长链 PCR在中国汉族人多囊肾病 1型致病基因突变检测中的应用(英文)

目的 :研究特异性分离中国汉族人多囊肾病 1型致病基因 (polycystic kidney disease gene 1,PKD1)多拷贝区的方法 ,以排除同源序列对该基因突变检测的干扰。 方法 :利用与同源序列间的个别碱基差异设计 8对能涵盖 PKD1多拷贝区的长链 PCR引物 ,分别对两例健康汉族人基因组 DNA进行 PCR,其扩增产物通过巢式 PCR进行序列测定。 结果 :通过优化PCR体系 ,尤其是以高质量基因组 DNA为模板 ,适当提高退火温度 ,经巢式 PCR测序证实扩增产物序列与 PKD1多拷贝区一致。 结论 :该研究采用的长链 PCR体系可克服同源序列的影响 ,适用于中国汉族人 PKD1多拷贝区的特异性扩增 ,为进一步通过单链构象多态性分析检测汉族人 PKD1突变位点奠定基础。

基于p38-PKD1信号通路探讨葛根芩连汤对妊娠糖尿病小鼠作用及机制

目的探讨葛根芩连汤对妊娠糖尿病(GDM)小鼠模型的作用及其机制。方法以C57BLKsJ^(db/+)(db/+)怀孕小鼠建立遗传性GDM小鼠模型,空白组采用C57BL/KsJ^(+/+)(野生型)怀孕小鼠作为对照,将模型小鼠随机分为模型组,葛根芩连汤低(15 g/kg)、高剂量组(45 g/kg)和阳性药物组(二甲双胍,200 mg/kg),每组10只。给药处理组小鼠自妊娠日开始给药,空白组和模型组给予等量生理盐水。检测葛根芩连汤对GDM小鼠及其子代的安全性的影响,检测GDM小鼠糖耐量和胰岛素耐量、血清和胰腺组织中胰岛素水平,采用组织切片观察胰岛病理学变化,RT-PCR检测胰腺组织中胰岛素生成和分泌相关因子的转录水平;检测Min6细胞的增殖、Min6细胞在高糖刺激下的胰岛素分泌量。结果 与模型小鼠比较,葛根芩连汤组及阳性药物组小鼠肝脏和肾脏的病理学形态得以改善;与模型组小鼠比较,GDM给药葛根芩连汤小鼠的糖耐量和胰岛素耐量显著改善(P<0.05)、胰岛形态显著改善、血清和胰腺组织中胰岛素水平升高、胰岛素生成和分泌相关因子的转录水平显著上调(P<0.01,P<0.05);进一步机制研究发现葛根芩连汤可下调p38蛋白的磷酸化水平,上调多囊肾病1型致病基因(PKD1)蛋白的磷酸化水平(P<0.01,P<0.05)。在Min6细胞模型中,葛根芩连汤可促进Min6细胞的增殖,促进Min6细胞在高糖刺激下的胰岛素分泌量(P<0.01)。采用工具药阻断发现抑制了PKD1之后,减弱了葛根芩连汤对胰岛素的升高作用(P<0.01)。结论 葛根芩连汤对GDM小鼠及其子代的安全性良好,可通过调控p38-PKD1信号通路而促进胰岛素分泌,对妊娠糖尿病具有一定的干预作用。