单克隆抗体与多克隆抗体的混合在胱抑素C测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)中的应用

为优化兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体的混合比例,将不同比例混合的抗体制备成胱抑素C(胶乳免疫比浊法)测定试剂盒,对试剂盒的灵敏度进行测定,从而筛选出最适的混合比例,与进口抗体和市面上较为认可的试剂盒进行应用比较。结果表明,兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体最适的混合比例为70%:30%;将国产兔抗人胱抑素C多克隆抗体、进口胱抑素C多克隆抗体与最适混合比例的抗体相同质量投量料同时包被成试剂,分别命名为试剂1、试剂2、试剂3,三种试剂校准后同时进行临床样本测定及相关性分析、线性实验及抗原过剩测定,数据显示,试剂3与试剂1及试剂3与试剂2之间均具有很强的临床相关性,线性实验和抗原过剩测定数据无明显差异,都可以满足应用要求;将试剂3与市场上口碑较好的的胱抑素C试剂盒进行临床样本测定比对,实验数据显示,两者在临床应用上无明显差异;通过胱抑素C单克隆抗体和多克隆抗体混合,减少了交叉反应的可能性,实现了较好的批间和批内一致性,具备更广泛的识别范围,提供了更全面、准确的识别和检测结果。

猪发育期牙胚釉原蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备

目的 制备猪釉质蛋白多克隆抗体 ,为釉原蛋白的检测提供条件。方法 选择 1月龄乳猪 ,分离埋于上下颌骨内的牙胚 ,刮取牙胚表面干酪样尚未完全矿化的釉质基质 ,通过盐酸胍抽提及SephadexG_2 0 0柱层析分离纯化猪发育期牙胚釉原蛋白 ,联合免疫家兔 ,抗血清经DE_5 2纤维素纯化 ,并经ELISA测定抗体效价。结果 SDS_PAGE电泳结果发现采用SephadexG_2 0 0葡聚糖凝胶过滤能达到较为理想的釉原蛋白分离纯化效果 ,用所提纯的猪釉原蛋白免疫家兔 ,成功地制得兔抗猪釉原蛋白抗血清 ,抗血清稀释达 1∶32 0 0 0时 ,采用ELISA法仍有明显的抗原抗体反应。结论 本实验成功制备得到抗釉原蛋白多克隆抗体 ,为釉原蛋白的检测提供了条件。

鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备

将编码鸡白细胞介素 - 18(interleukin- 18,IL- 18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体 p PROEXTMHT中 ,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌 DH5α并用 IPTG于 37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,目的蛋白表达量占菌体蛋白的 30 %。 SDS- PAGE和 Western blot分析显示 ,表达的鸡 IL-18融合蛋白相对分子质量约为 2 30 0 0。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IL- 18融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射豚鼠 ,制备豚鼠抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡 IL- 18融合蛋白 ,并制备了抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,为下一阶段关于鸡 IL -

泡球蚴Em18多克隆抗血清的制备和鉴定

目的:制备和鉴定泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清。方法:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒pET41a-Em18,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18-GST蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备鼠源抗Em18多克隆抗体,采用ELISA和Western blot法鉴定其特异性。结果:(1)SDS-PAGE检测表明,rEm18-GST蛋白得到成功表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。(2)纯化后获得高纯度的rEm18-GST蛋白。(3)ELISA结果表明,抗Em18抗血清的抗体滴度为1∶25600;Western blot结果表明抗Em18抗血清能与rEm18-GST蛋白发生特异性结合。结论:获得了特异性识别rEm18-GST蛋白的多克隆抗体,为进一步筛选Em18模拟抗原表位奠定基础。

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50μg蛋白/只.次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng.mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59、163.80和166.51 ng.mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng.mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。

人视黄醇结合蛋白4多克隆抗血清的制备及在妊娠糖尿病中的初步应用

目的:制备抗人视黄醇结合蛋白4(retinal binding protein4,RBP4)的多克隆抗血清并用于妊娠糖尿病(GDM)血液和胎盘的检测。方法:用自制rhRBP4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗血清,Western blot检测特异性,ELISA法测定效价,收集20例GDM患者和15例正常孕妇的血液和胎盘,检测RBP4的水平和分布。结果:制备的抗血清效价为1∶128000。与正常孕妇相比,GDM患者血清中RBP4水平明显升高,其分娩胎盘的滋养层细胞质和胞膜中RBP4也显著高表达。结论:制备的多克隆抗血清可初步用于GDM患者血清或组织样本中RBP4的检测,为进一步用于临床检测奠定基础。

