杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装

目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒。为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的基因表达。结果扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒。结论成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多亚基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴。

多基因表达对IIIA期非小细胞肺癌术后转移及生存期的影响

目的 前瞻性探讨抑癌基因 p5 3,癌基因K ras、HER2 ,血管内皮生长因子 (VEGF) ,表皮生长因子受体 (EGFR) ,粘连因子CD4 4 ,金属蛋白酶MMP9等蛋白表达对ⅢA期非小细胞肺癌 (NSCLC)术后复发转移和生存期的影响。方法 采用免疫组织化学方法检测 32例ⅢA期非小细胞肺癌手术标本中上述蛋白表达。结果 p5 3、K ras、VEGF、EGFR、CD4 4、MMP9和HER2蛋白表达率分别为 6 2 .5 % (2 0 / 32 )、34.3% (11/ 32 )、2 5 .0 % (8/ 32 )、4 6 .9% (15 / 32 )、78.1% (2 5 / 32 )、5 0 % (16 / 32 )和4 3.8% (14 / 32 )。K ras,EGFR蛋白表达与疾病进展时间 (timetoprogression ,TTP)有关 (P =0 .0 30 ,P =0 .0 0 8)。多变量Cox回归分析 ,K ras,HER2蛋白表达是影响生存期的独立影响因素。Kaplan M生存分析显示K ras,HER2阳性组生存期明显短于阴性组 (P =0 .0 4 2 ,P =0 .0 39)。结论 对于ⅢA期NSCLC ,上述 7种因子阳性表达率很高。K ras,EGFR蛋白表达阳性患者术后更易发生远处转移 ,K ras ,HER2表达是影响生存期的独立影响因素。

多基因表达对非小细胞肺癌术后预后的评价

目的前瞻性探讨癌基因p53、环氧合酶-2(COX-2)、表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞增殖核抗原(PCNA)、MYC、p21和nm23等蛋白在非小细胞肺癌(non-sm all cell lung cancer,NSCLC)组织表达及其对预后的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测40例NSCLC瘤组织中上述蛋白表达,并分析这些参数与患者预后之间的关系。结果p53、COX-2、EGFR、VEGF、PCNA、MYC、p21和nm23蛋白表达率分别为77.5%(31/40)、67.5%(27/40)、57.5%(23/40)、87.5%(35/40)、90%(36/40)、87.5(35/40)、32.5%(13/40)和32.5%(13/40)。多因素Cox回归分析示,EGFR是影响该组患者生存期的独立因素。EGFR阳性表达的NSCLC患者生存期明显短于EGFR阴性表达者(P=0.018)。结论在NSCLC,存在上述8种基因蛋白的表达;EGFR表达与NSCLC患者术后预后不良相关。

脂肪酸合成酶系多基因表达载体的构建

目的利用独立表达盒法构建脂肪酸去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体进一步研究多基因表达载体中各个基因表达的相互影响。方法利用基因工程的方法扩增2个脂肪酸去饱和酶基因和2个延长酶基因,然后连接到pcDNA3.1(-)哺乳动物表达载体上,之后转化、筛选、酶切鉴定。最后脂质体法瞬时转染HK293T细胞,提取RNA检测这四个基因的表达情况。结果成功构建了含脂肪去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体pcDNA3.1-EF,并在HK293T细胞中成功表达。结论四基因表达载体pcDNA3.1-EF在HK293T细胞中成功表达,单个基因在表达载体中的次序对基因的表达没有明显影响。

利用Cre/loxP重组系统构建甜菜碱合成酶多基因表达载体

通过使用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体构建系统,将辽宁碱蓬（Suaeda liaotungesis kitag）的胆碱单加氧酶（CMO）基因、甜菜碱醛脱氢酶（BADH）基因以及烟草的核基质结合区（MAR）序列构建到同一表达载体上,得到可直接用于农杆菌转化的植物表达载体pYLTAC747H-MAR-BADH-CMO-MAR.该甜菜碱合成酶多基因表达载体的成功构建为进一步进行植物的遗传转化,以有效提高转基因植株的耐盐性提供了实验基础.实验中,用热激法替代了电击法进行质粒的大肠杆菌转化,并去掉了透析等步骤,简化了构建过程.

