基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨LINC00173对多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的影响

目的探讨长链非编码RNA 00173(LINC00173)对多囊卵巢综合征(PCOS)颗粒细胞(GCs)自噬的影响及其机制。方法选取行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的PCOS患者(PCOS组)和因输卵管因素行助孕治疗的非PCOS患者(对照组)各40例,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测LINC00173在PCOS GCs中的表达。另择人卵巢颗粒细胞KGN为实验对象,根据是否过表达LINC00173或敲低LINC00173将KGN细胞分为Vector组和pcLINC00173组,siNC组和siLINC00173组。单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测过表达LINC00173对KGN细胞自噬的影响,Western blot法检测KGN细胞微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p62及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、PI3K、Akt及mTOR表达的影响。另设siNC组、siLINC00173组、siLINC00173+DMSO组和siLINC00173+LY294002组,检测LY294002对LC3B和p62蛋白表达的影响。结果PCOS组LINC00173表达水平高于对照组(P<0.05)。LINC00173过表达后KGN细胞自噬体含量增加。与Vector组比较,pcLINC00173组自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达上调,p62表达下调,PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR表达下调。与siNC组比较,siLINC00173组上述蛋白表达变化相反。siLINC00173+LY294002组LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平高于siLINC00173组和siLINC00173+DMSO组,p62蛋白表达水平低于siLINC00173组和siLINC00173+DMSO组(P<0.05)。结论LINC00173可诱导PCOS GCs自噬,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

多囊卵巢综合征颗粒细胞增殖凋亡相关信号通路的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女常见的内分泌代谢疾病,是导致育龄期妇女发生排卵障碍,甚至不孕的主要原因,严重影响女性的身心健康。PCOS因其临床表现具有异质性,发病机制目前尚无定论。PCOS患者卵泡发育过程中常表现为颗粒细胞的异常增殖或凋亡,但其机制尚不明确,可能与丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶、核转录因子κB、转化生长因子β/Smads、磷脂酰肌醇⁃3⁃激酶/蛋白激酶B、Wnt/β⁃连环蛋白等多种信号通路的相互作用有关。本文结合既往研究结果,对上述5条信号通路导致PCOS颗粒细胞异常增殖或凋亡的研究进展进行综述,以期为今后PCOS的治疗提供新的思路。

抑制NLRP3炎症小体激活可调节自噬改善多囊卵巢综合征颗粒细胞凋亡

目的:在多囊卵巢综合征(PCOS)患者中探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达及其与颗粒细胞凋亡的关系。方法:收集17例PCOS患者(PCOS组)和20例非PCOS患者(对照组)的卵泡液与卵巢颗粒细胞,ELISA检测卵泡液中促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-18等表达水平,RT-PCR和Western blot检测颗粒细胞中NLRP3 mRNA和NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及裂解型天冬氨酸蛋白水解酶1(cleaved caspase-1)和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与p62的表达水平;TUNEL法检测两组受试者颗粒细胞的凋亡水平;体外培养人卵巢癌颗粒细胞系KGN细胞,siRNA干扰技术将沉默NLRP3的siRNA(si-NLRP3)和阴性对照序列(si-NC)转染入细胞中,并采用TNF-α进行刺激以模拟PCOS相关的细胞损伤;将KGN细胞按处理方式的不同分为4组:Ctrl组、TNF-α组、TNF-α+si-NLRP3组和TNF-α+si-NC组;ELISA检测各组细胞上清液中脱氢表雄酮(DHEA)、睾酮和IL-1β与IL-18水平;TUNEL法检测各组KGN细胞的凋亡水平;Western blot检测各组KGN细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62、NLRP3、ASC与cleaved caspase-1蛋白表达水平和NF-κB信号通路中NF-κB p-p65的水平(NF-κB p-p65/NF-κB p65)。结果:与对照组相比,PCOS患者卵泡液中TNF-α、IL-1β和IL-18的表达和颗粒细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、NLRP3的mRNA与NLRP3、ASC和cleaved caspase-1的蛋白表达和细胞的凋亡水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),而p62的蛋白表达显著降低(P<0.01);与Ctrl组相比,TNF-α组、TNF-α+si-NC组和TNF-α+si-NLRP3组细胞上清液中DHEA、睾酮和IL-1β与IL-18水平和细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、ASC与cleaved caspase-1蛋白表达及NF-κB p-p65的水平和细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01),而p62蛋白却显著降低(P<0.01),NLRP3除在TNF-α+si-NLRP3组明显降低外(P<0.01),在TNF-α组、TNF-α+si-NC组中的表达均明显升高(P<0.01);但与TNF-α组相比,TNF-α+si-NLRP3组的上述检测指标变化趋势均明显降低(P<0.05),TNF-α+si-NC组无显著变化(P>0.05)。结论:颗粒细胞中过度激活的NLRP3炎症小体可能通过NF-κB途径参与促进PCOS患者的细胞炎症损伤与自噬性凋亡。

