刺参多功能表皮生长因子6(megf6)cDNA克隆及在肠再生过程中的表达分析

为了探究刺参Apostichopus japonicus多功能表皮生长因子6(multiple epidermal growth factor 6)的生物学信息和功能,利用RACE技术克隆了体质量为(92.0±4.0)g的成体刺参megf6基因(Aj-megf6)cDNA全长序列,并分析了该基因的信息学特征及其在肠再生过程中表达水平的变化。结果表明:刺参megf6基因的cDNA序列全长为5665 bp,共编码了1604个氨基酸,具有37个EGF样结构域;该基因编码蛋白的相对分子质量为172500,理论等电点为4.74,该蛋白具有信号肽,为分泌蛋白,属于亲水性、非跨膜蛋白,共有53个磷酸化位点,分别为23个Ser位点、12个Thr位点、18个Tyr位点;MEGF6氨基酸多序列比对发现,刺参MEGF6与其他物种的氨基酸序列一致性为38.59%~49.07%,其中与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus的一致性最高,为49.07%,其次为长棘海星Acanthaster planci(48.71%);基于MEGF6氨基酸序列的系统进化树分析显示,刺参与紫球海胆、长棘海星聚为一支,该结果符合刺参的分类和进化地位,MEGF家族成员间比对分析显示,MEGF家族成员间具有一定的分化;实时定量PCR(qPCR)结果显示,在刺参肠再生过程中megf6 mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,其中再生6 d时的表达量达到峰值,为对照组的126.47倍,再生18 d时降至正常水平。研究表明,刺参megf6基因的表达与刺参肠管形态的变化趋势相一致,推断megf6可能在刺参肠再生过程中发挥重要作用。

人类表皮细胞和表皮样癌细胞系可表达与释放IFNβ_2(B细胞分化因子)或杂交瘤生长因子(IL-6)(文摘)

IL-6即是已知的IFN—β2。杂交瘤生长因子、肝细胞刺激因子及B细胞分化因子，能介导急性期应答，包括发热，淋巴细胞刺激功能及抗病毒活性。IL-6由单核细胞．纤维母细胞某些淋巴细胞及多种肿瘤细胞所产生；本文研究证明IL-6为多功能的细胞因子，也是由正常人类表皮细胞(EC)及人类上皮样癌细胞系(A631．KB)所释放。

CD44v6、EGFR及nm23-H1基因蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的 探讨食管鳞癌中CD4 4v6、EGFR及nm2 3 H1蛋白表达的意义。方法 应用免疫组化S P法检测 5 0例食管鳞癌中CD4 4v6、EGFR及nm2 3 H1蛋白表达。结果 CD4 4v6、EGFR、nm2 3 H1蛋白表达总阳性率分别 6 4 %、70 %、5 0 % ;显示CD4 4v6及EGFR阳性表达率与食管鳞癌分化程度、浸润深度及淋巴结转移率呈正相关 (P <0 .0 5及P <0 .0 1) ,与患者预后呈负相关 (P <0 .0 0 5 ) ;而nm2 3 H1蛋白表达则与以上两者表达状况相反。结论 同时检测食管鳞癌中CD4 4v6、EGFR及nm2 3 H1基因蛋白表达水平 ,对判断食管鳞癌恶性程度、浸润转移潜能及评估患者预后有一定参考价值。

人乳头状瘤病毒16型E6/E7基因对人喉鳞癌细胞系表皮生长因子受体和基质金属蛋白酶9表达的影响

表皮生长因子受体（EGFR）和基质金属蛋白酶（MMP）9在肿瘤的侵袭和转移发生过程中发挥着重要作用，其表达上调能导致肿瘤的侵袭和转移潜能增强。人乳头状瘤病毒16（HPV16）为喉鳞癌的主要致病因素，其主要转化活性部位在E6和E7开放读码框架。我们采用脂质体转染技术将携带有HPV16-E6／E7DNA的真核表达质粒导入HPV阴性的Lscc-02喉鳞癌细胞系，使其在细胞中表达，研究其对Lscc-02喉鳞癌细胞系EGFR和MMP-9mRNA及蛋白表达的影响，探讨HPV16-E6／E7基因与喉鳞癌演进及预后的关系。

共同沉默DcR3和EGFR基因对结肠癌细胞株SW480体外生长的影响

目的探讨共同沉默诱骗受体3(DcR3)和表皮生长因子(EGFR)基因对结肠癌细胞株SW480生长增殖的影响和诱导凋亡作用研究。方法根据DcR3、EGFR的cDNA序列构建3组针对DcR3和EGFR的siRNA,分别使用脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将各个siRNA导入结肠癌细胞株SW480中,48h后通过实时荧光定量PCR检测各个siRNA对肿瘤靶基因mRNA表达的影响,采用Western-blot技术检测其靶基因蛋白的表达水平,筛选出对人结肠癌SW480细胞系中DcR3和EGFR抑制效果最强的siRNA,然后单独或联合转染SW480细胞,MTT法检测转染后对结肠癌细胞株SW480生长增殖活性的影响,流式细胞仪检测对结肠癌细胞株SW480的诱导凋亡作用。结果共同沉默DcR3和EGFR基因对SW480细胞增殖的抑制作用优于DcR3或EGFR单基因沉默组(P<0.05)。双基因共沉默组、DcR3单基因沉默组、EGFR单基因沉默组转染48h后转染细胞的凋亡率分别为(20.1±1.7)%,(16.5±2.2)%及(15.9±1.3)%,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论DcR3和EGFR双基因共沉默能有效抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖并诱导其凋亡,且作用优于DcR3或EGFR单基因沉默。

