细胞外α-突触核蛋白对MES23.5多巴胺能神经细胞的促增殖作用

目的研究细胞外α-突触核蛋白(-αsynuclein,-αSyn)对MES23.5多巴胺能神经细胞增殖的影响。方法细胞外施加重组人-αsyn,Western blot分析和免疫细胞化学染色观察-αSyn向细胞内的进入和分布,MTT测试神经细胞的增殖。结果Western blot和免疫细胞化学染色结果均显示,细胞外-αSyn可以进入MES23.5多巴胺神经细胞并促进其增殖,这种促进作用随剂量增加而增强。-αSyn单抗明显抑制-αSyn向细胞内转移,并阻断-αSyn促细胞增殖作用。结论细胞外-αSyn对多巴胺能神经细胞的增殖具有促进作用。

不同价态锰对多巴胺能神经细胞凋亡作用的影响

为探讨不同价态锰对细胞凋亡的影响 ,选用多巴胺能神经细胞 (SH SY5Y细胞 )作为锰神经毒作用的体外测试体系 ,研究二价锰 (Mn2 + )和三价锰 (Mn3+ )对SH SY5Y细胞凋亡的诱导作用以及对多巴胺 (DA)含量的影响。结果显示 :MTT法检测细胞损伤的程度 ,显示Mn2 + 和Mn3+ 呈时间和剂量依赖性的损伤SH SY5Y细胞 ;流式细胞技术证实Mn2 + 和Mn3+ (0 5～ 2mmol L)与SH SY5Y细胞接触 2 4～ 72h ,可诱导细胞发生凋亡 ,透射电镜技术发现凋亡细胞出现核染色体凝集。用高效液相色谱仪测定发现DA含量降低。说明锰所致神经细胞死亡方式是以凋亡为主 ;不同价态锰可引起细胞自身合成的DA含量下降 ,但Mn3+ 的毒作用高于Mn2 +

α-突触核蛋白功能片段向多巴胺能神经细胞内的转运及其对细胞增殖的影响

目的研究α-突触核蛋白(α-Syn)3个功能片段的促多巴胺能神经细胞增殖作用并且观察其亚细胞分布。方法原核表达重组人野生型α-Syn及其3个功能片段:N-末端、NAC片段和C-末端。向MES 23.5多巴胺能神经细胞的培养基中添加α-Syn及其3个功能片段,观察α-Syn全长及其3个功能片段对细胞的增殖的影响的生长曲线,用细胞免疫荧光检测α-Syn及其功能片段向细胞内的进入和分布。结果α-Syn全长及其NAC片段和C-末端均可促进细胞的增殖,但其N-末端片段对细胞增殖无影响。α-Syn及其3个功能片段均可以进入MES23.5多巴胺能神经细胞,3个功能片段在细胞内的亚细胞分布不同:α-Syn全长分子分布于胞质和胞核,但胞核中的含量多于胞质;N-末端片段主要分布于胞质和突起;NAC片段分布于胞质;C-末端片段主要分布于细胞核中。结论α-Syn对细胞增殖的促进作用与其NAC片段以及C-末端片段的氨基酸排列顺序有关。α-Syn及其功能片段均可进入多巴胺能神经细胞内,但其亚细胞分布不同。

熟地黄对6-羟基多巴胺诱导的多巴胺能神经细胞氧化应激的影响

目的分析熟地黄对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的多巴胺能神经细胞氧化应激的影响及机制。方法多巴胺能神经细胞SH-SY5Y分成对照组、6-OHDA组(6-OHDA处理)、熟地黄低剂量组(6-OHDA+120μmol/L熟地黄)、熟地黄中剂量组(6-OHDA+240μmol/L熟地黄)、熟地黄高剂量组(6-OHDA+480μmol/L熟地黄)、熟地黄高剂量+Anisomycin组(6-OHDA、p38MAPK信号激活剂Anisomycin和480μmol/L的熟地黄处理),Western印迹检测p-p38MAPK、Ki-67、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3蛋白表达,CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Cell ROX Green荧光探针法检测活性氧(ROS)水平,可见分光光度法检测丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量,比色法检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果与对照组比较,6-OHDA组多巴胺能神经细胞中p-p38MAPK/p38MAPK表达量升高,细胞增殖活性降低,凋亡率升高,Ki-67蛋白表达量降低,Bax、酶切Caspase-3蛋白表达量升高,SOD含量降低,ROS、MDA含量升高,培养液上清中LDH含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与6-OHDA组比较,熟地黄低、中、高剂量组多巴胺能神经细胞中p-p38MAPK/p38MAPK表达量逐渐降低,细胞增殖活性逐渐升高,凋亡率逐渐降低,Ki-67蛋白表达量逐渐升高,Bax、酶切Caspase-3蛋白表达量逐渐降低,SOD含量逐渐升高,ROS、MDA含量逐渐降低,培养液上清中LDH含量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与熟地黄高剂量组比较,熟地黄高剂量+Anisomycin组多巴胺能神经细胞中p-p38MAPK/p38MAPK表达量升高,细胞增殖活性降低,凋亡率升高,Ki-67蛋白表达量降低,Bax、酶切Caspase-3蛋白表达量升高,SOD含量降低,ROS、MDA含量升高,培养液上清中LDH含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论熟地黄通过抑制p38MAPK信号减轻6-OHDA诱导的多巴胺能神经细胞氧化应激,减少细胞凋亡。

