三重四级杆气质联用仪多反应监测模式测定莜面中脂肪酸含量

采用三重四级杆气质联用仪(GC/MS/MS)多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)建立莜面中脂肪酸含量的分析方法。莜面样品和脂肪酸标准品经过氢氧化钾-甲醇和三氟化硼-甲醇溶液甲酯化15 min生成对应的脂肪酸甲酯。经DB-FastFAME(90 m×0.25 mm×0.25μm)色谱柱在电子轰击电离(EI)源下采用多反应监测模式进行扫描,外标法定量分析。40种脂肪酸甲酯在38 min内达到完全分离,脂肪酸甲酯化标准品在0.4~40μg/mL浓度范围内有良好的线性关系,相关系数R均达到0.9997。C20:2等6种脂肪酸定量限为0.003 g/100 g,其余34种脂肪酸定量限为0.0006 g/100 g。脂肪酸在3个浓度添加水平下的加标回收率为86.8%~107.3%,精密度在0.9%~5.2%之间。此法操作简便,选择性高,准确度、精密度、灵敏度好,适用于莜面中脂肪酸含量的快速、准确测定。

利用液相色谱-质谱多反应监测方法测定食物中主要的牛奶过敏原α-酪蛋白

采用液相色谱-质谱串联的多反应监测技术检测食物中的牛奶过敏原成分α-酪蛋白,检出限达到了0.5mg/L,与目前已报道的检出限水平相当。该过敏原成分在0.5～250 mg/L范围内线性关系良好,说明本方法对于食品中牛奶过敏原成分的检测具有极好的实际应用价值。

液质联用多反应监测法定量目标多肽或蛋白质

为建立优化的血浆内源性多肽提取方法,并且构建目标多肽和蛋白质的质谱定量方法,本研究考察了超滤法、有机溶剂沉淀法和固相萃取法对血浆内源性多肽的提取效果,并通过Tricine-SDS-PAGE对提取效果进行比较.通过液相色谱串联质谱多反应监测(MRM)分析,建立了多肽标准品ESAT-6定量方法,并将ESAT-6定量建立的液相色谱和质谱条件应用于蛋白质的定量,对多肽和蛋白质MRM定量的标准曲线进行了考察.Tricine-SDS-PAGE结果表明,乙腈沉淀法是最佳的血浆内源性多肽提取方法,低分子量的多肽可以得到很好的富集,且能有效地去除高分子蛋白质的污染.液相色谱串联质谱MRM法检测血浆内提取的多肽,标准曲线的线性较好,相关系数为0.999.另外,采用MRM法对胶内分离的蛋白质进行定量,标准曲线的线性相关系数为0.995.综上所述,本研究构建了一种简单有效的血浆多肽提取方法,通过液质联用MRM法成功地实现了目标多肽和蛋白质定量测定.该定量方法可以推广应用于复杂样品中的多肽和蛋白质的定量分析.

多反应离子的质子转移反应质谱

在无放射性辉光放电离子源内,采用不同试剂气体进行放电,为质子转移反应质谱(PTR-MS)新增了强度在105 cps量级的3种反应离子NH4+,NO+和O2+,纯度大于95%;测试了这3种反应离子的离子-分子反应特征.采用H3O+,NH4+,NO+和O2+等4种反应离子对同分异构体丙醛/丙酮进行检测发现,H3O+和NH 4+均不能区分的丙醛/丙酮可采用NO+或O 2+进行区分.结果表明,增加反应离子不仅使PTR-MS的可检测有机物范围不再局限于质子亲和势(PA)大于H2O的有机物,还提高了PTR-MS区分同分异构体的能力.

离子对-超高效液相色谱串联质谱多反应监测快速测定肉制品中的酸性橙Ⅱ、酸性橙Ⅲ、酸性橙AGT

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定肉制品中酸性橙Ⅱ、酸性橙Ⅲ、酸性橙AGT的快速分析方法。用含5%氨水的乙腈溶液对样品进行提取,采用弱阴离子交换柱富集净化,在ESI负离子源模式下采用多反应监测(MRM)模式进行检测。通过在流动相中加入离子对试剂乙酸二己基铵(DHAA),使目标物在C18色谱柱上实现了分离,并有效改善了目标组分的离子化效率,使监测离子对更加稳定,确保了检测结果的稳定性和灵敏度。该方法分析时间小于6 min,线性范围为5.0～300μg/L,相关系数(r)大于0.999,检出限(LOD,S/N=3)为20.0～50.0μg/kg,定量下限(LOQ,S/N=10)为70.0～170.0μg/kg,方法回收率为83%～89%,精密度RSD≤7.5%。该方法快速、灵敏,适用于肉制品中3种酸性橙污染物的检测与确证。

