miRNA-21、白细胞介素-17、缺氧诱导因子-1α在多发性骨髓瘤患者中的表达水平及临床意义

目的探讨微小RNA-21(miRNA-21)、白细胞介素-17(IL-17)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义。方法选取78例多发性骨髓瘤患者和64例健康体检者,分别作为研究组和对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测两组受试者miRNA-21水平,酶联免疫吸附试验检测两组受试者血清IL-17、HIF-1α水平。比较两组受试者、不同预后情况多发性骨髓瘤患者miRNA-21、IL-17、HIF-1α水平。采用Pearson相关分析法分析多发性骨髓瘤患者miRNA-21与IL-17、HIF-1α水平的相关性。采用Cox风险比例回归模型分析多发性骨髓瘤患者预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-21、IL-17、HIF-1α单独及联合检测对多发性骨髓瘤的诊断价值及对预后的预测价值。比较不同miRNA-21、IL-17、HIF-1α表达情况多发性骨髓瘤患者的生存情况。结果研究组患者miRNA-21、IL-17、HIF-1α水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。预后不良多发性骨髓瘤患者miRNA-21、IL-17、HIF-1α水平均明显高于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多发性骨髓瘤患者miRNA-21与IL-17、HIF-1α水平均呈正相关(r=0.447、0.462,P﹤0.05)。miRNA-21、IL-17、HIF-1α均是多发性骨髓瘤患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-21、IL-17、HIF-1α联合检测诊断多发性骨髓瘤的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于三者单独检测;miRNA-21、IL-17、HIF-1α联合检测预测多发性骨髓瘤患者预后的AUC、灵敏度、阴性预测值均高于三者单独检测。miRNA-21、IL-17、HIF-1α高表达组多发性骨髓瘤患者的2年累积生存率分别低于miRNA-21、IL-17、HIF-1α低表达组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论多发性骨髓瘤患者中miRNA-21、IL-17、HIF-1α均高表达,且miRNA-21与IL-17、HIF-1α水平均呈正相关,三者联合检测可较好地诊断多发性骨髓瘤及预测预后,有助于临床及早采取有效的防治措施,改善多发性骨髓瘤患者的预后情况。

Cys C、C1q、β_(2)-MG、Urea、UA检测对初诊多发性骨髓瘤患者合并肾损伤的诊断价值

目的探讨肾功能指标胱抑素C(cystatin C,Cys C)、补体C1q(complement C1q)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-microglobulin,β_(2)-MG)、尿素(Urea)、尿酸(uric acid,UA)对初诊多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者合并肾损伤(renal impairment,RI)的诊断价值。方法回顾性分析2021年8月~2022年12月首都医科大学附属北京积水潭医院血液科收治的93例初诊MM患者的病例资料,按照血肌酐水平将MM患者分为RI组[血肌酐>176.80mmol/L(2mg/dl),n=19]及非RI组[血肌酐≤176.80mmol/L(2mg/dl),n=74],对RI组和非RI组的临床资料及实验室指标进行分析。采用单因素和多因素Logistic回归分析评价MM患者发生RI的危险因素,应用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估危险因素对MM患者发生RI的预测价值。结果93例初诊MM患者发生RI者占25.68%,RI组轻链型占比最高(36.84%,7/19),IgG-λ型和IgA-κ型比例最低(10.53%,2/19);非RI组IgA-κ型比例最高(29.73%,22/74),IgG-λ型比例最低(12.16%,9/74)。DS分期中,RI组19例全部为Ⅲ期,非RI组72例全部为Ⅲ期。ISS分期中,RI组Ⅲ期最多(68.42%,13/19),非RI组中Ⅰ期最多(41.89%,31/74)。RISS分期中,RI组Ⅱ期和Ⅲ期最多(36.84%,7/19),非RI组Ⅱ期最多(58.11%,43/74)。DS分期和ISS分期组间差异有统计学意义(P<0.05)。RI组中Cys C、β_(2)-MG、Urea、UA水平均高于非RI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,Cys C、Urea、β_(2)-MG水平异常升高是MM患者发生RI的危险因素(P<0.05),C1q对MM患者发生RI没有影响(P>0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,Cys C、Urea、β_(2)-MG水平异常升高均是MM患者发生RI的独立影响因素(P<0.05)。Cys C、Urea、β_(2)-MG预测MM患者发生RI的敏感度分别为88.9%、50.0%、94.4%,特异性分别为90.4%、100.0%、84.9%;Cys C、Urea、β_(2)-MG联合检测预测MM患者发生RI的敏感度为100.0%,特异性为87.7%。结论Cys C、Urea、β_(2)-MG均能较好地预测初诊MM患者发生RI的可能性,3项指标联合检测对MM患者发生RI具有更高的预测价值。