miR-381在多囊卵巢综合征颗粒细胞中的表达及其对高迁移率蛋白1的影响

目的探讨miR-381在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)颗粒细胞中的表达及其对高迁移率蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)的影响。方法纳入35例健康女性(正常对照组)和64例PCOS患者。按照体重指数(BMI)将PCOS患者分为高BMI-PCOS组(30例)和正常BMI-PCOS组(34例)2种亚型。RT-qPCR验证PCOS亚型组和正常对照组血清中HMGB1 mRNA的表达,取miRNA芯片筛选正常对照组与高BMI-PCOS组患者之间血清中差异表达的miRNA。RT-qPCR验证PCOS亚型组和正常对照组血清中miR-381 mRNA的表达并分析其相关性。人正常卵巢上皮细胞IOSE80和人卵巢颗粒细胞KGN中检测miR-381、HMGB1 mRNA和蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-381和HMGB1的靶向关系。人卵巢颗粒细胞KGN中转染miR-381 mimic和inhibitor,检测RIP3的表达以及克隆增殖情况。结果与对照组相比,正常BMI-PCOS组血清中HMGB1的mRNA表达无差异,高BMI-PCOS组血清中HMGB1 mRNA表达较对照组显著上升(P<0.01)。miRNA结果分析显示高BMI-PCOS组血清中miR-381、miR-141、miR-15b等miRNA表达与对照组相比显著下调,其中miR-381的下调程度最高(P<0.01)。与对照组相比,正常BMI-PCOS组血清中miR-381的mRNA表达无差异,高BMI-PCOS组血清中miR-381的mRNA表达差异较对照组显著降低,并且两者呈负相关(P<0.05)。人卵巢颗粒细胞KGN miR-381 mRNA表达水平低于人正常卵巢上皮细胞IOSE80,HMGB1mRNA和蛋白表达趋势相反(P<0.01)。过表达miR-381增加细胞凋亡水平,抑制细胞克隆和增殖能力(P<0.05),抑制miR-381,结果相反。结论miR-381在高BMI-PCOS组血清中表达下降,抑制miR-381的表达能够促进HMGB1表达升高,降低卵巢颗粒细胞凋亡,提高克隆和增殖能力。

白藜芦醇调节Akt/mTOR通路对大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的影响机制研究

目的:探讨白藜芦醇对多囊卵巢综合征大鼠模型颗粒细胞自噬的影响,并探讨其机制。方法:40只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,即多囊卵巢综合征模型组(n=30)和模型对照组(n=10)。将经免疫细胞化学法鉴定证实的多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)颗粒细胞进行体外培养。用不同浓度的白藜芦醇处理,CCK-8观察细胞的增殖率变化情况;电镜观察颗粒细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内自噬相关蛋白轻链3Ⅰ(light chain 3Ⅰ,LC3Ⅰ)、自噬相关蛋白轻链3Ⅱ(light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)、Beclin1的表达,以及总(磷酸化)蛋白激酶B[total(phosphorated)protein kinase B,T(p)-Akt]、总(磷酸化)雷帕霉素靶蛋白[total(phosphorated)mammalian target of rapamyoin,T(p)-mTOR]的变化,并检测Akt抑制剂LY294002作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:免疫细胞化学结果显示,与模型对照组比较,模型组卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)表达明显增强。这提示模型构建成功且分离成功。CCK-8结果表明,白藜芦醇能够提高颗粒细胞的增殖率,有浓度-时间依赖性;并降低细胞内的自噬水平;而Western blot结果显示,白藜芦醇可以减低细胞内LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1的表达,提高p-Akt和p-mTOR的蛋白表达;LY249002作用后,细胞内的LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1表达明显增加,同时p-Akt和p-mTOR的表达则明显降低。结论:白藜芦醇能够明显降低多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞内自噬水平并影响细胞的增殖率,其机制可能与白藜芦醇上调Akt/mTOR通路密切相关。