LC-MS/MS多反应监测筛选分析血液中132种毒药物

目的建立血液中常见毒药物的LC-MS/MS筛选分析方法。方法采用多反应监测(MRM)模式,以目标物的保留时间和母离子／子离子对为指标进行筛选分析。建立LC-MS/MS 库和定性认定准则,并考察了方法的有效性。结果多反应监测筛选体系兼具有选择离子扫描的曼敏度和二级质谱的特征性,血液中132种毒药物筛选分析的最低检出限为0．1- 10ng/mL．其中83％的检出限≤lng/mL。鉴定应用表明方法的检出率和可靠性良好。结论该筛选分析方法能满足法医毒物学和临床毒物学检测中毒或治疗浓度目标物的需要,且能扩展至其它生物检材。

HPLC-MS/MS多反应监测法测定藜蒿中绿原酸的含量

用MS／MS作为HPLC的检测器，采用多反应监测（MRM）扫描方式，建立了HPLC—MS／MS测定藜蒿中绿原酸含量的方法。该方法的线性范围为2．0—250μg／L。检出限为0．5μg/L。通过样品的不同加标试验，回收率为96％～98％，精密度RSD（n=5）为1．3％～2．2％。实际样品分析表明，藜蒿茎中绿原酸的含量为11．8mg／g。本方法选择性高、灵敏、快速，也适用于其它复杂体系中绿原酸含量的快速测定。

基于鸟枪蛋白组学与质谱多反应监测技术的三文鱼物种鉴别研究

目的 对大西洋鲑(Salmo salar)、大马哈鱼(Oncorhynchus keta)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)中的多肽进行分离鉴定,筛选特征肽段,建立不同种类三文鱼的物种鉴别方法。方法 以市场上常见的大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种为研究对象,基于鸟枪蛋白组学分析流程,样品经蛋白质提取、胰蛋白酶消化和超高效液相色谱-串联三重四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTOF-MS)分离鉴定,得到的总离子流图谱(total ion chromatogram,TIC)与Uni Prot蛋白质数据库对比分析,筛选得到3个物种的特征肽段,利用Skyline软件构建特征肽的多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)离子对,然后经三重四极杆质谱仪进行鉴定。结果 最终共筛选出7条特征肽段,包括大西洋鲑中的4条特征肽段,大马哈鱼中的1条特征肽段,虹鳟中的2条特征肽段。结论 基于鸟枪蛋白组学,结合多反应监测技术,筛选得到了大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种中的特征肽段,成功建立了不同种类三文鱼的物种精准定性鉴别方法。

基于多反应通道的高产额激光中子源实验研究

基于超短超强激光的短脉冲中子源是实现超快中子探测的理想中子源。如何提升中子产额是目前短脉冲激光中子源实现应用需求亟需解决的关键问题。提出基于靶背鞘场加速机制和束靶反应方案,采用LiD复合组分靶作为中子转换体,可以有效提升激光中子产额。与常规的LiF转换体相比,除了p-Li和d-Li两个反应道之外,LiD转换体可以多出p-D和d-D两个反应道,因此可充分利用激光加速的质子和氘离子的多反应通道优势来提升中子产生概率。实验结果表明,相比于LiF转换体,LiD转换体可带来中子产额2~3倍的提升,达到5.2×10^(8)n/sr的最高中子产额,并具备更好的前冲性。实验还区分了多反应通道的贡献,证明中子产额提升主要来自于p-D反应。

