GenomeLab-(TM) GeXP检测rhIL-24联合顺铂对肺癌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨重组人白细胞介素24(rhIL-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡相关基因的变化。方法用160 ng/m L rhIL-24、3μg/m L DDP及160 ng/m L rhIL-24联合3μg/m L DDP处理A549细胞,应用Genome LabTMGe XP多基因遗传表达分析系统检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、存活蛋白(survivin)、caspase-3、视网膜母细胞瘤基因(Rb)、p53的mRNA表达水平。结果 rhIL-24蛋白处理的A549细胞上调Bax、caspase-3、Rb的mRNA水平,下调Bcl-2、survivin的mRNA水平,但p53mRNA变化无规律,rhIL-24联合DDP组对A549细胞上述基因表达的影响更明显。结论 rhIL-24蛋白可通过上调Bax、抑癌基因Rb,下调Bcl-2、survivin,激活caspase-3而诱导人肺腺癌A549细胞凋亡。

GeXP检测rhIL-24联合DDP对人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡相关基因的实验研究

目的:利用多基因遗传表达分析系统(GeX P)探讨重组人白细胞介素-24(rhI L-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞6个凋亡相关基因的变化。方法:用rhI L-24、DDP及rhI L-24+DDP干预A549/DDP细胞,应用多基因遗传表达分析系统(GeX P)同时检测Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase3、Rb与P53等6个凋亡相关基因。结果:rhI L-24蛋白可引起A549/DDP细胞Bax基因、Caspase3基因、Rb基因转录上调;Bcl-2基因、Survivin基因转录下调,但抑癌基因P53变化无规律,rhI L-24联合DDP后Bax、Survivin、Rb表达较单独rhI L-24组变化更加显著。结论:rhI L-24蛋白可通过上调Bax,下调Bcl-2、Survivin,激活Caspase3,上调抑癌基因Rb诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡。

GeXP多重基因表达分析系统研究进展

Genome Lab Ge XP(Gene e Xpression Profiler)是由美国Beckman Coulter公司推出一个多基因分析平台。该系统采用荧光标记的通用引物和末端连接有通用引物序列的特异性嵌合引物相结合引发多重体系扩增,解决了由于PCR选择和PCR漂移引起的传统多重PCR技术的扩增偏爱性,并与毛细管电泳相结合,解决了琼脂糖凝胶电泳因分辨率不高造成的假阴性和假阳性。本文主要介绍了Ge XP多重基因表达分析系统的技术背景、基本原理、扩增优势,重点阐述了其在各方面的应用现状及发展趋势。

多基因表达系统在禽流感、登革及基孔肯雅病毒检测中的应用研究

目的该研究利用多重基因表达分析系统(GeXP)检测平台,建立禽流感病毒(AIV-H5、AIV-H7、AIV-H9)、登革病毒,基孔肯亚病毒的检测技术方法。方法制备病毒标准品质粒,收集病原体样本,利用GenBank下载病毒的核苷酸序列,根据病毒的序列特征,利用GeXPeXpress Profiler设计特异性引物,优化条件使GeXP系统能够特异性的检测对应病毒。结果优化后的引物能够同时检测禽流感病毒(AIV-H5、AIV-H7、AIV-H9)、登革病毒和基孔肯亚病毒病毒,特异性强,无交叉反应。结论GeXP检测方法的建立为快速检测禽流感病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒提供了便利,对分子诊断有重要意义。

多基因表达系统在蚊媒传染病检测中的应用研究

目的多基因表达分析系统(gene expression profiler genetic analysis system, GeXP)检测特异性强,检测速度和灵敏度明显提高。本研究利用GeXP检测平台,建立裂谷病毒、登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒的检测技术方法。方法 根据病毒的序列特征,利用GeXP eXpress Profiler设计特异性引物,优化条件使GeXP系统能够特异性的检测对应病毒。结果 优化后的引物能够同时检测裂谷病毒、登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒,产物经GeXP系统检测,4个峰值分别位于370.31bp、329.75bp、284.36bp和247.52bp,符合4种病毒PCR产物条带大小,特异性强,无交叉反应。结论 GeXP系统能够用于蚊媒传染病高通量检测工作,对分子诊断有重要意义。

应用多重GeXP-PCR同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的研究

拟建立一种基于GeXP多基因表达分析系统的多重PCR方法,同时检测6种鸡免疫抑制病病毒——鸡马立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亚群)、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒。多重PCR反应使用嵌合引物和通用引物组合的反应体系,经过GeXP多基因表达分析系统进行毛细管电泳,鉴别PCR产物片段;通过调整嵌合引物浓度、Mg^(2+)浓度、Taq酶浓度优化反应体系及调整退火温度和时间优化反应条件。应用建立的多重GeXP-PCR,分别单独和同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的8个目的基因,同时以其他常见禽类病毒和鸡组织器官核酸为对照,验证其特异性;检测8个目的基因不同浓度的克隆质粒,验证其敏感性;应用建立的多重PCR检测300份临床样品,并同时用荧光定量PCR和测序验证其检测结果的准确性。结果表明建立的多重GeXP-PCR方法能够分别扩增出6种病毒,8个特异性目的片段,不能扩增其他常见禽类病毒和鸡组织器官的基因;在低至100copies·20μL^(-1)的水平能同时特异性地检测出6种鸡免疫抑制病病毒核酸;检测300份临床病死鸡样品,190份样品显示为阳性,PCR和测序结果与多重GeXP-PCR结果相符。本研究建立的多重GeXP-PCR方法可特异、敏感、高通量地检测6种鸡免疫抑制性病毒,可用于临床鉴别诊断和分子流行病学调查,具有很高的临床应用价值。

Overexpression of polo-like kinase1 predicts a poor prognosis in hepatocellular carcinoma patients

AIM： To elucidate the role of overexpressed polo-like kinasel （PLK1）in hepatocellular carcinoma （HCC）. METHODS： We prospectively collected clinicopathological, immunohistochemical and semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） data from 135 HCC patients undergoing successful hepatectomy. The correlations between PLK1 mRNA expression and clinicopathologic variables were analyzed by Mann-Whitney U test. Prognostic factors were identified by univariate and multivariate analyses. RESULTS： Immunohistochemical results showed overexpression of PLK1 was mainly found in tumor tissues compared with tumor-free tissue. A similar mRNA result was obtained by semi-quantitative RT-PCR. A total of 111 samples were positive for PLK1 mRNA expression. The positive expression was correlated with venous invasion, tumor nodules and Edmondson grade. Furthermore, 1, 3, 5-year survival rates in the positive expression group were significantly lower than the negative control group. Multivariate analysis showed that positive PLK1 expression was an independent risk factor for HCC. CONCLUSION： PLK1 could be a potential biomarker for diagnosis and therapy for HCC.