白藜芦醇调节SIRT1/AMPK通路抑制大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞内自噬的机制研究

目的:探讨植物提取物白藜芦醇对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型颗粒细胞内自噬的影响,并探讨其对SIRT1/AMPK通路的调控作用。方法:体外培养PCOS的SD大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度白藜芦醇(5、10、20、40μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),MTT法观察卵巢颗粒细胞增殖率的变化;电镜观察细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator T1,SIRT1)、单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK(pAMPK)、Beclin1和p62的表达变化,并检测SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示,白藜芦醇能明显促进颗粒细胞增殖(P<0.05),呈浓度-时间依赖性(P<0.05);电镜结果表明白藜芦醇能降低细胞内的自噬体数量(P<0.05)。Western blot结果显示白藜芦醇可以增强卵巢颗粒细胞内SIRT1和pAMPK的蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞内Beclin1的表达(P<0.05),增加p62的表达;联合SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,颗粒细胞内的SIRT1和pAMPK蛋白表达水平明显降低,Beclin1表达明显增加(P<0.05),p62却明显降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇能抑制PCOS卵巢颗粒细胞内自噬水平并促进其增殖,这与白藜芦醇激活SITR1/AMPK通路密切相关。

多囊卵巢综合征颗粒细胞线粒体功能障碍的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)患者存在卵泡发育和成熟障碍。卵巢颗粒细胞在原始卵泡的启动和生长发育过程中发挥着重要的调控作用,其中颗粒细胞的线粒体参与了细胞周期、代谢及信号转导等方面的调节,并通过能量代谢途径为卵母细胞减数分裂、受精直至早期胚胎发育提供能量支持。研究颗粒细胞的线粒体功能是探索PCOS的病理机制、评价卵母细胞质量和胚胎发育潜力的最佳无创性方法之一。大量证据显示,PCOS与卵巢颗粒细胞线粒体功能障碍相关,其机制包括线粒体DNA(mtDNA)拷贝数改变和mtDNA基因突变等。有研究从改善PCOS颗粒细胞的线粒体功能入手,对改善PCOS卵泡发育和成熟障碍进行了探索。该文对近年来PCOS颗粒细胞线粒体功能障碍的相关研究进展进行综述,以探讨PCOS颗粒细胞线粒体功能障碍的发生机制及其改善途径和方法。

骨形态蛋白4对高雄激素血症多囊卵巢综合征颗粒细胞增殖的影响

目的探讨骨形态蛋白4对高雄激素血症多囊卵巢综合征颗粒细胞增殖的影响。方法收集100例在山东大学附属生殖医院行体外受精-胚胎移植助孕治疗患者的卵泡液颗粒细胞体外培养,其中高雄激素PCOS患者50例,对照组50例。两组细胞给予重组人Bmp4处理,分50ng/ml Bmp4组和100ng/ml Bmp4组,每组又根据作用时间的不同,分12、24、48h组。利用MTS法和EdU染色标记法,检测Bmp4对PCOS颗粒细胞增殖的影响。结果上调Bmp4能抑制高雄激素PCOS患者颗粒细胞的存活率和增殖率,并与Bmp4的剂量呈正相关,Bmp4浓度越高,颗粒细胞的增殖率越低。结论 Bmp4能抑制高雄激素PCOS患者颗粒细胞的增殖,从而影响卵泡的发育。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用研究

