腺病毒载体在肝细胞肝癌基因治疗中的应用

腺病毒载体因其独持的优势,在肝细胞肝癌(HCC)基因治疗的研究中应用广泛。HCC基因治疗包括自杀基因、免疫基因、抑癌基因、反义基因和多基困联合治疗等。本文就腺病毒载体的结构、特点、构建、在HCC的基因治疗中的应用和存在的问题及解决方法作一综述。

当前肿瘤基因治疗中存在的主要问题及其解决途径

本文概述了当前肿瘤基因治疗研究中存在的一些主要问题 ,如绝大多数治疗方案中目的基因只有一个 ,肿瘤基因治疗缺乏靶向性 ,基因转移载体的效率、安全性及容量等问题。讨论了解决这些问题的主要途径 ,即肿瘤多基因联合治疗、直接体内途径基因治疗与靶向基因治疗、基因转移载体的改造。

双启动子共表达杆状病毒载体的构建和鉴定

目的 探讨双启动子共表达杆状病毒载体作为双基因传递载体的可行性.方法 利用分子克隆技术将分别由巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）启动子介导下的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）和胶质细胞源形神经生长因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）克隆到pFastBac Dual载体中,得到重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF,并利用Lipofectamine 2000将其转染到HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法检测EGFP和GDNF的表达情况.按照Bac-to-Bac杆状病毒表达系统手册进行杆状病毒的包装,将获得的重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF转导Hela细胞,通过间接免疫荧光法和Western blot检测EGFP和GDNF的表达情况.结果 重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功构建；重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功包装；EGFP和GDNF实现了在293T细胞中和Hela细胞中的共表达.结论 pFastBac Dual载体为一个有效的双基因传递载体,为多基因联合治疗提供了一个强有力的病毒载体.