预测乳腺癌新辅助化疗疗效的多基因表达谱研究进展

新辅助治疗是在除外转移的情况下,在局部治疗前(手术或放疗)进行的全身药物治疗。乳腺癌的异质性决定了乳腺癌对药物治疗的敏感性存在较大的差异,用多基因表达谱模型来预测新辅助治疗疗效,为乳腺癌个体化治疗方案的选择提供了新的途径。文章简述预测性多基因表达谱在乳腺癌治疗中的应用。

用于多基因表达的逆转录病毒载体

用于多基因表达的逆转录病毒载体赖冠华，陈诗书（上海第二医科大学人类基因治疗研究中心分子生物学实验室，上海２０００２５）关键词剪接载本，内启动子载体，内核糖体，进入位点逆转录病毒感染细胞后，能将病毒基因稳定地整合到宿主细胞基因组，并有效表达且传递到子代...

多基因表达计数技术及其生物医学应用

许多慢性病如心脑血管疾病、糖尿病、肿瘤或是慢性传染病如艾滋病、病毒性肝炎均涉及多种基因的相互作用，检测疾病和药物治疗过程中大量基因的表达变化，将为疾病的诊断和疗效评价提供可靠的分子标志物。除了共性变化之外，疾病的发生和治疗还具有明显的个体差异，发展整合个体组学鉴定可能是揭示个体差异的重要途径，斯坦福大学医学院的Michael Snyder教授课题组首次报道了此方面的研究成果。使用基因芯片、蛋白质组学和代谢组学的方法，历时两年半跟踪监测了一名志愿者体内4万余种基因以及蛋白质水平的分子变化，比临床其他指标更早地发现了该志愿者已罹患糖尿病。

文昌鱼中一个2A肽介导的多基因表达载体构建

2A肽(P2A)介导的多基因表达载体具有高裂解活性且上、下游基因等摩尔表达等优点,已广泛应用于动物转基因研究.文昌鱼(amphioxus)作为一种新兴的模式动物,尚无应用这种表达载体的报道,为此在pXT7转录系统基础上构建一个P2A介导的多基因表达载体.将体外转录的P2A介导的mRNA注入文昌鱼卵细胞并受精后,经激光共聚焦显微镜和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表明,该mRNA在文昌鱼胚胎中能够高效地翻译和剪切,并且在信号肽的作用下eGFP蛋白定位于细胞核中,而mCherry蛋白定位于细胞膜上,上、下游蛋白间的剪切效率达到91%;进而构建了由文昌鱼热激蛋白基因启动子(BbHsp70)启动,并由P2A介导的多基因表达载体,实验证明其在热诱导和上、下游蛋白剪切方面均达到了预期效果.

酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用

构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2,克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec.该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.

抗菌肽多基因表达技术与策略

以抗菌肽为代表的小分子多肽表达量低、表达产物不稳定、与宿主之间的毒性作用等一直制约其规模化生产。只单纯表达抗菌肽单体的简单载体构建,不足以实现抗菌肽表达的高通量和高活性,而以多聚体的蛋白表达或基因复合体组装有可能达到理想目标。因此,研究抗菌肽分子聚合体表达的载体构建技术是未来抗菌肽生物工程化生产的发展趋势,多基因表达系统是研究大分子聚合物的结构和功能的有效工具。文章针对这些问题,重点介绍了几种多基因共表达系统种类,阐述了多基因表达系统应用于抗菌肽领域的表达策略、前景和价值,同时为抗菌肽表达量的提高提供一些理论参考。

多基因表达检测法可用于乳腺癌的社区筛查

一项大规模的以社区为基础的流行病学调查结果显示，一种多基因检测方法可用以筛查早期的乳腺癌患者，这些患者往往处于乳腺癌确诊10年后死亡的低风险中。美国加利福尼亚州奥克兰Kaiser Permanente研究所的Laurie Habel博士在近日召开的第27届圣安东尼奥乳腺癌学术会议上报道说，临床鉴定淋巴结阴性的早早期乳腺癌的能力较为有限，但这些患者一旦被确诊后，