球孢白僵菌CDEP2基因原核表达、蛋白纯化及多克隆抗血清制备

类枯草杆菌蛋白酶是昆虫致病真菌重要的毒力因子,利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因。将其与质粒pET28a连接,构建重组原核表达载体pET28-CDEP2,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE检测His-CDEP2融合蛋白以包涵体方式大量表达并对其进行纯化。用SDS-PAGE分离纯化的CDEP2蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗血清。Western blotting免疫印迹检测分析表明,该抗血清对CDEP2蛋白有特异性识别能力,可用于对CDEP2蛋白功能的进一步研究。

兔抗甲胺磷多克隆抗体的制备

采用水溶性碳化二亚胺法 (EDC) ,将MTP与牛血清蛋白 (BSA)、人血清蛋白 (HSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联 ,分别合成免疫抗原MTP BSA、MTP HSA和包被抗原甲胺磷 鸡卵清蛋白 (MTP OVA) ,用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫 ,制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体 (polyclonalantibody ,PAB) ,效价分别为 1∶15 0 0 0和 1∶12 0 0 0。

特异性抗cTnI多克隆抗体的制备

目的 制备特异性抗人心肌肌钙蛋白1（cTnI）多克隆抗体。方法 用人cTnI免疫家兔,制备抗人cTnI多克隆抗体,采用膜渗滤亲和层析法吸附掉与骨骼肌肌钙蛋白1（aTnI）有交叉反应的多抗,制备特异性抗cTnI多克隆抗体。结果 抗体经槽式对流兔疫电泳、酶联免疫吸附试验证明对cTnI具有高度特异性,与sTnI无交叉反应。结论 为应用一步夹心酶联免疫吸附法检测cTnI奠定了基础。

抗哇巴因多克隆抗体F(ab)_2片段的研制及鉴定

目的 用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体 ,制备出F(ab) 2 片段 ,为改型抗体的研究提供依据。方法 免疫家兔制备出抗哇巴因多克隆抗体 ,并用胃蛋白酶分别在不同的酶解条件下消化抗体 ,继之用高效液相排阻色谱法 (HPSEC)对其进行分析、纯化 ,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测、鉴定其活性。结果 用胃蛋白酶 2mg/1 0 0mg抗哇巴因多克隆抗体 ,消化 1 8h ,反应体系的 pH3 0时 ,可获得F(ab) 2 片段。结论 用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体是研制出有活性的F(ab) 2

基于密码子优化策略的斑马鱼FOXP3A分子的原核表达及多克隆抗血清制备

目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894 bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5 mmol/LIPTG诱导10 h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×10~5以上。结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具。

抗氯霉素多克隆抗体的制备

用重氮化和CDI两种方法合成了CAP全抗原 ,紫外分析和商业试剂盒ELISA鉴定表明合成成功 ;动物免疫 4次后采血检测 ,多克隆抗体 50 %抑制率探测限可达1 0ng/ml,效价可达 1 0万以上稀释倍数 ,特异性较好。

抗莫能菌素多克隆抗体检测鸡组织中莫能菌素残留的研究

本文用自制的抗莫能菌素多克隆抗体检测肉鸡肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中莫能菌素的残留。将莫能菌素以30.0、60.0、120.0μg/kg分别添加到经处理的各空白组织中,用竞争ELISA法测得莫能菌素在肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中的回收率为78.7%～104.3%,变异系数为4.2%～18.0%,检测极限为5.0～8.5μg/kg。

斑点免疫金渗滤法检测抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性研究

采用斑点免疫金渗滤法对抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性进行检测。结果表明金探针具有很强的选择性,斑点免疫金渗滤法能准确快速地检测出多克隆抗体的特异性。

