15种中草药超临界CO_2流体萃取物对2种水霉菌的抑制作用研究

研究了15种中草药超临界CO2流体萃取技术,从中草药粉碎的粒度、超临界CO2流体萃取仪的萃取温度、萃取压力对中草药提取条件进行了优化,获得了15种中草药超临界CO2流体萃取技术方案;将15种中草药超临界CO2流体萃取物添加到PDA培养基中研究了15种中草药萃取物对多子水霉(Saprolegniales ferax)和澳大利亚水霉(Saprolegnia australis)菌丝的抑制作用,结果显示:中草药粉碎成20目时,适宜采用超临界CO2流体萃取仪进行萃取,当超临界CO2流体萃取仪的萃取温度一定的条件下萃取物产率随萃取压力的提高而增加,当萃取压力一定的条件下萃取物产率随萃取温度的增加先增加后降低;15种中草药中川楝子、土槿皮、五倍子、山苍子的萃取物对2种水霉菌菌丝的生长抑制效果相对较好,当萃取物浓度大于200 mg/L时才能较好抑制2种水霉菌菌丝的生长。

百部碱等5种植物提取物对水霉菌的抑制作用

从5种植物提取物中筛选出能有效抑制多子水霉(Saprolegnia ferax)菌丝生长的药物。采用以24孔细胞培养板为载体,2 mL培养体系药物浓度梯度液体培养法培养水霉菌,判断各植物提取物对多子水霉菌菌丝是否有抑制作用,并进一步测定有效植物提取物的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。百部碱、蛇床子素、苦楝素、鱼藤酮、烟碱5种植物提取物对水霉菌都有不同程度的抑制作用,苦楝素抑制作用最强,烟碱最弱。百部碱对水霉菌菌丝生长抑制作用24h时MIC50=600mg/L,48 h时MIC50=606mg/L;蛇床子素对水霉菌菌丝的抑制作用24h时MIC50=2578mg/L,48h的MIC50=2982mg/L;苦楝素对水霉菌菌丝生长抑制作用情况:24h的MIC50=34.80mg/L,48h的MIC50=39.28mg/L;烟碱在浓度为20 g/L时对水霉菌没有明显的抑制作用。5种植物提取物的抑制作用强弱顺序为:苦楝素﹥鱼藤酮﹥百部碱﹥蛇床子素﹥烟碱。

我国淡水养殖动物主要致病性水霉菌病原的分析

应用ITS(internal transcribed spacer,ITS)区分子系统发育进化分析法和限制性片段长度多态性分析法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)相结合,对近年来分别采集于中国上海、江苏、江西、四川、河北、浙江、湖北等7个主要淡水养殖区的60株疑似致病性水霉菌(Saprolegnia)进行鉴定分类,并系统分析了我国已报道的致病性水霉菌的分类情况,比较了分别分离自鱼体和卵的多子水霉的生物学特性。研究结果表明,60株疑似水霉菌分为10个基因型,其ITSLPCR-LRFLP谱型一致属于典型多子水霉(Saprolegniales ferax)、寄生水霉(Saprolegniales parasitia)和澳大利亚水霉(S.australis)分组类型;ITS系统发育进化分析结果显示,我国致病性水霉菌以多子水霉和寄生水霉为主,二者为我国淡水养殖主要的致病性水霉菌病原。此外,对鱼体和卵来源的多子水霉生物学特征进行比对后发现,二者没有明显差异,同一致病菌株既可感染鱼体也可感染卵。此研究的开展丰富了我国致病性水霉菌分类统计的生物学资料,为水霉病预警和药物防治技术的开发提供了重要的参考价值。

黄颡鱼卵水霉病病原的分离鉴定及其无性繁殖特性

【目的】对黄颡鱼卵水霉病病原进行分离鉴定,并对其无性繁殖特性进行研究。【方法】采用传统方法从患水霉病的黄颡鱼卵上进行丝状真菌的分离,然后通过人工感染实验证实分离菌株的致病性,通过形态学观察和ITS rDNA序列分析对致病菌株进行鉴定,并进一步通过单因子法研究其无性繁殖特性。【结果】从患水霉病的黄颡鱼卵上分离了4株丝状真菌,经人工感染试验证实其中一株丝状真菌HP对黄颡鱼卵具有致病性,并进一步研究了其形态与无性繁殖特性,开展了ITS rDNA序列分析。实验结果表明,菌株HP菌丝为透明管状结构,中间无横隔,分枝较少;游动孢子囊多数呈棒状,游动孢子发育成熟后从孢子囊中释放出来,并迅速游离;能够产生第二孢孢子;新孢子囊以内层出的方式产生;藏卵器呈球形,与雄器同枝或异枝。菌株HP的ITS rDNA序列与GenBank基因库中水霉属菌株自然聚类,同源性高达99%,与多子水霉菌株Arg4S(GenBank登录号GQ119935)的亲缘关系最近。结合形态特征与ITS序列鉴定的结果,判定菌株HP为多子水霉(Saprolegnia ferax)。此外,菌株HP在5°C-35°C、pH 4-10范围内均能产生游动孢子,产生游动孢子的最适温度和pH分别为20°C和7,而且5-25 mg/L福尔马林和0.25 1.25 mg/L二硫氰基甲烷对菌株HP产生游动孢子具有明显的抑制作用。【结论】分离鉴定了黄颡鱼卵水霉病病原,并确定了其无性繁殖特性,可以作为该病防治用药的依据。

黄颡鱼卵水酶病

黄颡鱼是我国重要的淡水名优鱼类之一,近年其养殖发展迅速,已经形成重要的产业[1]。由于黄颡鱼的苗种繁育阶段其受精卵极易患水霉病,严重制约黄颡鱼的苗种规模化生产。开展黄颡鱼受精卵水霉病的病原学、病原生物学特性以及控制方法研究具有较为重要的理论意义与实际应用价值。