CircRERE调节miR-128-3p/WEE1轴促进人多发性骨髓瘤细胞系增殖、迁移和侵袭

目的 探究环状RNA RERE(circRERE)调节微小RNA(miR)-128-3p/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(WEE1)轴对人多发性骨髓瘤(MM)细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。方法 体外培养从健康受试者外周血中分离的正常浆细胞(nPCs)和人MM细胞系(U266、RPMI-8226、NCI-H929、LP-1)。RT-qPCR检测circRERE、miR-128-3p表达;Western blot检测WEE1表达。转染RPMI-8226细胞后,将其分为对照组(control)(未进行转染)、sh-circRERE组、sh-NC组、miR-128-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、sh-circRERE+inhibitor-NC组、sh-circRERE+miR-128-3p inhibitor组,噻唑蓝(MTT)实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)免疫荧光染色检测细胞增殖;划痕愈合实验、Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因实验证实miR-128-3p与circRERE或WEE1的靶向作用关系。结果 与nPCs比较,MM细胞(RPMI-8226、U266、NCI-H929、LP-1)中circRERE、WEE1表达增加,miR-128-3p表达减少(P<0.05);与对照组比较,sh-circRERE组RPMI-8226细胞增殖率、EdU阳性细胞比例、划痕面积愈合率、侵袭数均减少(P<0.05),miR-128-3p inhibitor组则相反(P<0.05);miR-128-3p inhibitor降低了sh-circRERE对RPMI-8226细胞增殖、迁移、侵袭的影响(P<0.05)。双荧光素酶实验显示circRERE/miR-128-3p、miR-128-3p/WEE1存在靶向作用关系。结论 CircRERE能够促进RPMI-8226细胞增殖、迁移和侵袭,可能通过对miR-128-3p发挥海绵效应以增加WEE1表达而实现。

血清β2-MG、Cys-C、DKK1联合检测对多发性骨髓瘤患者预后的预测价值

目的:分析多发性骨髓瘤患者血清β2-微球蛋白(β2-MG)、膀抑素C(Cys-C)、Dickkopf-1(DKK1)表达水平及对其预后的预测价值。方法:选取郑州市金水区总医院2019年6月—2023年6月收治的多发性骨髓瘤患者101例为研究组,另选取同期健康体检者76例为对照组。比较2组入院时血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平;分析血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平与多发性骨髓瘤患者Durie Salmon(D-S)分期、ISS分期的相关性;分析血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平联合检测对多发性骨髓瘤患者预后的预测价值。结果:入院时,研究组血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平分别为(8.31±0.81)mg/L、(1.71±0.31)mg/L、(8.61±1.86)ng/L,高于对照组的(1.53±0.57)mg/L、(0.72±0.17)mg/L、(2.76±1.41)ng/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。D-S分期Ⅲ期多发性骨髓瘤患者血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平分别为(8.78±1.88)mg/L、(1.92±0.57)mg/L、(9.13±1.77)ng/L,高于D-S分期Ⅰ~Ⅱ期患者的(7.56±1.57)mg/L、(1.37±0.36)mg/L、(7.78±1.59)ng/L,差异均有统计学意义(P<0.05);ISS分期Ⅲ期多发性骨髓瘤患者血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平分别为(9.32±1.67)mg/L、(2.56±0.73)mg/L、(9.33±1.11)ng/L,高于ISS分期Ⅰ~Ⅱ期患者的(7.62±1.54)mg/L、(1.20±0.43)mg/L、(8.12±1.71)ng/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平与D-S分期、ISS分期均呈正相关(P<0.001)。治疗3个月后,治疗无效组血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平高于治疗有效组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清β2-MG、Cys-C、DKK1水平联合检测预测多发性骨髓瘤患者预后的AUC、敏感度、特异度分别为0.822、83.91%、92.86%。结论:多发性骨髓瘤患者血清β2-MG、Cys-C、DKK1处于较高水平,三者联合检测对多发性骨髓瘤患者的预后具有较好的预测价值,可作为判断疗效和预后的血清学指标。