目的探讨多囊卵巢综合征患者(polycystic ovary syndrome,PCOS)卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用。方法选取2020年10月至2022年3月在淮安市妇幼保健院生殖医学科行IVF/ICSI治疗的20例PCOS患者作为研究对象即为PCOS组,选取行IVF/ICSI治疗的输卵管因素或男方因素患者20例作为对照组。收集两组患者颗粒细胞,并分析颗粒细胞miR-144-3p的表达情况。利用Tar-getScan数据库预测miR-144-3p的靶基因,并采用双荧光素酶活性检测验证靶基因。复苏人卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,KGN),转染并建立miR-144-3p模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-144-3p抑制物组、抑制物阴性对照组、si-PTEN和siRNA-NC组。采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况,RT-PCR及蛋白质印迹技术检测颗粒细胞中miR-144-3p、PTEN mRNA及蛋白的表达情况。结果RT-PCR结果显示P-COS组miR-144-3p表达水平显著低于对照组(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示miR-144-3p mimic组的颗粒细胞凋亡百分比显著低于mimic-NC组(P<0.05),miR-144-3p inhibitor组颗粒细胞凋亡水平显著高于inhibitor-NC组(P<0.05)。生物信息学预测miR-144-3p的靶基因为PTEN,荧光素酶结合实验证实miR-144-3p能特异结合PTEN-3′UTR并下调PTEN基因表达。RT-PCR测定结果显示PCOS组PTEN mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),且与miR-144-3p表达水平呈负相关(r=-0.91,P<0.001)。qRT-PCR及蛋白质印迹检测结果显示与mimic NC组相比,miR-144-3p mimic组中PTEN mRNA及蛋白表达量显著低于mimic NC组(P<0.05)。miR-144-3p inhibitor组PTEN mRNA及蛋白表达量显著高于inhibitor NC组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示si-PTEN组颗粒细胞凋亡水平显著低于siRNA-NC组(P<0.05),而miR-144-3p inhibitor+si-PTEN组的颗粒细胞凋亡比例显著低于miR-144-3p inhibitor组(P<0.05)。结论PCOS患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p表达水平显著降低,而PTEN基因表达水平显著增高,进而促进PCOS患者卵巢颗粒细胞凋亡。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的相关信号通路

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)与多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的发生发展有关,而与IR相关的胰岛素信号通路异常会引起卵巢局部代谢紊乱,进而影响卵泡发育及卵子质量。PCOS卵巢颗粒细胞中胰岛素作用的经典通路,包括磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路;与炎症相关的通路包括Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路等;氧化应激相关通路包括核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)途径和GTP酶免疫相关蛋白7(GTPase of immunity-associated protein 7,GIMAP7)/音猬因子(sonic hedgehog,SHH)途径;与脂质代谢相关的通路如激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)通路等。明确PCOS患者卵巢颗粒细胞中IR相关信号转导通路,增进PCOS病理生理机制的认识,进一步为PCOS的治疗提供新思路。

柚皮素下调RIP1-RIP3-MLKL信号通路抑制多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡

目的基于受体相互作用蛋白激酶(receptor interacting protein kinase,RIP)1-RIP3-混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like proteins,MLKL)介导的细胞坏死性凋亡途径,探究柚皮素对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、柚皮素组、RIP1抑制剂(Nec-1)组、RIP1-RIP3-MLKL坏死信号激活剂(Z-VAD-fmk)组、柚皮素+Z-VAD-fmk组,每组15只。ELISA法检测卵巢组织IL-1β、TNF-α水平;HE法观察卵巢形态;分离卵巢组织颗粒细胞,流式细胞术检测凋亡率及坏死率;免疫组化法检测卵巢组织磷酸化RIP1(p-RIP1)阳性表达;Western blot法检测RIP1-RIP3-MLKL途径相关蛋白表达。结果RIP1特异性抑制剂Nec-1和柚皮素可阻断RIP1磷酸化活化,抑制RIP1-RIP3-MLKL信号通路,并降低PCOS大鼠炎症水平,缓解卵巢颗粒细胞坏死及凋亡(P<0.05)。Z-VAD-fmk可促进RIP1-RIP3-MLKL途径活化,加重卵巢颗粒细胞凋亡,并部分减弱柚皮素的抗卵巢颗粒细胞凋亡作用(P<0.05)。结论柚皮素可能通过阻断RIP1-RIP3-MLKL介导的坏死性凋亡途径活化,抵抗PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。