血清质谱结合多反应监测方法应用于慢性乙肝肝纤维化分期相关小分子蛋白标志物的筛选

目的通过血清蛋白组学方法,筛选慢性乙肝肝纤维化的血清诊断标志物。方法建立126例慢性乙肝患者的前瞻性临床队列,行肝活检确定组织纤维化程度(Scheuer病理学分期S0-S4)并留取血清标本。应用二维凝胶电泳(2-DE)分离20例轻度肝纤维化患者(S0-S1)和20例重度肝纤维化患者(S3-S4)血清蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白;质谱多反应(MRM)定量检测86例不同肝纤维化程度患者(S0-S4)的差异蛋白分子解离产生的肽离子对的峰面积总和比(SPAR)数值。结果 2-DE筛选出7个差异表达蛋白(质谱峰m/z<800),由MRM定量检测它们解离的14个肽离子对。计算肽离子对的SPAR值,行组间统计学分析,仅差异蛋白1、4、8(血清转铁蛋白载脂蛋白,补体C3c和转铁蛋白)产生的离子对在S1-S4组比S0组的差异具有统计学意义(P<0.05)。3个差异蛋白的肽离子对建立的诊断模型在区分显著肝纤维化S2-S4和轻度肝纤维化S0-S1时的受试者工作特征曲线下面积(AUROC)值范围是0.801～0.827。此方法建立的诊断模型在预测显著肝纤维化的诊断效力与APRI、FIB-4和Forn’s指数比较,具有相似的高敏感性和特异性。结论血清蛋白组学的质谱结合多反应监测方法筛选和验证血清小分子蛋白:血清转铁蛋白载脂蛋白、补体C3c和转铁蛋白可以初步诊断慢性乙肝患者的肝纤维化程度。

18O同位素标记定量肽段串联体蛋白质结合同位素稀释-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法

建立了定量肽段串联体蛋白质(concatamers of Q peptides,QconCATs)结合18O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法。首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征结果表明重组蛋白质的纯度在99%以上,相对分子质量约为63.4 kDa。对QconCAT重组蛋白质酶切后的肽段混合物进行质谱分析,并经pFind和pLabel软件处理,验证了目标肽段。还考察了QconCAT重组蛋白质的酶切效率和18O标记效率,并对QconCAT蛋白质结合18O标记-同位素稀释-多反应监测质谱方法进行了评价。实验结果表明,采用该方法对腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE)中选定蛋白质的肽段进行绝对含量测定时,相对标准偏差小于20%,准确度较高,说明该方法可用于复杂生物样本中蛋白质的绝对定量。更重要的是所建方法不仅解决了细胞培养氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术的重标试剂价格昂贵的问题,也为定量蛋白质组学提供了一种新的方法。

肾移植受者多反应性抗体与HLA抗体的相关性研究

目的从单克隆抗体水平研究同种异体肾移植受者多反应性抗体与HLA抗体的相关性,探讨多反应性抗体是否为HLA抗体尤其是非供体特异性抗体产生的原因之一。方法从肾移植患者外周血细胞及手术切除的移植肾组织中分离出B淋巴细胞,并于体外永生化培养获得单克隆B细胞,分别检测B细胞分泌的抗体对HLA抗原及凋亡细胞的反应性。结果共获得107个B细胞克隆,检测发现每个B细胞克隆在体外培养过程中均分泌抗体。其中有4个单克隆B细胞分泌的抗体可以与多种HLA抗原发生反应,而这些HLA抗原之间并非都有共用的抗原决定簇。进一步研究发现,这4种单克隆抗体均可以与凋亡细胞发生反应,从而表现为抗体的多反应性。结论本研究从单克隆细胞、抗体水平揭示了多反应性抗体的存在与HLA抗体的相关性,在交叉反应理论之外,为HLA抗体尤其是非供体特异性抗体的产生原因提供了实验依据。

应用选择性反应/多反应监测技术(SRM/MRM)对驱虫斑鸠菊黄酮成分的分析研究

目的对驱虫斑鸠菊种子类黄酮物质进行定量分析。方法采用选择性反应/多反应监测技术(SRM/MRM),利用超高效液相色谱及MRM质谱分析,对驱虫斑鸠菊种子类黄酮物质进行定量分析,并结合KEGG数据库,对驱虫斑鸠菊种子类黄酮化合物的参与的主要分子生物学过程进行分析。结果测定驱虫斑鸠菊种子总黄酮类物质含量为0.97 g/100g,通过高效液相色谱及MRM质谱分析,共获得36种黄酮类化合物,含量前5位的化合物为:圣草酚(12650.98 ng/100g)、异槲皮苷(7293.86 ng/100 g)、木樨草素(4503.38 ng/100 g)、紫铆素(4320.83 ng/100 g)和柚皮素(3390.59 ng/100 g),而异黄酮化合物芒柄花黄素和异黄酮化合物黄豆素含量最少,仅占1.07 ng/100 g和1.81 ng/100 g。驱虫斑鸠菊种子类黄酮组分涉及的生物合成过程主要包括类黄酮生物合成、黄酮和黄酮醇生物合成、异黄酮生物合成、泛醌和其它萜类生物合成及酪氨酸代谢等。结论本研究应用SRM/MRM技术,该方法特异性强、灵敏度高、准确性高,适用于对特定复合物组分进行有针对性地、特异性地检测与分析,并可获得目标化合物的绝对定量结果,也为驱虫斑鸠菊化学成分进一步研究奠定基础。