小檗碱联合硼替佐米对多发性骨髓瘤患者血清肿瘤坏死因子-α、白介素-1β和白介素-6水平的影响

目的探讨小檗碱联合硼替佐米对多发性骨髓瘤患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平的影响。方法选取2021年6月至2023年5月杭州市临安区第一人民医院和亳州市人民医院收治的多发性骨髓瘤患者40例,随机均分为观察组(20例)和对照组(20例),观察组患者应用硼替佐米联合地塞米松化疗,同时连续口服小檗碱0.6 g/d,对照组患者仅应用硼替佐米联合地塞米松化疗,多重微球流式免疫荧光发光法检测2组患者治疗前后血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果观察组和对照组多发性骨髓瘤患者治疗后TNF-α、IL-1β和IL-6水平均低于同组治疗前(观察组:t=7.595,P<0.001;t=7.739,P<0.001;t=6.304,P<0.001;对照组:t=7.752,P<0.001;t=8.687,P<0.001;t=4.921,P<0.001;);治疗后,观察组多发性骨髓瘤患者TNF-α、IL-1β和IL-6水平均低于对照组(t=2.313,P=0.026;t=2.145,P=0.038;t=2.706,P=0.011;)。观察组总有效率高于对照组,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.278,P=0.598)。观察组无化疗相关腹泻发生,而对照组出现化疗后腹泻6例(χ^(2)=4.902,P=0.027)。结论小檗碱联合硼替佐米能降低多发性骨髓瘤患者炎症反应,改善患者免疫能力,提示硼替佐米治疗多发性骨髓瘤中小檗碱有协同作用。

CircBACH1调节miR-140-5p/MDM2轴对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

目的探讨CircBACH1对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响以及在此过程中对miR-140-5p/MDM2轴的调节机制。方法收集MM组和正常对照组骨髓浆细胞,将人MM细胞系U266细胞分为未转染(Control)组、si-NC组、si1-CircBACH1组、si2-CircBACH1组、si-CircBACH1+anti-miR-NC组、si-CircBACH1+anti-miR-140-5p组。实时荧光定量PCR检测细胞中CircBACH1、miR-140-5p、鼠双微体2(MDM2)mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡及对硼替佐米的敏感性;Western blot检测细胞中B细胞淋巴因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3蛋白的表达;双萤光素酶报告基因实验验证CircBACH1、miR-140-5p、MDM2三者的靶向关系。结果与正常对照组相比,MM组的骨髓浆细胞及U266细胞中CircBACH1、MDM2 m RNA表达升高,miR-140-5p表达降低(P<0.05);与Control组和si-NC组相比,siCircBACH1组细胞中CircBACH1、MDM2的mRNA表达、细胞增殖活性、Bcl-2蛋白表达均降低,miR-140-5p的表达、细胞凋亡率、化疗敏感性及cleaved caspase-3、Bax表达均升高(P<0.05);而回补实验中,si-CircBACH1对MM细胞的影响被anti-miR-140-5p逆转,且MDM2的表达也升高(P<0.05)。双萤光素酶基因报告实验验证了CircBACH1、MDM2均与miR-140-5p存在靶向关系。结论敲低CircBACH1能够上调miR-140-5p表达,下调MDM2的表达,抑制MM细胞的增殖,促进MM细胞凋亡,提高化疗敏感性。