毛兰素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的 探究毛兰素(ERI)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制。方法 通过皮下注射脱氢表雄酮构建PCOS大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为PCOS组,ERI低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)和ERI高剂量+维替泊芬组(40 mg/kg ERI+10 mg/kg维替泊芬),每组10只;另取10只正常大鼠作为正常组。各给药组大鼠灌胃相应剂量的ERI和/或腹腔注射维替泊芬,PCOS组和正常组大鼠灌胃等体积的1%二甲基亚砜,每日1次,连续6周。给药结束后,检测各组大鼠体重和空腹血糖(FPG),血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,观察卵巢组织形态学变化,分析卵巢组织细胞凋亡情况,检测卵巢组织中凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)]和HippoYAP信号通路相关蛋白[大肿瘤抑制激酶1(LATS1)、磷酸化LATS1(p-LATS1)、Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化YAP(p-YAP)、转录共激活子因子PDZ结合基序(TAZ)]表达水平。结果 与PCOS组比较,ERI低、中、高剂量组大鼠卵巢多囊特征减轻,闭锁卵泡数量减少,颗粒细胞层增厚,体重、FPG水平、T水平、LH水平、LH/FSH、囊性卵泡数量、细胞凋亡指数和Bax、Caspase-3、p-LATS1、pYAP蛋白表达水平均显著降低或减少(P<0.05),黄体数量、E2水平和Bcl-2、LATS1、YAP、TAZ蛋白表达水平均显著升高或增多(P<0.05)。与ERI高剂量组比较,ERI高剂量+维替泊芬组大鼠的上述指标变化均被抑制(P<0.05)。结论 ERI能促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖,调节性激素水平,其作用机制可能与抑制Hippo-YAP信号通路有关。

多囊卵巢综合征病理机制中的颗粒细胞自噬

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性最常见的生殖内分泌紊乱性疾病之一,病理机制尚未阐明。自噬参与卵泡发育的各个阶段,其中卵泡颗粒细胞自噬相对活跃。通过维持颗粒细胞自噬的稳态支持卵巢功能、调控卵泡发育,最终影响胚胎质量及妊娠结局。自噬相关基因和蛋白的异常表达可激活不同的自噬通路,抑制卵泡颗粒细胞发育、干扰内分泌稳态,参与PCOS的病理过程,并影响其预后。综述参与颗粒细胞自噬的关键分子及其在PCOS发生发展中的作用,以期为研究PCOS发生机制及探索临床治疗提供参考。

黄芩苷对多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芩苷对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠颗粒细胞增殖和凋亡的影响及对磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路的调节作用。方法48只大鼠成功建立PCOS模型,并随机分为模型组、黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组和阳性对照组,每组12只,另取12只大鼠作为对照组。黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组大鼠分别灌胃25、50 mg∙kg^(−1)黄芩苷,阳性对照组大鼠灌胃0.3392 mg∙kg^(−1)炔雌醇环丙孕酮片(达英-35),对照组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续3周。用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immuno⁃sorbent assay,ELISA)检测黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、睾酮(testos⁃terone,T)以及雌二醇(estradiol,E2)含量;用HE染色观察卵巢组织病理损伤,细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测颗粒细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测PI3K、磷酸化磷脂肌醇3-激酶(phospho PI3K,p-PI3K)、Akt以及p-Akt蛋白相对表达量。结果对照组大鼠可见黄体,未见囊状扩张卵泡;模型组大鼠卵巢体积变大,少见黄体,可见囊状扩张卵泡;黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组及阳性对照组大鼠卵巢体积变小,可见黄体,囊状卵泡扩增不明显。与对照组比较,模型组FSH和E2水平、颗粒细胞存活率以及p-PI3K和p-Akt蛋白相对表达量降低,LH、T水平和颗粒细胞凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组和阳性对照组FSH、E2水平,颗粒细胞存活率及p-PI3K和p-Akt蛋白相对表达量升高,LH、T水平及颗粒细胞凋亡率降低,其中阳性对照组各指标水平变化最显著,其次是黄芩苷高剂量组(P<0.05)。结论黄芩苷可促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖,抑制凋亡,改善卵巢组织病理损伤,其可能是通过激活PI3K/Akt信号通路发挥作用的。

淫羊藿苷调节SDF-1/CXCR4信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的探讨淫羊藿苷调节基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC型趋化因子受体4(CXCR4)信号轴对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法将从PCOS模型组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞分为PCOS组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、重组大鼠SDF-1蛋白(Rr-SDF-1)组、淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组,另取从正常对照组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞作为对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测卵巢颗粒细胞上清液中卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平;CCK-8法、EdU染色检测颗粒细胞增殖;流式细胞术检测颗粒细胞凋亡;Western blot检测颗粒细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果与对照组比较,PCOS组FSH水平、光密度(OD)_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。与PCOS组比较,淫羊藿苷低、中、高剂量组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率均依次升高,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平均依次降低;Rr-SDF-1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05)。与淫羊藿苷高剂量组比较,淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷可能通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路抑制PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。

