基于砷和汞离子标记SiO_2@Au纳米探针的超敏多元免疫分析方法研究

构建了一种基于As^3＋和Hg^2＋标记SiO2@Au复合纳米探针（NPs）,以及氢化物发生-原子荧光（HGAFS）同时检测癌胚抗原（CEA）和糖蛋白19-9（CA19-9）的超灵敏多元免疫分析方法。采用氨基化SiO2（核）@AuNPs（壳）分别吸附As^3＋和Hg^2＋,并标记CEA和CA19-9的第二抗体（Ab2）,由此获得了富As（或Hg）型信号探针（As（Hg）-SiO2@Au-Ab2）。基于夹心免疫分析方法,将两种信号探针和对应的抗原以及96孔板上一抗,在板底形成两种免疫复合物（Ab1/Ag/As（Hg）-SiO2@Au-Ab2）,利用HG-AFS同时检测As^3＋和Hg^2＋,其与CEA和CA19-9的含量对数值成正比,可用于定量分析。此类探针不仅具有良好的分散性、还具有出色的信号放大效果。优化了探针合成和最佳反应条件,并对探针制备过程进行了表征。本方法与CEA和CA19-9分别在0.001-100μg/L和0.01-80 U/mL范围内呈线性关系,检出限分别为0.5 ng/L和0.005 U/mL（3σ）,低于标准ELISA方法3个数量级。用于血清样品中CEA和CA19-9同时检测,并与标准ELISA方法对照,结果一致。此免疫分析方法灵敏、简便、一次可实现多个肿瘤标志物检测,适合于基层卫生部门进行恶性肿瘤早期筛查。

一种新型多元均相时间分辨荧光免疫分析方法的建立

制备出具有光学特异性的3种不同颜色量子点纳米微球和铽螯合物,分别与CEA、AFP和HBsAg的两株抗体偶联,采用双抗体夹心法模式,充分利用两株抗体与抗原的相互作用,通过采集不同量子点发出的荧光信号,根据其信号的强弱判定标记在量子点纳米微球上的抗体结合的抗原的量,从而实现多元待分析物的定性定量分析.结果表明,量子点的荧光信号与CEA、AFP和HBsAg抗原浓度呈线性关系,其函数分别为:lgY=2.791 73+0.915 84lgX(R=0.998 08)、lgY=3.695 43+0.456 44lgX(R=0.998 48)和lgY=4.128 98+0.409 45lgX(R=0.998 45),分析灵敏度分别为:0.44、0.24和0.02ng/mL.