血清miR-28-5p、HMGB1表达与多发性骨髓瘤患者病理特征及预后的关系

目的探讨血清miR-28-5p、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达与多发性骨髓瘤(MM)患者病理特征及预后的关系。方法选取2018年1月至2019年6月于河南省南阳市中心医院就诊的MM患者124例为病例组,选取同期健康志愿者50名为对照组,分析两组血清miR-28-5p、HMGB1表达水平与患者病理特征及其预后的关系。结果与对照组比较,病例组血清miR-28-5p表达水平降低、血清HMGB1水平升高,差异有统计学意义(t=30.327、16.269,P均<0.05);不同D-S分期、ISS分期患者随着分期越晚血清miR-28-5p表达水平降低,差异有统计学意义(F=19.541、22.173,P均<0.05);不同ISS分期患者随着分期越晚血清HMGB1水平越高,差异有统计学意义(F=6.891,P<0.05);存活患者miR-28-5p水平高于死亡患者、HMGB1水平低于死亡患者,差异有统计学意义(t=4.416、2.546,P<0.05)。高表达水平miR-28-5p、低水平HMGB1的累计生存率更高,差异有统计学意义(χ^(2)=16.930、12.417,P均<0.05)。结论MM患者血清miR-28-5p表达水平降低、HMGB1表达水平升高,两项指标均与患者预后有关,或可作为MM患者预后评价的血清生物学指标。

血清高迁移率族蛋白B1、β_(2)-微球蛋白、乳酸脱氢酶及白细胞介素-6在多发性骨髓瘤中的表达及相关性

目的 探讨血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)、乳酸脱氢酶(LDH)及白细胞介素-6(IL-6)在多发性骨髓瘤中的表达及相关性。方法 选取60例健康体检者和86例多发性骨髓瘤患者,其中31例初诊未治,55例接受硼替佐米+地塞米松+沙利度胺(BDT)方案化疗。比较多发性骨髓瘤患者与体检者、初诊未治与BDT方案治疗不同临床疗效患者、不同临床分期初诊未治多发性骨髓瘤患者血清HMGB1、β_(2)-MG、LDH、IL-6水平。血清HMGB1水平与β_(2)-MG、LDH、IL-6水平的相关性采用Pearson相关分析。结果 多发性骨髓瘤患者血清HMGB1、β_(2)-MG、LDH及IL-6水平均明显高于体检者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。初诊未治及无效患者血清HMGB1、β_(2)-MG、LDH、IL-6水平均明显高于有效患者,无效患者血清HMGB1、β_(2)-MG、LDH、IL-6水平均明显高于初诊未治患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。临床分期为Ⅱ、Ⅲ期的初诊未治多发性骨髓瘤患者血清HMGB1、β_(2)-MG、LDH、IL-6水平均明显高于Ⅰ期患者,Ⅲ期患者的血清HMGB1、β_(2)-MG、LDH、IL-6水平均明显高于Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Pearson相关分析显示,血清HMGB1水平与β_(2)-MG、LDH、IL-6水平均呈正相关(r=0.902、0.867、0.882,P﹤0.05)。结论 多发性骨髓瘤患者血清HMGB1水平较高,BDT方案治疗后可使其显著降低,且与β_(2)-MG、LDH、IL-6水平均呈正相关,临床可联合HMGB1、β_(2)-MG、LDH、IL-6共同作为评估多发性骨髓瘤疾病严重程度和治疗效果的分子靶点。

