞体内成瘤的生长速度、肿瘤的体积和重量均大于MDA-MB-231细胞(P<0.01),瘤体中BLM与Ki-67均呈高表达(P<0.01);与对照组相比,LYY-47给药组BLM 642-1290 DNA解旋酶的ATPase、dsDNA解链活性以及DNA结合活性均下调(P<0.05),MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞中BLM、Rad51及BRCA1蛋白表达也均下调(P<0.05);与对照组相比,LYY-47给药组和ML216给药组MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞增殖和克隆形成能力降低(P<0.05),LYY-47给药组能够引起MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞G2/M期细胞增加(P<0.05)、S期细胞减少(P<0.05)、细胞内周期相关蛋白CDK1与CyclinB1的表达下调(P<0.05),ML216给药组MDA-MB-231及其PGCCs子代细胞G1期细胞增多、S期细胞减少(P<0.05);与对照组比较,LYY-47给药组MDA-MB-231细胞及其PGCCs子代细胞的总凋亡比例增加、Bcl-2表达下调及Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达上调(P<0.05)。结论LYY-47和ML216可影响TNBC及其PGCCs子代细胞的增殖,其机制可能与抑制BLM DNA解旋酶诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。

多倍体肿瘤巨细胞的研究进展

多倍体肿瘤巨细胞(polyploid gaint cancer cells,PGCCs)是一类拥有特殊细胞周期的细胞,存在于多种实体肿瘤中。过去常认为此类细胞处于衰老、凋亡边缘,不能分裂且无法生存,但近年发现PGCCs可在化疗、放疗、缺氧等条件下存活,并参与肿瘤的发展、治疗抵抗以及转移复发等。本文围绕PGCCs的研究现状进行阐述,为肿瘤的研究提供新思路。

辣椒离体细胞多倍体的诱导研究

以辣椒的下胚轴为外植体 ,在MS + 6 BA 2 .0mg/L +IAA 1.0mg/L培养基中诱导出愈伤组织 .用加入秋水仙碱的培养基和液体浸泡两种方法处理愈伤组织 ,进行离体细胞多倍体诱导 .结果表明 :将加入秋水仙碱的培养基法优于液体浸泡法 ,秋水仙碱浓度为 10 0 0mg/L ,处理时间为 4d时 ,其加倍效果最好 ,加倍率达 80 % .染色体数目鉴定表明 :四倍体染色体数目是2n =4x =4 8,而二倍体染色体数目是 2n =2x =2 4 .

三氮唑席夫碱衍生物诱导SMMC-7721细胞分化为多倍体巨细胞

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物（LH-37）诱导SMMC．7721细胞形成多倍体巨细胞的作用。方法SMMC-7721细胞以1×10^4／ml的浓度接种于含1×10^-5mol／LLH．37的培养液内72h，流式细胞术分析DNA含量，Hoechst3258和碘化丙啶双染观察细胞死亡，免疫荧光检查微管和核纤层构造，透射电镜观察巨细胞超微结构。结果LH-37作用SMMC-7721细胞72h，巨细胞明显增加，单核巨细胞和多核巨细胞分别为12．32％和0．92％。可见多核巨细胞子核放射状排列，微管增厚并包裹子核，形成单-的微管组织中心，放射状排列的子核被完整的核纤层分割包绕，大部分多核巨细胞凋亡。单核巨细胞的微管常围绕核膜凝集，同时向细胞膜方向放射状分布，可见异常的有丝分裂和凝集的染色质，电镜下可见-些单核巨细胞凋亡时伴有自吞噬特征。结论LH-37通过干扰微管动力学，导致多倍体巨细胞增加和延迟性细胞死亡。