抗坏血酸定向诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经细胞及其机理研究

神经干细胞(NSCs)是神经系统发生的始祖细胞,具有自我更新和多向分化潜能.NSCs的研究不仅对阐明神经系统发育有重要意义,对神经系统疾病的治疗也提出了新的思路.研究NSCs定向分化的诱导因素和机制对NSCs的应用具有重要意义.本实验在体外神经干细胞培养鉴定和扩增的基础上,观察了抗坏血酸(从)对NSCs定向诱导分化作用,并探讨了分化过程中相关基因表达的变化和可能的信号传递途径.结果表明AA诱导能明显促进多巴胺能神经细胞特异性酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运子(DAT)mRNA和蛋白表达;NSCs表达Ptx3和较弱的Nurr1,不表达TH,DAT和Shh;诱导后Ptx3表达无变化,Nurr1,Shh,TH和DAT表达增强.Erk阻断剂PD98059能阻断AA对Nurr1,TH,DAT mRNA的作用.提示Nurr1参与AA定向诱导,从可能通过Erk1/2信号转导途径起作用.研究为获得足够的治疗帕金森氏病的多巴胺能神经元提供了新的思路,并对AA定向诱导的机制进行了初步研究,对更好地发挥NSCs移植治疗帕金森氏病具有重要意义.

人神经黑色素过度激活小胶质细胞：多巴胺能神经细胞进行性变性的新机制

目的探讨小胶质细胞在中脑黑质致密带(SNpc)人神经黑色素(HNM)导致多巴胺(DA)能神经细胞变性中的作用和机制。方法(1)采用HNM处理中脑胶质细胞重组培养体系,检测DA能神经细胞摄取能力,探讨小胶质细胞对HNM损伤作用的影响。(2)采用小胶质细胞培养体系,通过免疫细胞化学染色、检测免疫炎性及神经毒性因子,从功能及形态上研究HNM对小胶质细胞的激活作用。结果(1)经5.0μg/mL HNM干预后10%、20%和30%小胶质细胞重组培养体系DA能神经细胞摄取能力分别为纯神经细胞培养体系(对照组)的58%、51%和35%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);40%、50%和60%星形胶质细胞重组培养体系中DA能神经细胞摄取能力分别为对照组的97%、92%和93%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)经5.0μg/mLHNM干预后中脑神经-胶质细胞混合培养体系中激活的小胶质细胞数为对照组的5.77倍(P<0.05),小胶质细胞体积明显增大,形状不规则,呈棒状和/或阿米巴样,胞浆深染。(3)经5.0μg/mLHNM干预后小胶质细胞产生大量的细胞内活性氧类物质、一氧化氮、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和前列腺素E2,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论HNM从功能及形态上激活小胶质细胞,促进了DA能神经细胞的进行性变性,为抑制小胶质细胞过度激活成为治疗PD的新靶点提供了一定理论依据。

丙炔苯丙胺对多巴胺能神经细胞的保护机制

目的探讨丙炔苯丙胺对多巴胺能神经细胞的保护机制。方法采用神经生长因子(NGF)将大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)诱导分化成多巴胺能神经元的细胞模型,经鱼藤酮处理后给予不同浓度的丙炔苯丙胺,观察细胞形态的改变,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性及代谢状态,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽((GSH)含量及蛋白酶体功能。结果与鱼藤酮组比较, 50μmol／L浓度的丙炔苯丙胺作用24 h后,细胞恢复活力,570 nm处光密度值为0．39±0．01。与未处理组比较,鱼藤酮组ROS水平显著升高(P<0．01),丙炔苯丙胺组较鱼藤酮组显著降低(P<0．01)。鱼藤酮组的GSH含量为(104.76±0．88)μmol／L,显著低于丙炔苯丙胺组的(130．21±0．84)μmol／L(P<0．01)。与未处理组比较,鱼藤酮组的细胞蛋白酶体活性明显降低(P<0．01),丙炔苯丙胺组蛋白酶体活性恢复。结论丙炔苯丙胺能够明显减少鱼藤酮诱导的PC12细胞死亡,其机制可能是抑制氧化应激及保护蛋白酶体。