肝癌缺失基因1(DLC-1)甲基化在多发性骨髓瘤患者中的临床意义

目的探讨肝癌缺失基因1(DLC-1)启动子区CpG岛甲基化在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及相关临床意义。方法采用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)法定量检测自2016年10月—2017年12月在新疆医科大学附属肿瘤医院初诊的30例MM患者DLC-1基因的甲基化状态,分别进行MM患者的临床资料分析、MM患者及健康对照组关于DLC-1基因甲基化情况的比较,以及MM患者DLC-1基因甲基化情况与相关临床指标的比较。结果(1)临床资料有关M蛋白的免疫分型提示:30例MM患者中IgG型21例(21/30),IgA型6例(6/30),轻链型3例(3/30);骨髓细胞学检查提示:MM患者中骨髓瘤细胞比例<30%的有6例(21/30),30%~50%之间的有19例(19/30),≥50%的有5例(5/30)。(2)MM组与对照组比较提示:MM组DLC-1启动子区甲基化率显著高于正常组(P=0.009),其中CpG岛4、6、7、13、21位点的甲基化率显著高于正常对照组(P值分别为0.017、0.030、0.023、0.017、0.044)。(3)进一步对MM患者深入比较发现,DLC-1基因的甲基化比例分别在Ⅱa+Ⅲa期与Ⅲb期组间、血清肌酐正常与升高患者组间、骨髓异常浆细胞/骨髓瘤细胞比例50%≥与<50%组间均存在统计学差异(P均<0.05)。结论DLC-1异常甲基化可能与肿瘤负荷及肾功能损害相关,深入研究有关DLC-1基因甲基化在MM患者中的表达情况,可为今后MM的去甲基化治疗提供新的研究思路。

“双打击”多发性骨髓瘤的研究进展

“双打击”多发性骨髓瘤(MM)是一种近年来提出的基于细胞遗传学异常的特殊类型,旨在发现高危、极高危患者,目前尚无统一的界定标准,且缺乏标准的治疗方案。以往的回顾性分析显示,“双打击”MM的预后极差,复发及死亡风险很高。2019年,WALKER等针对“双打击”MM提出了明确的定义:TP53双等位基因失活或在ISSⅢ期的前提下CKS1B(1q21)扩增拷贝数≥4的患者。本文针对WALKER等提出的“双打击”MM定义,对其诊断、临床特征、预后及治疗等方面的最新研究进展作一综述。

血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平在多发性骨髓瘤病情和预后中的临床价值

目的探讨血清巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)和骨硬化蛋白水平在多发性骨髓瘤病情和预后中的临床价值。方法选取2019年1月至2020年12月在该院就诊的125例多发性骨髓瘤患者作为观察组;另选取同期在该院体检的75例健康体检者作为对照组。比较观察组患者治疗前后血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平,以及观察组和对照组血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平;比较不同肿瘤分期、不同骨质破坏程度分级多发性骨髓瘤患者血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平,分析多发性骨髓瘤患者1年内发生死亡的单因素和多因素;比较血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白单项及3项指标联合检测对多发性骨髓瘤患者1年内发生死亡的预测效能。结果观察组治疗前后血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平较治疗前均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。多发性骨髓瘤患者血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平随着多发性骨髓瘤肿瘤分期和骨质破坏程度分级升高而升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组患者肿瘤分期、骨质破坏程度分级、MIP-1α水平、TRACP-5b水平和骨硬化蛋白水平与存活组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,肿瘤分期、骨质破坏程度分级、MIP-1α水平、TRACP-5b水平和骨硬化蛋白水平是多发性骨髓瘤患者1年内发生死亡的影响因素(P<0.05)。血清MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白水平对多发性骨髓瘤患者1年内发生死亡具有较高的预测效能,3项指标联合检测的灵敏度为90.0%,特异度为87.1%,受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.934,明显高于MIP-1α(Z=3.068,P=0.002)、TRACP-5b(Z=3.622,P<0.001)和骨硬化蛋白(Z=2.576,P=0.010)单独检测,而3项指标之间的AUC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MIP-1α、TRACP-5b和骨硬化蛋白参与了多发性骨髓瘤疾病的发生和发展,对预测其1年内发生死亡具有较高的价值。