多基因植物表达载体的构建

将功能互补的抗真菌病基因或抗虫基因共同转化水稻植株 ,可望获得既抗病又抗虫的转基因水稻植株。马铃薯蛋白酶抑制剂 基因 Pin ,苏云金杆菌毒蛋白 Cry ( b)基因 B.t.,以及 PPT乙酰转移酶基因 bar构建在一个载体上。水稻碱性几丁质酶基因 RC2 4与大麦核糖体失活蛋白基因 B- RIP构建在另一个载体上。两载体共同转化水稻植株的工作正在进行之中。

膀胱癌组织中MMP-2、MMP-9、VEGF和RECK基因的表达及临床意义

目的:观察MMP-2、MMP-9、VEGF和RECK基因在膀胱癌组织中的表达,探讨膀胱癌转移可能的基因机制。方法:采用RT-PCR法检测50例膀胱癌手术切除标本中MMP-2、MMP-9、VEGF和RECK基因的表达,并分析其临床意义。结果:MMP-2、MMP-9、VEGF和RECK在膀胱癌组织中的阳性表达率分别为80%、56%、78%和64%。膀胱癌组织MMP-2、MMP-9和VEGF三种基因的表达水平高于癌周组织(P<0.05),而RECK基因的表达水平低于癌周组织(P<0.05)。膀胱癌组织中MMP-2、MMP-9和VEGF基因的表达水平与膀胱癌组织的病理分级分期密切相关,而RECK基因的表达水平与膀胱癌的分级分期无明显相关。结论:膀胱癌组织存在多基因的表达异常,其发生、发展及转移与多基因联合作用有关。

多基因表达系统研究进展

细胞中大多数蛋白质以亚基形式与其他蛋白装配成蛋白复合体而发挥功能。大分子蛋白复合物的结构研究和功能分析在后基因组时代成为热点,如何高效地获得多蛋白复合物是研究其功能和结构的前提。利用基因工程技术实现多个蛋白亚基在同一宿主细胞内共表达并装配成复合体是获得多蛋白复合物的有效手段。多基因表达系统在基础和应用研究中正起到越来越重要作用。多基因表达系统研究发展迅速,尤其在近5年内取得较大进步。对各种多基因表达系统进行了总结。同时介绍了不同多基因表达系统的构建策略和构建方法,并对最新的多基因表达载体构建和多基因表达系统的初步应用进行了介绍。多基因表达系统将在作物改良、疫苗制备、基因治疗和药物开发方面发挥更大作用。

大肠腺瘤-腺瘤癌变-腺癌序列中多基因异常表达的检测及意义

大肠腺瘤┐腺瘤癌变┐腺癌序列中多基因异常表达的检测及意义李正生郁宝铭王瑞年秦兰芳尹浩然林言箴关键词大肠腺瘤┐腺瘤癌变┐腺癌序列ｐ５３ＰＣＮＡＥＧＦＲ作者单位：上海第二医科大学附属瑞金医院普外科（上海２０００２５）Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ等［１］在实验的基...

微生物细胞工厂中多基因表达的控制策略

微生物代谢工程和合成生物学是当今微生物技术领域研究的热点,微生物的生长速度快、容易进行大规模培养;遗传背景清楚、遗传操作简便可靠等性质使其在与人类生活相关的多个领域中起到重要的作用。微生物细胞工厂是指人工设计的能够进行物质生产的微生物代谢体系。许多微生物细胞工厂的构建由于引入多个基因或整条代谢途径,而可能导致代谢失衡、部分代谢中间产物积累等问题,需要使用一定的调控策略加以控制。以下对涉及多个基因作用的微生物细胞工厂中所使用的调控策略,分为若干层次进行了总结和探讨,并对今后多基因控制策略的发展方向进行了预测与展望。

豆科共生关键基因表达载体的构建及其功能互补分析

利用生物工程技术扩大根瘤菌宿主范围、提高固氮效率,实现非豆科植物共生固氮一直是生物固氮研究的热点。将豆科植物百脉根与根瘤菌共生信号通路的9个关键基因分别置于不同根组织强表达启动子下,构建了5个用于转化水稻的多基因表达载体。通过毛根转化互补豆科植物突变体,结果表明,这些基因大多数都能互补百脉根或苜蓿相应基因突变体,即多基因表达载体可用于水稻稳定转化,在水稻中搭建1条与根瘤菌共生的基因线路,为探索构建水稻共生固氮体系提供理论和技术支撑。