SPTBN1对结直肠腺癌细胞及其多倍体肿瘤巨细胞生物学行为的影响及分子机制

目的探讨SPTBN1在结直肠腺癌细胞及其多倍体肿瘤巨细胞(polyploid giant cancer cells,PGCCs)中的作用及分子机制。方法应用CPTAC数据库分析结直肠腺癌组织和癌旁正常组织中SPTBN1蛋白表达水平;应用Kaplan-Meier Plotter、PrognoScan和UALCAN数据库分析SPTBN1蛋白表达与结直肠腺癌患者生存率的关系;应用Western blot法检测SPTBN1在结直肠腺癌组织和PGCCs中的表达量;应用平板克隆实验和划痕实验检测细胞的增殖与迁移能力;利用siRNA沉默PTPRN2和SPTBN1蛋白的表达。结果CPTAC数据库分析显示,SPTBN1蛋白在结直肠腺癌中的表达明显降低,其低表达与结直肠腺癌临床分期呈正相关;生存分析结果显示,SPTBN1低表达组患者的总生存率显著低于高表达组;应用奥沙利铂诱导的HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs,其增殖和迁移能力强于对照组HCT116和LOVO细胞;Western blot结果显示,SPTBN1蛋白在结直肠腺癌组织和PGCCs中的表达明显下降;SPTBN1敲低组HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞的增殖和迁移能力增强;GEPIA数据库结果显示,SPTBN1蛋白表达与PTPRN2、E-cadherin蛋白表达呈正相关;敲低SPTBN1后,HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降;敲低PTPRN2后,HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞中SPTBN1、E-cadherin蛋白表达水平明显降低。结论SPTBN1在结直肠腺癌和PGCCs中低表达,敲低SPTBN1可促进HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞的增殖与迁移,其机制可能与PTPRN2/SPTBN1/E-cadherin通路相关。

一串红体细胞多倍体诱导及其子代表型研究

【目的】为了培育出一串红多倍体,并且分析其子代遗传稳定性和差异性。【方法】以不同浓度秋水仙素不同持续处理时间处理一串红幼苗茎尖,利用形态学观测法对诱导处理后的植株进行早期的倍性鉴定,最终镜检确定一串红染色体数及加倍情况。采收种子播种并观测子代形态指标,压片检测子代染色体数目。【结果】多倍体诱导获得3株四倍体。0.1%的秋水仙素处理2d时的变异率最高为13.3%,获得2株四倍体纯合体,0.2%的秋水仙素处理3d时获得1株四倍体纯合体;四倍体、混倍体、处理后未加倍植株在外部形态上均出现变异;四倍体结实率和子代成活率低;混倍体植株子代全部为二倍体。【结论】利用秋水仙素处理茎尖法诱导可获得一串红多倍体,综合考虑,适合采用0.1%秋水仙素持续处理2d。诱导获得的四倍体结实率和成苗率低,应对获得的四倍体采用无性繁殖方法繁育。

多烯紫杉醇诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性研究

目的:探讨多烯紫杉醇(Docetaxel,Doc)诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性。方法:0.8μmol/L Doc处理SK-OV-3细胞16 h,更换为完全培养液继续培养细胞至第3天和第5天。免疫荧光染色法观察细胞形态和增殖,流式细胞术检测细胞倍性、周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:Doc处理后SK-OV-3细胞体积变大,细胞核增多,细胞增殖能力降低。Doc(3 day)组和Doc(5 day)组多倍体细胞(>4 N)百分比高于对照组(P<0.01)。Doc诱导Doc(16 h)组发生细胞周期阻滞。Doc(5 day)组细胞迁移能力低于对照组(P<0.01)。Doc(3 day)组和Doc(5 day)组早期凋亡细胞百分比高于对照组(P<0.05)。Doc(16 h)组、Doc(3 day)组和Doc(5 day)组促凋亡蛋白表达逐渐上调,抗凋亡蛋白表达下调。结论:Doc诱导卵巢癌SK-OV-3细胞形成多倍体肿瘤巨细胞,SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖和迁移能力降低,早期凋亡增加,这为探索多倍体肿瘤巨细胞特性提供了研究基础。

多倍体肿瘤巨细胞研究进展

多倍体肿瘤巨细胞(PGCCs)是一种特殊类型的癌细胞亚群,常含有单个巨大的细胞核或多个细胞核,且细胞核通常不规则。与普通二倍体肿瘤细胞相比,PGCCs细胞周期、增殖方式、分化能力、形态、大小、染色体异常、致瘤性、抵抗放化疗等方面均不相同。过去常认为PGCCs处于有丝分裂的阻滞期并且处于细胞凋亡的边缘,是无法存活的,因此不被重视。但是最近研究发现,PGCCs不仅是可生存的,而且具备胚胎干细胞样特性,通过不对称分裂产生子代细胞,进行多向分化,且在肿瘤耐药、上皮间质转化和侵袭转移中发挥重要作用。本文就PGCCs近年来的研究进展进行综述,为临床治疗提供一种新的方向和思路。