MIG6调控孕酮反应及其肿瘤抑制作用研究进展

丝裂原诱导基因6(MIG6)是表皮生长因子受体(EGFR)的诱导反馈抑制因子,能调节EGFR的激活和稳定性。MIG6在作为孕酮靶基因的同时,又能调节孕酮对雌二醇的拮抗效应。MIG6还具有抑制肿瘤发生的能力,MIG6表达下调或缺失与子宫内膜异位症(EMs)的孕酮抵抗和子宫内膜癌的发生密切相关。综述MIG6对EGFR信号的反馈调节机制、MIG6对孕酮效应的调节和MIG6与EMs孕酮抵抗及子宫内膜癌发生之间的关系,为克服EMs孕酮抵抗及子宫内膜癌的治疗提供理论基础。

顺铂植入剂对人胃癌裸鼠移植瘤中SYK、HER2、CD44V6和PTEN表达的影响

目的观察新型顺铂植入剂与常规顺铂注射液在人胃癌裸鼠移植瘤模型中促肿瘤细胞凋亡以及对脾酪氨酸激酶(SYK)、人表皮生长因子受体2(HER2)、黏附分子CD44的变异体6(CD44V6)、与张力蛋白同源的人第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)在胃癌组织中表达水平的影响差异,探讨新型顺铂植入剂在胃癌发生、发展过程中的治疗优势。方法用人胃癌SGC7901细胞株建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,随机分3组:PBS瘤内注射组、顺铂瘤内注射组和顺铂植入剂植入组,每组6只。经药物干预后,记录瘤重,计算抑瘤率,并对瘤体进行HE染色,通过免疫组织化学法检测SYK、HER2、PTEN、CD44V6表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果顺铂植入剂能显著抑制移植瘤的生长,促进其凋亡并能较显著提高SYK和PTEN的表达[顺铂植入剂植入组结果均比PBS瘤内注射组、顺铂瘤内注射组高,差异有统计学意义(P<0.05)],降低HER2和CD44V6表达[顺铂植入剂植入组结果均比PBS瘤内注射组、顺铂瘤内注射组低,差异有统计学意义(P<0.05)]。结论顺铂植入剂可能通过下调HER2、CD44V6或上调SYK、PTEN的表达来促进癌细胞的凋亡以发挥抗肿瘤的作用,从而为临床胃癌的治疗提供新思路。

S100钙结合蛋白A6对EGFR 19号外显子缺失的人肺腺癌细胞吉非替尼耐药性的影响

目的分析S100钙结合蛋白A6(S100A6)对EGFR 19号外显子缺失的人肺腺癌细胞吉非替尼耐药性的影响。方法本实验时间为2023年6—12月。取对数生长期EGFR 19号外显子缺失的人肺腺癌细胞PC9细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B细胞,采用qRCR法检测其S100A6 mRNA表达水平,采用Western blotting法检测其S100A6表达水平。取对数生长期PC9细胞,将其分为实验组(转染S100A6基因过表达载体)和对照组(空PC9细胞)。采用MTT法检测两组不同浓度(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)吉非替尼干预24、48、72 h时的细胞抑制率。结果PC9细胞中S100A6 mRNA及其蛋白表达水平低于BEAS-2B细胞(P<0.05)。0μmol/L吉非替尼干预24、48、72 h及10.0μmol/L吉非替尼干预24 h时,两组细胞抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05);0.1、1.0μmol/L吉非替尼干预24、48、72 h及10.0μmol/L吉非替尼干预48、72 h时,实验组细胞抑制率低于对照组(P<0.05)。结论过表达S100A6会促进EGFR 19号外显子缺失的人肺腺癌细胞对吉非替尼耐药。

EGFL6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的 ：通过特异性小干扰RNA（small interference RNA,si RNA）抑制人黑素瘤A375细胞中表皮生长因子样结构域蛋白6（epidermal growth factorlike-domain 6,EGFL 6）基因表达,探讨EGFL 6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响。方法：设计合成靶向EGFL 6基因的siRNA（命名为EGFL6-siRNA）,通过脂质体转染法将该siRNA转染入黑素瘤A375细胞,然后采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测黑素瘤A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法和Transwell实验分别检测A375细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：在成功转染EGFL6-siRNA 48 h后,A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白表达水平均明显下降（P值均〈0.01）。EGFL6-siRNA转染组A375细胞在转染后24~72 h各时间点的细胞增殖能力均受到明显抑制（P值均〈0.01）,且细胞侵袭能力显著降低（P〈0.01）。结论：特异性siRNA能够有效地沉默人黑素瘤A375细胞中EGFL 6基因的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。