壳聚糖修饰左旋多巴纳米脂质体对异动症大鼠行为学及多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白32磷酸化水平的影响

背景:左旋多巴是目前治疗帕金森病最主要的药物,但是长期应用后大多数患者会出现异动症等难以控制的运动并发症。目的:观察左旋多巴与纳米脂质体诱发异动症大鼠模型的行为学特点和纹状体区多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白32蛋白磷酸化状态的改变。方法:建立6-羟多巴胺偏侧毁损致帕金森病大鼠模型,25只成功造模大鼠随机分为3组,帕金森病生理盐水组(n=5),一般左旋多巴组(n=10),壳聚糖修饰的左旋多巴纳米脂质体组(n=10),分别予以生理盐水、卡比多巴和左旋多巴、壳聚糖修饰的左旋多巴纳米脂质体治疗4周。结果与结论:在行为学观察中,异常不自主运动评分在脂质体组与一般左旋多巴组皆随治疗时间延长而升高,但脂质体组评分明显低于一般左旋多巴组(P<0.05);纹状体区多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白32的Thr-34位点磷酸化水平在一般左旋多巴组及脂质体组较对照组均明显升高(P<0.05),但脂质体组升高水平明显低于一般左旋多巴组(P<0.05)。提示壳聚糖修饰的左旋多巴纳米脂质体在防治帕金森病异动症方面可能有效。

DARPP-32磷酸化与止颤汤改善大鼠帕金森病运动并发症的研究

目的观察纹状体多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)(Thr34)磷酸化与止颤汤对大鼠帕金森病运动并发症的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射于大鼠脑部黑质造成帕金森病(PD)模型,进一步予以左旋多巴/苄丝肼腹腔注射制作异动症(LID)模型。实验设立正常组,LID模型组,LID西药组及小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组,并采用免疫组化法观察各组大鼠DARPP-32(Thr34)磷酸化的表达情况。结果免疫组化显示,假手术组DARPP-32(Thr34)磷酸化表达明显低于模型组(P<0.01)。中药小剂量组、中剂量组、大剂量组DARPP-32磷酸化表达与西药组表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组磷酸化与小剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论止颤汤可有效降低纹状体DARPP-32(Thr34)磷酸化的表达,可能是止颤汤治疗异动症的机制。

恩他卡朋对异动症大鼠行为学及其纹状体区DARPP-32磷酸化表达的影响

目的:研究左旋多巴/卡比多巴与左旋多巴/卡比多巴/恩他卡朋诱发异动症模型大鼠的行为学特点,以及纹状体区多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)磷酸化状态的改变。方法:成功建立的帕金森病模型大鼠29只随机分为4组:生理盐水组(NS)5只,左旋多巴/卡比多巴组(LC)8只,恩他卡朋等效剂量组(LCE)8只,恩他卡朋额外添加组(LCE+)8只。分别予以相应药物灌胃,共给药28 d。开始灌胃后的第1、4、8、12、16、20、24、27 d进行行为学观察。通过western blot检测纹状体区DARPP-32磷酸化水平。结果:LCE组AIM评分为(21.7±10.2)分,LC组AIM评分为(22.2±11.1)分,差异无统计学意义(P>0.05);且2组各时间点AIM评分差异无统计学意义(P>0.05)。LCE+组AIM评分为(28.6±14.9)分,高于LCE组和LC组(均P<0.05);自第8天起,LCE+组AIM评分开始高于LC组和LCE组(均P<0.05)。LCE组、LCE+组与LC组毁损侧DARPP-32磷酸化水平均高于各组健侧水平(均P<0.05);LCE+组毁损侧DARPP-32磷酸化水平高于NS组、LCE组和LC组毁损侧(均P<0.05),LCE组和LC组毁损侧DARPP-32磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在等效剂量水平下添加恩他卡朋作为左旋多巴添加治疗不会增加或减少异动症发生。

益智宁对注意缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠前额叶皮质DRD1-AC-cAMP-PKA-DARPP32信号通路的影响

目的:通过观察中药复方益智宁对注意缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠前额叶皮质中腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、多巴胺D1受体(dopamine receptor D1,DRD1)、多巴胺和环磷酸腺苷调节的磷酸化蛋白32(dopamine and cAMP regulated phosphoprotein of 32 kDa,DARPP32)的影响,探讨益智宁治疗ADHD的疗效机制。方法:将30只SHR大鼠随机分为益智宁组、生理盐水对照组、哌甲酯对照组,每组10只,益智宁组给予益智宁煎药液(14.4g·kg^-1),哌甲酯组给予哌甲酯(0.0015 g·kg^-1),生理盐水组给予生理盐水,每组均按12.5 mL/kg等容量灌胃给药。给药4周后,用ELISA法检测各组大鼠前额叶皮质组织中AC、cAMP的浓度,用RT-PCR和Western blot法检测大鼠前额叶皮质组织中PKA、DRD1、DARPP32的表达水平。结果:与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中的AC、cAMP含量均有显著升高(P<0.05);与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中PKA蛋白表达及mRNA表达显著升高(P<0.01),且益智宁组与哌甲酯组有显著差异(P<0.05);与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中DRD1、DARPP32蛋白表达及mRNA表达显著降低(P<0.01),且益智宁组与哌甲酯组有显著差异(P<0.05)。结论:益智宁组可能通过激活SHR大鼠前额叶皮质AC-cAMP-PKA的信号通路,并通过下调DRD1、DARPP32的水平,负反馈调节脑内多巴胺的含量,从而发挥疗效。

安神定志灵对ADHD模型大鼠前额叶、纹状体CDK5/DARPP32/PP1信号通路的影响

目的:探讨中药复方安神定志灵对注意缺陷多动障碍(ADHD)模型自发性高血压大鼠(SHR)前额叶、纹状体中细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)/32k Da多巴胺与环磷酸腺苷(c AMP)调节的磷蛋白(DARPP32)/蛋白磷酸酶1(PP1)信号通路的影响。方法:将50只SHR大鼠运用随机区组设计分为模型组、利他林组(2 mg·kg-1)、安神定志灵低、中、高剂量(6.7,13.4,26.7 g·kg-1)组,每组10只,另设10只Wistar京都大鼠为正常组。各组ig相应药物,每日2次,治疗4周后取大鼠脑组织。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot),免疫组织化学法及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠前额叶和纹状体中CDK5,调节蛋白35(p35),DARPP32,PP1和c AMP反应元件结合蛋白(CREB)蛋白和mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠前额叶、纹状体中CDK5,p35及CREB的蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),PP1和DARPP32的表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。经治疗后,与模型组比较,利他林组、安神定志灵各剂量组前额叶、纹状体中CDK5,p35,CREB蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),PP1和DARPP32的表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:SHR大鼠行为表现与CDK5/DARPP32/PP1信号通路密切相关,安神定志灵可以通过调控该信号通路中相关因子的表达发挥治疗作用。