肝细胞多倍体发生机制及其与肝细胞癌形成的相关性研究进展

多倍体是指细胞中存在2套以上的染色体组。在自然界中,多倍体现象广泛存在,常见于植物类、鱼类、两栖动物类,但在哺乳动物中少见。正常生理状态下,人体多倍体细胞一般仅见于心脏、骨髓、肝脏等特定组织和器官。其中,已证实肝细胞多倍体与肝脏再生、稳态、终末分化、衰老等相关,但关于其具体功能和作用机制目前尚未明确。

紫杉醇诱导乳腺癌多倍体巨细胞产生及干性维持的研究

目的:观察紫杉醇(PTX)对乳腺癌异质性的影响,探讨乳腺癌多倍体巨细胞(PGCC)的特征及对肿瘤复发的影响。方法:观察经PTX处理后乳腺癌4T1、MDA-MB-231细胞的形态变化。运用免疫荧光、免疫组化方法、Western blot方法检测了PTX处理后乳腺癌细胞的干性标志物表达。收集新辅助化疗(NACT)后的手术患者资料,运用HE染色、免疫组化等方法进一步验证NACT后乳腺癌组织内出现的异质性变化。结果:PTX能诱导乳腺癌4T1、MDA-MB-231细胞产生PGCC,并能维持存在较长时间,且PGCC表达干性标志物。相对未治疗乳腺癌,经NACT后手术切除标本中能观察到较多的PGCC存在,同时表达干性标志物及Ki67。结论:PTX会诱导乳腺癌发生异质性变化,产生的PGCC是导致肿瘤复发的细胞学基础。

杉木多倍体变异苗诱导及倍性鉴定

为了探究秋水仙素处理对杉木萌动种子的诱变效应,以3种杉木种子为材料,用0.9%的秋水仙素溶液浸泡处理后播种,60d后统计变异苗得率并用流式细胞仪检测变异苗不同部位的细胞倍性。结果表明,经秋水仙素溶液浸泡处理后,3种来源的杉木种子变异苗得率差异显著,全同胞种子Z3#得率最高,为23.45%;3种来源的杉木种子经秋水仙素处理后所得的变异苗均表现为胚根短缩,下胚轴下部明显膨大。流式细胞仪检测表明,胚根部分57.2%的细胞为混倍体细胞,下胚轴下部42.04%的细胞为四倍体细胞,下胚轴中部四倍体细胞所占比例为9.15%,下胚轴上部和子叶部分的细胞均为二倍体细胞;秋水仙素溶液浸泡种子可诱导获得表型特征及细胞倍性发生明显变异的变异苗。本研究结果为进一步开展杉木同源多倍体新种质的创制奠定了基础。

辐照旋毛虫猪肉小鼠骨髓细胞染色体畸变试验

辐照食品安全应用的主要问题之一是其能否诱发遗传变异及导致多倍体增加。本实验通过分组给于小鼠3万Rad、10万Rad、30万Rad辐照猪肉高浓度萃取液探讨其对骨髓细胞染色体畸变,尤其是多倍体细胞增加的影响,并为进一步安全性评价及制订卫生标准提供依据。

T-2毒素诱导叙利亚地鼠胚胎细胞和人胚胎肺成纤维细胞恶性转化的研究

镰刀真菌是自然界中常见的极易污染粮食和饲料的真菌。近年来,由于在许多肿瘤高发地区发现有镰刀真菌严重污染食物的现象,对于镰刀真菌素的致癌性问题引起了越来越多的注意。T-2毒素是镰刀真菌产生的单端孢霉烯类毒素中最重要的代表,过去二十年间对其致癌性有重大怀疑,但至今仍无定论。本文分别采用叙利亚地鼠胚胎(SHE)细胞和人胚胎肺成纤维细胞(HFL)首次证明T-2毒素有诱导离体细胞恶性转化的能力,

腹水瘤细胞克隆株异质性研究

在肿瘤异质性研究中,通过细胞克隆化。

流式细胞术分析热量限制小鼠肝细胞DNA倍性的分布

流式细胞术分析热量限制小鼠肝细胞ＤＮＡ倍性的分布广州医学院神经科学研究所（５１０１８２）何旦莎美国国家毒理研究中心Ａｒｋａｎｓａｓ（７２０７９）吕明雄大多数成龄哺乳动物肝实质细胞为多倍体细胞，并且有较多的双核细胞。肝细胞的多倍体现象被认为是肝细胞均衡...