人多反应性抗体重链V区基因克隆和序列分析

近年来,对 CD5 B 淋巴细胞的研究引起了人们广泛的兴趣。最早发现小鼠中有两种 B 细胞世系。其中 Ly-1/CD5^+B 细胞(现称 B-la细胞)是自身抗体和天然抗体的产生者,主要分泌 IgM 型多反应性抗体(polyreactive anti-body)。其 V_H 和 V_L 部分一般不发生体细胞突变。人免疫系统中也存在相应的 CD5^+B 细胞。

液质联用多反应监测法定量肝纤维化非实质细胞中的ATPA蛋白质

目的建立液质联用多反应监测方法定量复杂样品中的蛋白质。方法合成标准多肽,建立较通用的蛋白质多肽定量方法;挑选目标蛋白质及其定量离子对。采用SDS-PAGE方法分离复杂样品中的蛋白质,切取目标蛋白质条带进行胶内酶解和液质联用MRM定量,运用定量PCR方法分析目标蛋白在蛋白质和mRNA水平的一致性。结果选择在二维凝胶电泳中具有3倍差异的ATPA蛋白质进行了MRM定量分析,ATPA的4条多肽513.8、586.4、644.5和777.3对应的10个离子对均能特异地被质谱MRM方法检测,与正常对照相比,酒精性肝纤维化样本中ATPA的10个离子的曲线下面积变化基本一致,均表现为上调。MRM定量结果也表明ATPA在酒精性肝纤维化样品中上调了3.19倍,与二维凝胶电泳检测结果一致。进一步的定量PCR分析结果显示,该蛋白质的表达变化同步发生在mRNA和蛋白质水平。结论本研究构建了一种简单有效的液质联用MRM定量SDS-PAGE分离的复杂样品中蛋白质的方法。

非手性-手性色谱-预测多反应监测法分析中药毛前胡的化学成分

中药毛前胡为伞形科植物短片藁本Ligusticum brachylobum Franch.的干燥根,主要用于治疗风热咳嗽痰多、痰热喘满、咯痰黄稠等证,富含香豆素类化学成分,含有多组对映异构体和非对映异构体。为了深入研究毛前胡的化学成分组成,特别是对映异构体的组成,研究建立了非手性-手性色谱-预测多反应监测法(achiral-chiral-LC predictive MRM),同步实现毛前胡化学成分的化学选择性和立体选择性分离,以及高灵敏度定性分析。非手性色谱和手性液相色谱-串联质谱系统结合了RP-C18色谱柱的高效化学选择性分离能力以及手性色谱柱的立体选择性优势,有效避免了中心切割非手性-手性二维液相色谱构造复杂、重现性难以满足定量要求等缺陷。采用小内径核-壳型RP-C18色谱柱作为前端化学分离柱,实现结构类似香豆素的高效化学选择性分离;采用反相大内径AD-RH手性色谱柱,实现对映异构体的手性拆分;采用预测多反应监测模式,实现化学成分的高灵敏度检出;利用增强子离子扫描模式(EPI)采集各色谱峰的二级质谱信息,鉴定化学结构。通过定量离子对、定性离子对及两者的比值,判定是否为对映异构体。利用所构建的非手性-手性色谱耦联系统从毛前胡中共鉴定出60个化学成分,其中8对香豆素对映异构体得到了良好分离。本研究为毛前胡以及含有对映异构体中药的深入定性、定量分析提供可靠的方法。