内皮素-1在多发性骨髓瘤硼替佐米化疗中的意义及其与化疗敏感性和不良反应及免疫功能的相关性

目的探究内皮素-1(ET-1)在多发性骨髓瘤(MM)硼替佐米化疗中的意义及其与化疗敏感性和不良反应及免疫功能的相关性。方法选取2018年5月至2020年5月聊城市人民医院收治的110例复发难治MM患者作为研究对象,根据实体肿瘤疗效评价标准分为化疗应答组与化疗无应答组,每组55例。两组均接受硼替佐米化疗治疗,化疗前后均采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清ET-1水平。比较两组化疗前后血清ET-1水平、免疫功能指标及不良反应发生情况,分析血清ET-1水平与化疗敏感性、不良反应发生情况、免疫功能的相关性。结果化疗后,两组血清ET-1水平均明显低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05);化疗应答组化疗前后血清ET-1水平均明显低于化疗无应答组,差异有统计学意义(P<0.05);化疗应答组胃肠道反应、周围神经病变及血液学不良反应发生率均明显低于化疗无应答组,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后,两组CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)值及CD56^(+)自然杀伤细胞(NK)水平均明显高于化疗前,CD8^(+)水平均明显低于化疗前,且化疗应答组CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)值及CD56^(+)NK水平均明显高于化疗无应答组,CD8^(+)水平明显低于化疗无应答组,差异有统计学意义(P<0.05);化疗前后血清ET-1水平与硼替佐米化疗敏感性及免疫功能均呈负相关(r<0,P<0.05),与化疗不良反应发生率均呈正相关(r>0,P<0.05)。结论血清ET-1水平可作为评价复发难治MM患者硼替佐米化疗敏感性及化疗药物不良反应的特异性指标,对评估患者临床疗效及免疫功能具有积极意义。

多发性骨髓瘤患者T淋巴细胞特征及HIF-1α相关性分析

目的检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者骨髓中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)表达、T淋巴细胞分化、T淋巴细胞中耗竭相关基因表达,并探究HIF-1α与T淋巴细胞分化的相关性。方法收集2021年1月~2022年2月华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院收治的9例MM患者(MM组)和3例缺铁性贫血(iron deficiency anemia,IDA)患者(IDA组)的病例资料,采用免疫组化方法检测两组患者骨髓中HIF-1α的表达阳性率,采用流式细胞学分析两组患者辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)、调节性T淋巴细胞(regulatory T cell,Treg)、Th22占CD4^(+)T淋巴细胞中的百分比,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测两组患者T淋巴细胞中耗竭相关基因的表达。采用Pearson相关性评价HIF-1α与T淋巴细胞分化指标的相关性。结果MM组患者骨髓标本中HIF-1α表达阳性率,外周血中Th17/Treg和Th22占CD4^(+)T淋巴细胞中的百分比,T淋巴细胞耗竭相关基因NFATc1表达水平均高于IDA组。HIF-1α表达水平与Th22呈正相关,Th17/Treg与溶骨性病变程度呈正相关。结论MM患者中,Th17/Treg、Th22水平和T淋巴细胞耗竭相关基因上调,存在T淋巴细胞分化和功能异常,且骨髓中高表达的HIF-1α与Th17/Treg和Th22水平呈正相关。

