蝉蜕中乙酰多巴胺二聚体超高效液相色谱法多组分测定及其在药材中的分布

目的建立同时测定蝉蜕药材中3种乙酰多巴胺二聚体的含量测定方法,并考察其在药材中的分布。方法利用硅胶柱色谱,开口ODS柱色谱和制备高效液相进行分离纯化,得到3种乙酰多巴胺二聚体,采用超高效液相色谱法(UPLC)对3种乙酰多巴胺二聚体的含量进行测定。结果样品中3种成分的色谱峰能达到基线分离,线性良好。不同部位3种成分的含量差别极大:前螯中3种成分含量最高;腹部含量最低,仅为前螯中含量的1/3;头部和胸部含量相近,约为前螯中含量的1/2。结论所用UPLC法操作简便,结果准确,重现性好,可用于蝉蜕药材中3种乙酰多巴胺二聚体成分的含量测定。鉴于各部分中有效成分的含量差异太大,建议在临床使用过程中,注意药材的完整度,或者取样的均匀度。

多巴胺D_2受体遗传多态与原发性震颤的易患性

目的 探讨多巴胺D2 受体基因多态与ET遗传易患者。方法 采用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)技术 ,首次检测 80例无血缘相关的ET患者与 10 0例正常对照DRD2 基因TaqⅠ基因突变 ,比较essentialtremor(ET)与正常对照之间的多态性频率的差异。结果 DRD2 基因TaqⅠA和等位基因频率分布在ET组与正常对照无显著差异。结论 DRD2 基因TaqⅠA多态性可能与ET的遗传易患性无关 。

蝉蜕中的光活性N-乙酰多巴胺二聚体

蝉蜕(zentai)曾用作退热、镇痉和消炎药,而且具有交感神经节阻滞活性,除了甲壳质和氨基酸外,关于其它成分尚无报道。 通过检测蝉蜕中的成分,分离得到2种1,4-哌氧环烷(1,4-benzodioxane)的衍生物,相当于N-乙酰多巴胺二聚体(5、6)和4种苯酚单体(1～4)。

基于多孔碳纳米微球的电化学传感器用于检测4-氨基苯酚

以多巴胺为前体,利用高温碳化的方法制备多孔碳纳米微球.多孔碳纳米微球通过透射电子显微镜和X射线粉末衍射图谱来进行表征.利用多孔碳纳米微球修饰玻碳电极,构建电化学传感器用于4-氨基苯酚的检测.结果表明,该传感器实现了对4-氨基苯酚的灵敏检测,线性检测范围为0.1~120μmol/L,检出限为20nmol/L.此外,该方法具有稳定性好、选择性高等优点.

食蟹猴上肢取食执行时间的随龄变化及其与^(99m)Tc-TRODAT-1摄取率的相关关系研究

目的研究食蟹猴随年龄增长伴随的用上肢取食执行时间的变化及其与纹状体99mTc-TRODAT-1〔锝99-2β-[N,N'-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷〕摄取率之间的相关关系。方法选取4、10和15岁3个年龄组的健康食蟹猴共30只,利用改良的运动活动平板定量测定上肢取食执行时间,各年龄组分别选取4只动物用多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)配体99mTc-TRODAT-1结合的单光子发射体层摄影术(single-photon emission computed tomography,SPECT)显像观察脑内纹状体多巴胺转运体放射性摄取率(99mTc-TRODAT-1摄取率)的变化。结果随着年龄的增长,食蟹猴用上肢取食执行时间逐渐延长,纹状体99mTc-TRODAT-1放射性摄取率呈逐渐减低的趋势,直线回归分析结果显示食蟹猴上肢取食执行时间与年龄呈统计学相关关系,且与纹状体99mTc-TRODAT-1放射性摄取率亦呈统计学的相关关系。进一步的独立于年龄的部分相关分析表明年龄增长驱动2者的相关。结论正常食蟹猴随年龄增长脑内99mTc-TRODAT-1摄取率的减少是造成食蟹猴上肢取食执行时间延长的关键因素之一。

SOX2/DRD2 signaling pathway facilitates astrocytic dedifferentiation in cerebral ischemic mice

Objective:To explore the effects of dopamine receptor D2(DRD2)on astrocytic dedifferentiation based on SOX2-regulated genes in neural stem cells(NSCs)and astrocytes.Methods:Immunofluorescence staining and SOX2-GFP mice were used to examine the lineage differentiation of SOX2-positive cells during the development of cerebral cortex.Primary NSCs/astrocytes culture,ChIP-seq and Western Blot were adopted to analyze and verify the expression of candidate genes.Pharmacological manipulation,neurosphere formation,photochemical ischemia,immunofluorescence staining and behavior tests were adopted to evaluate the effects of activating DRD2 signaling on astrocytic dedifferentiation.Results:Immunofluorescence staining demonstrated the NSC-astrocyte switch of SOX2-expression in the normal development of cerebral cortex.ChIP-seq revealed enrichment of DRD2 signaling by SOX2-bound enhancers in NSCs and SOX2-bound promoters in astrocytes.Western Blot and immunofluorescence staining verified the expression of DRD2 in NSCs and reactive astrocytes.Application of quinagolide hydrocholoride(QH),an agonist of DRD2,significantly promoted astrocytic dedifferentiation both in vitro and in vivo following ischemia.In addition,quinagolide hydrocholoride treatment improved locomotion recovery.Conclusion:Activating DRD2 signaling facilitates astrocytic dedifferentiation and may be used to treat ischemic stroke.

