利用pHsh载体克隆与表达多功能半纤维素酶

将来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)基因构建到新型热激质粒pHsh上,得到质粒pHsh-xarB。将来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus DSM5826)的木聚糖酶A(XynA)基因构建到pHsh-xarB上,得到表达质粒pHsh-xarB-xynA。将重组质粒pHsh-xarB-xynA转入大肠杆菌Escherichia coli JM109进行表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为108 000,与理论值相符。Xyn-SDS-PAGE显示该融合酶具备木聚糖酶的活性。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。

利用pET-20b克隆与表达多功能半纤维素酶

将来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus,JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)构建到pET-20b(+)上,得到质粒pET-20b-xarB。将来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus DSM 5826)木聚糖酶A(XynA)构建到pET-20b-xarB上,得到表达质粒pET-20b-xarB-xynA。将重组质粒pET-20b-xarB-xynA转入大肠杆菌Escherichia coli JM109(DE3)进行表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为108 kDa,与理论值相符。