小麦胚乳贮藏蛋白多克隆抗体间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)的建立

通过对比试验研究了蛋白提取液、提取时间、还原剂DTT、封闭液、包被物与抗体浓度等对小麦胚乳贮藏蛋白多克隆抗体的影响,建立了适宜于小麦胚乳醇溶蛋白(G liad in)和低分子量谷蛋白亚基(Low molecu lar we ight glute-n in subun it,LMW-GS)多克隆抗体的间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)。

酶联免疫吸附试验(ELISA)在自身免疫性疾病特异性抗体检测中的应用研究

研究酶联免疫吸附试验(ELISA)用于自身免疫性疾病特异性抗体检测的情况,并且使用胶体金法作为对比。方法 选取60例在医院进行HIV抗体检测的病例,利用表1的数据,观察这两种方法在HIV抗体筛查中的阳性检测结果的一致性。结果 同时,通过表2的数据,对比两种方法在特异度、灵敏度和阳性预测值等方面的差异。最终发现,ELISA在HIV抗体检测中的表现较优。其特异度达到了86.66%,灵敏度为83.33%,阳性预测值也为83.33%。相较之下,胶体金法的表现稍逊,其特异度为70.00%,灵敏度仅为50.00%,阳性预测值为60.00%。统计分析显示,ELISA在灵敏度(χ2=1.500, P=0.223)及阳性预测值(χ2=0.749, P=0.383)上均优于胶体金法,但特异度差异无统计学意义(χ2=0.424, P=0.513)。结论 ELISA在自身免疫性疾病特异性抗体检测中展现出较高的灵敏度和阳性预测值,适用于高精度要求的抗体筛查。相较胶体金法,ELISA在灵敏度和预测值方面更具优势,但进一步研究仍需纳入更多样本以验证其应用效果。

莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法

莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。

固相凝集法和酶联免疫吸附试验检测血小板输注无效患者血小板自身抗体的对比研究

目的探讨固相凝集法(solid-phase agglutination,SPA)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)(PAKAUTO试剂盒)检测血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)患者血小板自身抗体的特点和一致性。方法选取2021年7月至2023年9月北京市红十字血液中心血小板抗体筛查结果为阳性且无法判定为血小板特异性抗体的PTR患者20例,采用SPA和ELISA(PAKAUTO试剂盒)分别进行血小板自身抗体检测;采用荧光PCR熔解曲线法进行人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)基因型分型检测。结果20例患者中,男7例,女13例,年龄7~83岁,平均(50.5±20.0)岁。SPA检测血小板自身抗体阳性率为100%,均为结合型;ELISA(PAKAUTO试剂盒)检测阳性率为95%(19/20),其中结合型16例、游离型14例,两种方法检测血小板自身抗体阳性率的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。抗GPⅠb/Ⅸ抗体是最多的结合型自身抗体(80.0%),抗GPⅠa/Ⅱa抗体是最多的游离型自身抗体(70.0%)。结合HPA基因型分型检测结果,患者产生的抗体中均包含针对HPA-5a的自身抗体。结论SPA和ELISA(PAKAUTO试剂盒)检测PTR患者血小板自身抗体一致性较高,ELISA(PAKAUTO试剂盒)能区分出不同的抗体特异性及分布情况;SPA简便易行,在早期诊断方面更能体现其应用价值。

酶联免疫法与胶体金法检测HIV抗体的效果对比

目的:比较酶联免疫法与胶体金法检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的效果。方法:选择聊城市疾病预防控制中心2021年1月—2022年12月收集的110例疑似艾滋病(AIDS)患者的血液样本,全部样本均采用蛋白印迹法、酶联免疫法、胶体金法检测,以蛋白印迹法检测结果为金标准,对比分析酶联免疫法、胶体金法检测HIV抗体的灵敏性、特异性、准确性。结果:110份血液样本中,蛋白印迹法检出HIV阳性、阴性分别有65份、45份;酶联免疫法检出HIV阳性、阴性分别有70份、40份;胶体金法检出HIV阳性、阴性分别有78份、32份。酶联免疫法、胶体金法检测HIV抗体的特异性分别为88.89%、71.11%,准确性分别为95.45%、88.18%;酶联免疫法检测HIV抗体的特异性、准确性均高于胶体金法,差异有统计学意义(P<0.05);但两种检测方法的灵敏性(100.00%vs100.00%)对比,差异无统计学意义(P>0.05)结论:在HIV抗体检测方面,胶体金法和酶联免疫法的准确性均较高,但酶联免疫法的特异性、准确性更高,可获得更准确的检测结果,利于AIDS的早期诊断。