华东葡萄转录因子VpSBP3基因原核表达、纯化及多克隆抗血清制备

【目的】制备华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)转录因子VpSBP3基因抗血清,为研究VpSBP3基因功能奠定基础。【方法】构建华东葡萄转录因子VpSBP3基因重组原核表达载体pGEX-VpSBP3,转化大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3),以IPTG为诱导剂诱导目的融合蛋白的表达。切胶电透析回收诱导表达的VpSBP3融合蛋白免疫新西兰兔,制备VpSBP3抗血清。【结果】重组原核表达载体pGEX-VpSBP3在DE3中高效表达出了分子质量为68 kD的GSTVpSBP3融合蛋白。回收的目的融合蛋白免疫新西兰兔后得到了抗血清,经Western-Blot检测,抗血清的免疫-抗原反应良好。【结论】在27℃、0.7 mmol·L-1IPTG过夜培养的诱导条件下,融合蛋白GST-VpSBP3过量表达。免疫大白兔获得的血清特异性强,效价高,可用于VpSBP3基因功能分析。

肺炎链球菌SPD1672蛋白EL4功能环的原核表达及多克隆抗血清制备

目的原核表达肺炎链球菌SPD1672蛋白膜外EL4功能环,制备并鉴定其多克隆抗血清。方法生物信息学分析SPD1672蛋白结构功能区,用p Cold TF质粒构建含EL4功能环的原核表达载体,IPTG诱导蛋白质表达后行镍柱纯化。经HRV 3C蛋白酶酶切、鉴定后,免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗血清,间接ELISA鉴定效价,western blot鉴定抗血清与肺炎链球菌D39菌株天然蛋白质的亲合力。结果 EL4环可能为SPD1672蛋白酶活性中心。成功构建p Cold TF-SPD1672EL4原核表达载体,诱导表达后获得纯度大于95%的重组融合目的蛋白质。该蛋白质免疫新西兰大白兔后获得效价达到5.12×106的多克隆抗血清,此抗血清与重组的SPD1672EL4蛋白及肺炎链球菌中天然SPD1672蛋白有较好的亲合力。结论成功获得高纯度的肺炎链球菌SPD1672EL4蛋白及其特异的多克隆抗血清,为进一步对SPD1672蛋白的结构与功能研究奠定了基础。

抗人SDF-1多克隆抗体对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究抗人基质细胞衍生因子(SDF-1)多克隆抗体对糖尿病大鼠(DM)视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,为抗SDF-1多克隆抗体用于防治糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopa-thy,DR)提供实验依据。方法:采用链脲佐菌素腹腔注射,建立DM动物模型。治疗组,用抗人SDF-1多克隆抗体治疗,对照组和非治疗组只给予等量生理盐水。结果:对照组大鼠视网膜VEGF的含量为(4.25±0.81)ng/ml,未治疗组大鼠视网膜VEGF的含量为(13.32±1.12)ng/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);治疗组大鼠视网膜VEGF的含量为(6.73±1.25)ng/ml,同未治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:抗人SDF-1多克隆抗体抑制糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子的表达。

教学用纯化水疱性口炎病毒抗原制备兔多克隆抗体结果分析

目的用纯化水疱性口炎病毒抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,经免疫学方法检测并分析其结果。方法纯化VSV抗原免疫家兔后收集免疫血清,采用双向琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体双向琼脂扩散试验最高效价为1∶32,ELISA法最高效价为1∶320,中和试验最高效价为1∶256。结论纯化VSV抗原制备的兔抗VSV多克隆抗体特异性好、敏感性高,可为课堂教学、VSV科研及流行病学调查提供可靠依据和技术保障。

抗rhANG多克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备抗重组人血管生长素 (recombinanthumanangiogenin ,rhANG)多克隆抗体 ,并初步应用于消化道肿瘤实验研究。方法 用重组基因工程菌表达 ,SDS法纯化的rhANG蛋白免疫新西兰兔 ,制备并纯化多克隆抗体 ,并用免疫组织化学和ELISA等方法对多克隆抗体进行测定。结果 此次获得的抗血清ELISA方法效价达 1∶12 80 0 ,检测ANG灵敏度最低为 8～ 16μg/L ,不与其他细胞因子和血清反应。该抗体与 2 0 %～ 3 0 %上消化道恶性肿瘤呈阳性反应。结论 ANG多克隆抗体对表达ANG的肿瘤组织反应特异性强 ,ELISA方法检测灵敏度高 。

抗DNA多克隆抗体免疫胶体金针对接触性DNA孵育条件的建立

文章利用免疫胶体金的生物化学特性,吸附反应体系中的DNA,通过离心将其分离,并经过洗涤再离心,沉淀可直接用于PCR反应。实验结果表明:5μL和10μL免疫胶体金在室温下振荡孵育15 min对接触性DNA有足够的吸附能力。