沉默GATA4对多囊卵巢综合征大鼠模型卵巢颗粒细胞的影响

目的:探讨沉默GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)表达对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型卵巢颗粒细胞增殖与凋亡、分泌功能及炎症反应的影响及相关机制。方法:制备PCOS模型,分离培养PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞并将其分为对照组(Ctrl组)、siRNA-NC组、siRNA-GATA4组,检测转染后三组卵巢颗粒细胞细胞中GATA4表达和细胞增殖与凋亡情况,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中激素和炎症因子含量,Western Blotting法检测细胞中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-serine threonine kinase,p-AKT)蛋白表达。结果:siRNA-GATA4组卵巢颗粒细胞增殖率、GATA4、PI3K、p-AKT蛋白表达量较Ctrl组明显减少,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达量、细胞上清液中雌二醇(estradiol,E2)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平较Ctrl组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),siRNA-NC组与Ctrl组卵巢颗粒细胞增殖率、细胞凋亡率、GATA4、cleaved caspase-3、E2、LH、T、IL-6、IL-1β、TNF-α、PI3K及p-AKT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默PCOS大鼠模型中GATA4表达,可抑制卵巢颗粒细胞增殖,促进其凋亡,加剧激素分泌异常和炎症反应,其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。

沉默信息调节因子1/叉头框蛋白O1信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的影响实验研究

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮)。将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预)。RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达。Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平。ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe^(2+)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平降低,卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P<0.05)。结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡。

AMH和LH联合检测在成人型卵巢颗粒细胞瘤和多囊卵巢综合征鉴别诊断中的价值

目的:探讨AMH和LH在成人型卵巢颗粒细胞瘤(AGCT)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者鉴别诊断中的价值。方法:回顾分析10例AGCT患者和32例AMH水平大于10ng/mL的PCOS患者的临床资料,比较两组的AMH和LH水平,利用ROC曲线研究AMH和LH或联合检测在AGCT和PCOS鉴别诊断中的价值。结果:相对于PCOS患者,AGCT患者的AMH和LH水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。AMH和LH鉴别诊断AGCT的曲线下面积(AUC)分别为0.803和0.883,联合AMH和LH进行鉴别诊断的AUC最大,达到0.975;AMH和LH的最佳截断值分别为19.4ng/mL和15.7IU/L,AMH和LH单独检测的敏感性和特异性均达80%,两者联合的敏感性达100%。结论:相对于PCOS患者,AGCT患者的AMH和LH水平更高,联合检测有助于早期鉴别诊断AGCT。

多囊卵巢综合征患者颗粒细胞miR-3135b的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-3135b(miR-3135b)在多囊卵巢综合征(Polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)中的表达,并评价其临床意义。方法选取2019年1月至2021年1月河南中医药大学第三附属医院收治的92例因PCOS导致不孕患者纳入PCOS组,选取92例同期于本院因输卵管或男方不育等原因导致不孕患者纳入对照组。记录两组患者一般资料和各级卵泡数及获卵数、胚胎成型率;收集两组患者卵巢GCs,采用实时荧光定量PCR(Real-Time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测卵巢GCs中miR-3135b的表达,并分析其临床意义;采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)分析miR-3135b表达对PCOS的诊断价值。结果PCOS组患者黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、LH/卵泡雌激素(Follicle stimulating hormone,FSH)、孕酮(Progesterone,P)、睾酮(Testoster-one,T)、空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment insulin resistance,HOMA-IR)和雌二醇(Estradiol,E2)均明显高于对照组,FSH、催乳素(Prolactin,PRL)则低于对照组(P<0.05);PCOS组过渡型初级卵泡、典型初级卵泡、次级卵泡、窦卵泡数和获卵数明显高于对照组(P<0.05);PCOS组中miR-3135b表达量(1.92±1.08)显著高于对照组(1.02±0.33)(P<0.05);ROC结果显示miR-3135b表达诊断PCOS的曲线下面积(Area under curve,AUC)为0.750(P<0.001)。结论miR-3135b在PCOS患者GCs中呈现高表达,miR-3135b对于PCOS具有一定的诊断价值。