HPLC-MS/MS多反应监测法测定榆黄蘑中甘露醇的含量

用MS/MS作为HPLC的检测器,采用多反应检测(MRM)扫描方式,建立了HPLC-MS/MS测定榆黄蘑中甘露醇含量的方法。该方法的线性范围为0.208-1.04mg·mL-1。通过样品的加标试验,回收率为97.12%,精密度RSD(n=5)为0.94%。实际样品分析表明,榆黄蘑中甘露醇的含量为38.9mg/g。本方法选择性高、灵敏、快速。也适用于其他复杂体系中甘露醇含量的快速测定。

WSAN多反应节点多传感节点模型的数据传输算法

无线传感反应网络由传感节点和反应节点组成,传感节点将监测到的数据发送到反应节点时,通常采用单反应节点传输模型或多反应节点传输模型。针对最近为提高系统容错能力而提出的一种新的多反应节点多传感节点模型,提出了传感节点发送数据到反应节点的基于组播的新算法。实验证明这种算法可以有效地降低数据传输能耗,从而在提高网络容错能力的同时,改善系统的能量有效性。

基于多反应监测质谱技术的水稻叶片蛋白绝对定量方法

【目的】建立水稻叶片蛋白的多反应监测(MRM)质谱绝对定量方法。【方法】水稻叶片蛋白经含1.0%十二烷基硫酸钠(SDS)的磷酸盐(PBS)缓冲液提取,丙酮沉淀除杂纯化、胰蛋白酶消化,酶解液经液相色谱分离,MRM质谱监测,外标法定量。【结果】向提取缓冲液中加入1.0%SDS可增强水稻叶片中16种靶蛋白和总蛋白质的提取效果;不同有机试剂处理,总蛋白质沉淀量存在显著差异(P<0.05),沉淀能力从强到弱依次为乙腈>丙酮>异丙醇>甲醇>乙醇;对于16种目标蛋白,总体以丙酮沉淀效果最好,其次是异丙醇和乙腈,甲醇和乙醇效果较差。该方法线性范围均达到3个数量级,定量限为0.1~2.5 nmol/L,灌浆期16种水稻叶片蛋白质含量为6.0~2818.1μg/g,相对标准偏差均小于14%。【结论】SDS可显著提高水稻叶片蛋白提取效果,采用丙酮或乙腈可获得较好的蛋白沉淀效果,但不同蛋白质略有差异。结合MRM质谱监测技术可实现水稻叶片蛋白的绝对定量,方法线性范围宽、敏度高、重复性好。

气相色谱-三重四极杆质谱动态多反应监测模式测定枸杞干果中118种农药残留

枸杞中丰富的营养物质深受广大消费者喜爱,但也极易受到病虫侵害,农药残留问题引起了人们的广泛关注。基质干扰是微量分析的一个难点,高灵敏度和高选择性的色谱-串联质谱技术是复杂基质中微量分析强有力的工具,动态扫描监测模式的优越性逐渐取代传统的多反应监测扫描模式,简便、快速、省时的QuEChERS前处理方法已被广泛应用于食品的农药残留检测中。采用改良QuEChERS法结合动态多反应监测模式(dMRM),建立了同时检测枸杞干果中118种农药残留的气相色谱-三重四极杆质谱分析方法。实验比较了不同加水量、提取溶剂、提取过程中温度提取条件,以及无水硫酸镁吸水剂、乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶PSA、十八烷基硅烷键合硅胶C18净化填料添加量时农药的回收率,确定出最优前处理方法。结果表明,5 g样品经10 mL超纯水复水,用10 mL乙腈浸提,于-18℃冷冻10 min后,用缓冲体系盐包提取后,经800 mg无水硫酸镁、150 mg PSA、150 mg C18混合填料净化,基质匹配外标法定量。118种农药在一定范围内线性关系良好,相关系数R2≥0.9923,检出限和定量限分别为0.006~28.344μg/kg和0.021~94.480μg/kg,4个添加水平的回收率为64.97%~126.21%,RSDs均小于19%(n=6)。基质效应考察结果表明,82%的农药呈现为基质增强效应,其他为基质抑制效应;9%的农药表现为强基质效应,其他为中等或弱基质效应;采用基质匹配标准曲线校正,可有效降低基质效应的影响。应用建立的方法测定10批枸杞样品,全部样品有农药检出,共检出农药22种。该方法操作简便快速,准确可靠,适用于枸杞干果中农药多残留的日常检测和快速筛查。