Zo-1与id4基因异常甲基化在多发性骨髓瘤中的临床意义

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。

GSTT1和GSTM1基因多态性和PAH-DNA加合物与多发性骨髓瘤发病的关系研究

目的:分析代谢酶基因谷胱甘肽硫转移酶(GST)T1和M1基因多态性及多环芳烃(PAH)-DNA加合物与多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发病的关系。方法:收集37例初诊MM患者及52例对照人群的骨髓液样本,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定骨髓液中GSTT1和GSTM1基因多态性,并进一步分析其与MM临床指标相关关系;采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)检测PAH-DNA加合物浓度。结果:GSTT1缺失型基因型个体患MM的风险是非缺失型者的2.57倍(P=0.035),GSTM1缺失型个体患MM风险是非缺失型者的1.37倍,但差异无统计学意义(P>0.05);在MM患者中,Ⅲ期GSTT1缺失型基因型明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P=0.038),而GSTT1基因多态性在不同年龄、类型、血红蛋白、β2-MG、白蛋白中的分布无显著性差异(P>0.05)。初诊Hb<85 g/L与Hb≥85 g/L的M M患者相比,其GSTM1缺失型基因型明显增加(P=0.017);MM患者的PAH-DNA加合物浓度明显高于对照人群(2 358±1 182 pg/ml vs 1 853±996 pg/m L)(P=0.032);GSTT1缺失型个体DNA加合物水平高于(或等于)2 100 pg/ml时,患MM的风险升高(OR=4.500,P=0.01)。结论:G STT1缺失型基因型有可能增加M M的危险性,并且GSTT1基因多态性与MM分期相关,G STM1基因多态性与M M血红蛋白水平相关,PAH-DNA加合物可能参与M M的发病,并且GSTT1缺失型个体DNA加合物水平高,更容易增加MM危险性。

sBCMA、MCL-1与初治多发性骨髓瘤患者以硼替佐米为基础的化疗方案疗效的关系

目的探讨初治多发性骨髓瘤(MM)患者血清B细胞成熟抗原(sBCMA)、髓样细胞白血病蛋白-1(MCL-1)与以硼替佐米为基础化疗方案疗效的关系。方法选取该院2019年1月至2022年1月收治的83例初治MM患者作为研究对象。所有患者给予以硼替佐米为基础的化疗方案,按照疗效将其分为有效组及无效组。对比两组sBCMA及MCL-1水平及各项临床资料。采用多因素Logistic回归分析初治MM患者以硼替佐米为基础的化疗方案无效的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析sBCMA及MCL-1预测初治MM患者以硼替佐米为基础的化疗方案治疗无效的效能。结果有效60例,无效组23例。有效组sBCMA及MCL-1水平低于无效组,差异均有统计学意义(P<0.05);有效组国际分期系统(ISS)分期Ⅲ期比例[33.33%(20/60)]低于无效组[78.26%(18/23)],差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现,sBCMA及MCL-1水平升高、ISS分期Ⅲ期均是初治MM患者以硼替佐米为基础的化疗方案治疗无效的危险因素(P<0.05)。sBCMA及MCL-1单独预测初治MM患者以硼替佐米为基础的化疗方案治疗无效的曲线下面积(AUC)分别为0.751(95%CI:0.711~0.820)、0.766(95%CI:0.709~0.835),2项指标联合检测的AUC为0.895(95%CI:0.811~0.978)。结论初治MM患者sBCMA、MCL-1水平及ISS分期与以硼替佐米为基础的化疗方案疗效有关,可能成为预测初治MM患者对以硼替佐米为基础化疗方案疗效的辅助指标,且2项指标联合预测效能更高。

Xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通过慢病毒载体PLL3.7介导的xbp-1 shRNA表达,能有效抑制H929细胞XBP-1蛋白表达,xbp-1 shRNA表达细胞的凋亡率显著高于对照组[(10.13±0.61)%vs(2.5±0.2)%,p<0.05];经硼替佐米处理后,xbp-1基因功能缺陷的H929细胞的凋亡率显著高于空载体组[(45.07±1)%vs(2.73±0.25)%,p<0.05]。结论:xbp-1基因沉默能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中PGC-1α mRNA表达水平