High-voltage-activated calcium current and its modulation by dopamine D_4 and pituitary adenylate cyclase activating polypeptide receptors in cerebellar granule cells

小脑颗粒细胞是离体单细胞水平中枢神经元生物学研究的理想模型．随着细胞发育，其ＨＶＡ钙电流的基因表达、门控性质和药理学特征发生明显变化，提示钙电流涉及颗粒细胞的成熟和兴奋性的产生．多巴胺通过激活膜上的Ｄ４受体抑制Ｌ型钙电流，这种抑制效应并不需要腺苷酸环化酶系统的参与．功能性Ｄ４受体的首次发现不仅有助于研究抗精神病药，更揭示了多巴胺也参与小脑神经元之间的兴奋传递过程．ＰＡＣＡＰ则通过激活其Ｉ受体增加钙内流和钙库的释放使胞浆内钙浓度提高，ＰＡＣＡＰ的钙通道刺激效应可能需要ＰＬＣ系统的介导，并与颗粒细胞的成熟和成活有关．

蝉蜕HPLC定量分析方法的建立和质量评价研究

目的建立蝉蜕Cicadae Periostracum中乙酰多巴胺二聚体A和B的定量分析方法,并用于蝉蜕药材的质量评价。方法建立HPLC-UV方法,并进行方法学验证,同时对4个基原40批市售药材的2种乙酰多巴胺二聚体进行含量测定,并进行聚类分析。采用优化的Alltima C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水流动相,2种成分能与其他色谱峰分开,并达到基线分离,在测定浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率在97.53%~102.75%,方法精密度和重复性的RSD均小于5%,样品在24 h内稳定;依据2种乙酰多巴胺二聚体含量进行聚类分析。结果所建立的分析方法简便,准确度和精密度良好,能作为蝉蜕药材常规定量评价方法;40批蝉蜕药材可聚为3类,但2种乙酰多巴胺二聚体的含量没有基原特征性。黑蚱蝉基原的蝉蜕商品中乙酰多巴胺二聚体的含量差异较大,可能与不同来源的商品污染泥沙的量不同有关。结论山蝉、华南蚱蝉和蟪蛄基原的蝉蜕含有较高的乙酰多巴胺二聚体,且整体色谱特征与黑蚱蝉基原蝉蜕相似,是蝉蜕药材的潜在资源,严控泥沙应该是保证蝉蜕药材质量稳定一致的主要措施。

炒九香虫的炮制工艺优化及其质量标准的建立

目的:优选炒九香虫的炮制工艺,并建立其质量标准。方法:采用滚筒式炒药机,以炮制温度、炮制时间、炒药机转速为炮制因素,以镇痛率、多巴胺二聚体含量和醇溶性浸出物得率为考察指标,在单因素试验基础上,通过正交试验优选九香虫的炒制工艺,利用最佳工艺对10个不同批次的九香虫进行炒制,并测定其总灰分和醇溶性浸出物的含量。结果:炒九香虫的最佳工艺为炒制温度170℃,炒制时间5 min,炒药机转速50 r·min^(-1)。建议炒九香虫的总灰分定为不超过5.2%,醇溶性浸出物不得少于16.8%。结论:优选的炮制工艺合理可靠、稳定性好、方法简便,为规范炒九香虫饮片的炮制工艺和质量标准提供科学依据。

西玛津对MN9D细胞增殖影响

目的探讨西玛津(Simazine)对多巴胺能神经前体细胞系(MN9D)细胞增殖的影响。方法选择MN9D细胞,分别以50、300、600μmol/L西玛津染毒,同时设溶剂对照及空白对照,采用噻唑蓝(MTT)法检测西玛津对MN9D细胞生存率影响;利用倒置显微镜观察染毒后细胞形态改变。结果西玛津能破坏体外培养MN9D细胞形态、抑制其生长和分化;高剂量西玛津染毒12、24、36、48、60、72 h时,MN9D细胞存活率分别为(85.62±1.07)%、(71.92±0.43)%、(67.42±0.45)%、(60.04±0.11)%、(48.71±0.76)%、(40.63±0.86)%,与溶剂对照组比较,高剂量西玛津染毒组在染毒各时段细胞存活率均降低(P<0.01);各剂量组细胞存活率随染毒时间增大而下降,并具有剂量-反应关系(P<0.01)。结论除草剂西玛津对MN9D细胞有增殖毒性。