呋喃唑酮代谢物单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68×1010 L/mol)和高特异性(与其它功能类似物交叉反应小于0.1%)抗AOZ单克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源半抗原/包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA方法灵敏度的影响。另外,采用最佳的特征结构异源包被原H5-OVA,建立了以对硝基苯甲醛(p-NP)为衍生剂的AOZ间接竞争ELISA(icELISA)和直接竞争ELISA(dcELISA)检测方法。结果表明:icELISA模式的AOZ检测IC50为0.503μg/L,定量检测线性范围(IC20～IC80)为0.06～14.0μg/L,检出限(IC10)达0.017μg/L;dcELISA模式的AOZ检测IC50为1.19μg/L,定量检测线性范围为0.14～23.6μg/L,检出限为0.056μg/L。两种方法对AOZ的检测灵敏度和定量线性范围均达到相关检测限量要求,可满足不同需求的实际样品检测。

氟甲喹单克隆抗体制备、鉴定及间接竞争酶联免疫吸附分析法

以氟甲喹(FLU)为原料,合成4个碳原子手臂的半抗原(FLUABA),采用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,通过免疫Balb/c小鼠及细胞融合,获得1株稳定分泌抗氟甲喹单克隆抗体的杂交瘤细胞株DB6-E7,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数(KA)为8.19×108L/mol。将氟甲喹、FLUABA及6个碳原子手臂的半抗原FLUACA分别与卵清白蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,研究异源包被对间接竞争ELISA灵敏度的影响。结果表明,异源包被可显著提高ELISA方法的灵敏度。基于最佳异源包被(FLU-OVA)的酶联免疫吸附分析法的IC50为26.33μg/L,检出限为4μg/L,定量检测范围为8.0～114μg/L(IC20～IC80)。与喹诺酮类药物及结构类似物几乎不存在交叉反应,特异性高。此方法可满足畜禽产品中氟甲喹残留的快速筛查。

以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究

本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%。在小麦样品中的加标回收率为83%～116%,变异系数为9.4%～19.8%。测试23份样品,赭曲霉毒素A的含量在0.6～2.56μg/kg之间。

用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟抗体发现隐性猪瘟

用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟血清抗体。测得该场母猪４０份血清样品中，猪瘟弱毒抗体效价ＯＤ值较高，有１００％保护率，测得仔猪２４０份血清样品中，猪瘟弱毒抗体效价ＯＤ值适中，有８７．６％的保护率。但是发现母猪群中有１０％隐性猪瘟感染，仔猪群中有３．７％隐性猪瘟感染，其强毒抗体效价ＯＤ大于０．５，体内带有猪瘟病毒，且不显临床症状。遇见免疫接种、转群、气候骤变等应激，则发生非典型猪瘟。

呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度(IC50)为12.37ng/mL;定量检测线性范围(IC20～IC80)为0.439～110.78ng/mL;检测限(IC10)达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鹿布氏杆菌抗体的研究

通过对布氏杆菌脂多糖抗原、超声波破碎抗原和离心抗原进行筛选和优化 ,确定超声波破碎抗原为最佳抗原 ,首次建立了检测鹿布氏杆菌抗体的间接ELISA。对其特异性、敏感性和重复性进行试验 ,并与其他常规方法进行比较试验 ,结果表明 :该方法的特异性强、敏感性高和重复性好 。

双酚A单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

采用活泼酯法将双酚A的结构类似物双酚酸与载体蛋白偶联制备人工抗原,用制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法进行细胞融合制备双酚A单克隆抗体,成功获得一株分泌抗双酚A单克隆抗体的细胞株3H1,经鉴定抗体属于Ig G1亚型,轻链为κ,并建立了间接竞争酶联免疫分析法。线性范围为1～50 ng/m L,最低检测限为0.43 ng/m L,半数抑制浓度为6.56 ng/m L。回收率为82.83%～101.94%,变异系数为2.94%～12.95%。该方法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。

间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

应用超声波裂解法制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板,成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。

腹泻性贝毒软海绵酸单克隆抗体的制备和酶联免疫检测方法的建立

采用细胞融合技术制备抗赤潮毒素腹泻性贝毒软海绵酸的单克隆抗体,应用此抗体发展建立了软海绵酸的间接竞争酶联免疫检测方法。采用碳二亚胺法,将半抗原与载体蛋白偶联,得到免疫抗原和包被抗原。免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA方法筛选阳性克隆,经多次克隆化,获得了4株能稳定分泌抗软海绵酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过小鼠体内诱生腹水方法获得单克隆抗体,建立分析检测软海绵酸的间接竞争酶联免疫方法。最低检出限为31.2ng/ml,批内平均变异系数8.1%,回收率为87%-112%。