调控自噬对放射诱导多倍体宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究调控自噬对放射诱导多倍体宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法人宫颈癌细胞系Hela购自中国科学院上海细胞库。将未经照射的宫颈癌细胞系Hela作为对照组,经7 Gy剂量X线照射的Hela细胞、氯喹(50μmol/L)预处理1 h后经7 Gy剂量X线照射的Hela细胞分别记为7 Gy组和7 Gy+氯喹组。流式细胞术检测细胞倍性,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖率,划痕实验和Transwell侵袭试验分别检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞自噬、周期相关蛋白和上皮间质转化相关标志物的表达水平。结果倍性分析结果显示,对照组、7 Gy组、7 Gy+氯喹组的多倍体细胞亚群(DNA含量>4 N)比例[(5.30±0.46)%、(32.27±2.48)%、(26.37±0.90)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,培养24 h后,对照组、7 Gy组、7 Gy+氯喹组的细胞增殖率[(97.50±2.43)%、(73.27±5.86)%、(55.70±13.05)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05);培养48 h后,对照组、7 Gy组、7 Gy+氯喹组的细胞增殖率[(158.84±1.62)%、(113.64±7.02)%、(75.42±4.33)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,划痕24 h后,对照组、7 Gy组、7 Gy+氯喹组的划痕愈合面积百分率[(68.68±1.73)%、(51.79±2.53)%、(40.40±8.81)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05);划痕48 h后,对照组、7 Gy组、7 Gy+氯喹组的划痕愈合面积百分率[100%、(77.11±5.96)%、(46.611±0.82)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,对照组、7 Gy组、7 Gy+氯喹组的侵袭细胞数[(184.33±20.03)个、(73.00±11.14)个、(24.33±3.51)个]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,对照组、7 Gy组、7 Gy+氯喹组的自噬微管相关蛋白轻链3-Ⅱ/自噬微管相关蛋白轻链3-Ⅰ、P-cdc25c(ser216)、cdc25c(5H9)、E钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论调控自噬能够抑制多倍体肿瘤细胞的产生,降低放射诱导宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提示自噬可能在宫颈癌细胞的放射抵抗中起着重要的作用。

多倍体肿瘤巨细胞与肝内胆管细胞癌临床病理学特征及预后研究

目的 探讨多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)阳性肝内胆管细胞癌(ICC)病人的临床病理特征及其对预后的影响。方法 回顾性分析2005年6月至2019年6月在天津医科大学肿瘤医院接受手术的72例ICC病人的临床病理学资料,应用HE染色组织病理学分析ICC中PGCC的分布和比例,通过多变量回归分析探索PGCC与ICC临床病理学特征及术后总生存期(OS)和无复发生存期(DFS)的关系。结果 在72例ICC中,血管侵犯和术前总胆红素水平是影响ICC预后OS的独立危险因素;PGCC是影响ICC预后DFS的独立危险因素,手术切除样本中PGCC阳性ICC病人的DFS劣于PGCC阴性的病人(P<0.01)。进一步的Logistic多因素分析表明PGCC与ICC的病理学分期和肿瘤的分化程度密切相关。Ⅱ~Ⅲ期病人较Ⅰ期病人具有更高的PGCC比例(P=0.006);同时低分化的ICC较中-高分化的ICC具有更高的PGCC比例(P=0.032)。结论 PGCC与ICC病人预后不良密切相关,是影响胆管癌病人DFS的独立危险因素,有望成为评估胆管癌预后生存及指导临床诊疗的新指标。

吸烟对精液DNA指标影响的研究

目的探讨吸烟对精液DNA指标的影响,以促进男性生殖健康。方法选择322例合格的研究对象,其中195例为吸烟者,127例为不吸烟者,通过问卷调查方法收集对象的背景信息、吸烟暴露情况以及可能的混杂因素,同时收集所有研究对象的精液标本,分析吸烟对精液DNA指标的影响。结果吸烟使精液中单倍体精子的比例降低,同时使二倍体细胞以及多倍体细胞的比例升高。结论吸烟对精液质量可能有不良影响,且精液DNA指标可能对烟的作用更为敏感。对大量或长期吸烟者,其影响更为深远,应当广泛提倡戒烟。