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)mRNA表达水平及临床意义。方法:收集2018年2月-2021年12月上饶市人民医院收治的初治65例MM患者(MM组)和30例营养性贫血患者(对照组)的骨髓标本,提取单个核细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组研究对象骨髓单个核细胞中PGC-1αmRNA表达情况,并分析其与临床相关指标之间的相关性。结果:MM组患者骨髓单个核细胞PGC-1αmRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05);MM组β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)、乳酸脱氢酶(LDH)、C反应蛋白(CRP)及血钙等临床相关指标水平均显著高于对照组(P<0.05),MM组血红蛋白(Hb)水平显著低于对照组(P<0.05);经Pearson相关性分析,发现PGC-1αmRNA相对表达量与β_(2)-MG、LDH、血钙和CRP水平呈正相关(P<0.05),与Hb呈负相关(P<0.05)。结论:PGC-1αmRNA在临床上的表达与β_(2)-MG、LDH、血钙和CRP呈正相关,与Hb呈负相关,并且在MM骨髓单个核细胞中高表达,因此,认为可将其作为临床监测MM病情的一项重要指标。

Wilms瘤基因1、B7家族成员H3及自然杀伤细胞表面受体在多发性骨髓瘤和淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探讨Wilms瘤基因1(WT1)、B7家族成员H3(B7H3)及自然杀伤(NK)细胞表面受体在多发性骨髓瘤和淋巴瘤中的表达及临床意义。方法选取56例多发性骨髓瘤患者和50例淋巴瘤患者,分别作为骨髓瘤组和淋巴瘤组,采用流式细胞仪检测两组患者NK细胞占有核细胞比例,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组患者WT1、B7H3 mRNA相对表达量以及NK细胞表面受体NKG2D、CD69、程序性死亡受体1(PD-1)mRNA的相对表达量。随访1年,比较不同预后情况多发性骨髓瘤和淋巴瘤患者WT1、B7H3 mRNA相对表达量及NK细胞占有核细胞比例。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估各指标对多发性骨髓瘤患者和淋巴瘤患者预后的预测价值。结果骨髓瘤组患者B7H3 mRNA相对表达量低于淋巴瘤组,PD-1、NKG2D mRNA相对表达量及NK细胞占有核细胞比例均高于淋巴瘤组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。随访结束,56例多发性骨髓瘤患者中,预后不良15例,预后良好41例,预后良好的多发性骨髓瘤患者B7H3 mRNA相对表达量明显低于预后不良患者,差异有统计学意义(P﹤0.01)。B7H3预测多发性骨髓瘤患者预后的AUC为0.748(95%CI:0.605~0.891),cut-off值为3.29,此时的灵敏度为0.867,特异度为0.659。随访结束,淋巴瘤组患者中,预后不良19例,预后良好31例,预后良好淋巴瘤患者B7H3 mRNA相对表达量低于预后不良患者,NK细胞占有核细胞比例高于预后不良患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。B7H3、NK细胞占有核细胞比例联合检测预测淋巴瘤患者预后的AUC为0.852(95%CI:0.731~0.973),灵敏度为0.871,特异度为0.737。结论B7H3及NK细胞受体在多发性骨髓瘤和淋巴瘤患者中的表达水平存在差异,但WT1水平的差异不明显,B7H3及NK细胞占有核细胞比例对多发性骨髓瘤及淋巴瘤患者的预后有一定的预测意义。

髓样细胞白血病-1基因在多发性骨髓瘤发病中的分子机制

目的通过检测骨髓瘤细胞中依赖IL-6与否的髓样细胞白血病-1(mcl-1)基因的表达,阐明mcl-1基因在多发性骨髓瘤发病中的信号转导通路。方法应用JAK特异性抑制剂AG490、蛋白激酶抑制剂LY294002、ERK1/2信号通路的特异性阻断剂PD98059,分别研究了JAK/STAT通路、ras/MAPK通路及PI3K/Akt三大信号途径与mcl-1基因在多发性骨髓瘤中的关系。结果在骨髓瘤细胞8226和U266中,抑制ERK1/2活性不能改变mcl-1的表达;高浓度的AG490不能抑制STAT3的酪氨酸磷酸化;LY294002可抑制8226细胞和ANBL-6细胞的增殖,但不抑制mcl-1的表达。结论 Ras/MAPK通路以及PI3K通路在mcl-1基因的调节中无作用,但STAT的作用仍然需要进一步探讨。