麻痹性贝毒单克隆抗体的制备和酶联免疫检测方法的建立

目的:利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备麻痹性贝毒(PSP)的单克隆抗体,以便建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法。方法:采用甲醛法将半抗原石房蛤毒素(STX)与血蓝蛋白(KLH)偶联制备成完全抗原STX-KLH,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,HAT选择培养杂交瘤细胞,利用ELISA方法筛选出分泌抗STX-McAB的杂交瘤细胞株,并通过小鼠体内诱生腹水的方法获得单克隆抗体。结果:共获得4株能稳定分泌麻痹性贝毒抗体的阳性细胞株,建立了分析检测麻痹性贝毒的间接竞争酶联免疫方法。对PSP中STX组分的检出限为20 ng/ml,IC50为220 ng/ml;对GTX2/3的检出限为10 ng/ml,IC50为50 ng/ml。结论:所制备抗体具有高特异性和灵敏性,可用于研制高质量的国产快速检测麻痹性贝毒ELISA试剂盒。

地西泮单克隆抗体的制备及其酶联免疫吸附检测方法的建立

目的：制备地西泮(diazepam, DZP)单克隆抗体,并且对制备的抗体进行一系列性质鉴定。方法利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3-(3-dimethyllaminopropyl) carbodi imide hydrochloride, EDC·HCl]法合成免疫原和包被原,用免疫原免疫Balb/C小鼠,当效价到1：16000以后取小鼠脾脏与SP2/0进行细胞融合。然后采用竞争结合双阳性两步筛选法,筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,并且利用有限稀释亚克隆方法得到单株细胞,采用体内诱生法制备腹水型单克隆抗体。利用辛酸-饱和硫酸铵法对腹水型抗体进行纯化,利用酶联免疫吸附法、表面等离子共振仪(surface plasmon resonance, SPR)等方法对纯化后的抗体进行性质鉴定。结果成功合成了地西泮免疫原和包被原,免疫Balb/C小鼠7次后效价达到1：16000,最终制备出单克隆抗体,抗体解离常数(dissociation constants, KDs)为4.0985×10-7 mol/L,且与大部分结构类似物没有明显的交叉反应。应用此抗体建立间接竞争ELISA法,抗体的IC50=10.8 ng/mL,检测范围为0.45~862.00 ng/mL。结论本研究制备出了地西泮单克隆抗体,为地西泮的免疫学检测提供了有力的支持。

噻虫嗪单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法的建立

通过化学修饰合成了噻虫嗪人工半抗原,采用碳二亚胺法将该半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,成功制备了分子结合比合理的免疫原和包被原。经过免疫原免疫6周龄Balb/c小鼠、PEG介导免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞的融合和阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆化,获得了效价高达1∶6.4×105的抗噻虫嗪单克隆抗体,抗体亚类为IgG1型。优化了ELISA实验条件,建立了基于单克隆抗体技术的噻虫嗪残留间接竞争ELISA方法。本方法的抑制中浓度(IC50)为0.0255mg/L,检测灵敏度(IC20)为0.0022mg/L,检出限(IC10)为0.001mg/L。除噻虫胺外,该抗体与其它噻虫嗪结构类似物无交叉反应。以自来水为基质的噻虫嗪添加回收实验显示,0.01,0.5和10.0mg/L添加水平的回收率均大于75%,且各添加水平重复测定8次的相对标准偏差均小于8%,说明所建立的间接竞争ELISA准确度高,重复性好,适合水中噻虫嗪残留的检测。

小麦球蛋白单克隆和多克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附法快速检测技术

目的建立小麦球蛋白的ELISA检测技术,用于蛋白质掺假以及过敏原成分的快速检测。方法从麦胚粉中提取球蛋白,抗原免疫Balb/c小鼠进行4次免疫后,通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备单克隆抗体,同时制备兔抗小麦球蛋白的多克隆抗体。通过棋盘滴定法,初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA。结果通过免疫和杂交瘤技术获得了抗小麦球蛋白的单克隆抗体,纯化后抗体的效价均达到1:107,通过免疫兔制备的多克隆抗体经纯化后效价在1:2.4×105左右,所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测限为10 ng/m L,与其他物种的蛋白不发生交叉反应。结论本文建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性和灵敏度,为建立乳品中小麦成分掺假及过敏原成分快速检测提供理论依据。

化学发光免疫分析法与酶免疫法在艾滋病抗体检测中的效果对比

此篇研究主要是以化学发光免疫分析法与酶免疫法运用到艾滋病抗体检测中所具有的实践作用进行深入分析研究,希望能够为艾滋病抗体检测工作的未来发展有所帮助。方法 从临床中挑选六十个样本,采用随机组合分组的方法形成两组,运用酶联免疫法(酶联法组)和胶体金法(胶体金法组)进行两组样本的艾滋病抗体检测工作。结果 利用专业方法实施检测工作,对所获得的数据信息进行详细的记录和对比,最终发现在检测结果的准确性、检测方法的敏感度几个方面中的表现中,酶联免疫法相对于胶体金法具有更强的实用性和准确性。结论 酶联免疫法与胶体金法被运用到艾滋病抗体检测环节中,都表现出了良好的实用性和准确性,在进行临床检测工作的过程中,还需要充分结合各方面实际情况和需要来进行挑选和使用。