磺酰罗丹明法检测多巴胺能神经细胞的条件

目的探讨磺酰罗丹明B法检测多巴胺能神经细胞的最佳条件。方法采用系列细胞密度梯度、选用多个波长、加用参考波长,以磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞系Mes23.5细胞数量和活性,分析细胞数量与检测波长及吸光度的关系。结果细胞数量与吸光度呈线性关系,最佳检测波长为540nm。结论磺酰罗丹明B法检测多巴胺能细胞结果可靠,是切实可行的该细胞定量分析和活性检测方法。

人神经黑色素选择性导致多巴胺能神经细胞进行性变性

目的探讨从中脑黑质致密带(SNpc)提取的人神经黑色素(HNM)对多巴胺(DA)能神经细胞的作用及机制。方法(1)5μg/mLHNM处理中脑神经-胶质细胞混合培养体系10d后,检测DA能神经细胞摄取能力、计数酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经细胞数、测量神经突起长度并观察细胞形态变化。(2)对比检测DA能与γ-氨基丁酸(GABA)能神经细胞的摄取能力,并计算此两种神经细胞摄取能力的差异;分别计数DA能神经细胞及全部神经细胞数并计算其差异。(3)检测神经-胶质细胞、纯神经细胞及神经-星形胶质细胞等3种培养体系中DA能神经细胞摄取能力。结果(1)5μg/mLHNM组的DA能神经细胞摄取能力、TH(+)神经细胞数和神经突起长度分别为HNM空白对照组(对照组)的36%、41%和40%,差异均具统计学意义(分别P<0.001,P<0.05,P<0.001);DA能神经细胞形态学发生明显变化。(2)DA能与GABA能神经细胞摄取能力的平均差异为28%(P<0.005);细胞处理第7、10天,两种细胞摄取能力的差异分别为26%和29%(P<0.05,P<0.01);DA能及全部神经细胞数的差异为33%(P<0.01)。(3)在上述3种培养体系中,5μg/mLHNM组DA能神经细胞摄取能力分别降低为对照组的49%、81%和83%,前两者差异具统计学意义(P<0.01)。结论(1)HNM可从功能与形态上损伤DA能神经细胞,且损伤具选择性;(2)小胶质细胞促进了HNM对DA能神经细胞的损伤作用。(3)HNM可能是PD发病的内源性因素之一,为其制造PD新模型提供了一定的理论依据。

MPTP对多巴胺能神经细胞凋亡的影响

本文就神经毒素 1_甲基_4_苯基_1 ,2 ,3,6_四氢吡啶 (MPTP)对多巴胺能神经细胞凋亡的影响进行综述 ,重点从MPTP损害细胞线粒体、促进细胞氧化应激、影响细胞信号转导、促进神经胶质细胞激活以及损害多巴胺转运体等方面介绍和总结了近年来在MPTP诱导多巴胺能神经细胞凋亡的机制尤其是细胞信号转导改变方面的研究进展 ;

介导GDNF促进DA能神经细胞存活与分化的信号路径的研究

胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)可以通过跨膜的酪氨酸蛋白激酶受体RET激活细胞内两条信号通路,即磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路和Ras/Raf/MEK/Erk信号通路。为探讨在GDNF促进中脑多巴胺(DA)能神经细胞存活和分化过程中,上述两条信号通路所发挥的作用,本研究在建立GDNF促进中脑DA能神经细胞存活和分化的细胞培养模型的基础上,以PI3K信号通路中PI3K的特异性抑制剂Wortmannin和Ras/Raf/MEK/Erk信号通路中MEK的特异性抑制剂PD98059分别阻断上述两条信号通路;结合免疫细胞化学染色技术,以DA合成的限速酶酪氨酸羟化酶(TH)的染色情况为指标来观察上述两条信号通路对DA能神经细胞存活和分化的影响。结果显示,Wortmannin可以阻断GDNF促进TH阳性神经细胞数目及其突起增加的作用;而PD98059对GDNF的生物学效应没有影响。结果提示PI3K而非Ras/Raf/MEK/Erk信号通路介导了GDNF对中脑DA能神经细胞存活和分化的促进作用。

MN9D多巴胺能细胞损伤模型的建立

目的建立离体多巴胺(dopamin,DA)能神经细胞系MN9D细胞损伤模型。方法离体细胞培养条件下,于培养液中加入不同浓度6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)作用于MN9D细胞30 min。24 h后,MTT比色法检测MN9D细胞的存活率、Hoechst 33258核染色和流式细胞仪检测MN9D细胞的凋亡变化。结果6-OHDA以浓度依赖性的方式引起MN9D细胞的凋亡,导致细胞存活率降低。200μmol/L浓度的6-OH-DA作用30 min、培养24 h后,MN9D细胞的存活率降低至68.8%左右,凋亡率增高至约37.8%。结论6-OH-DA能够引起MN9D细胞的存活率降低,而凋亡率增高,产生类似帕金森病时的DA能神经细胞损伤的表现。

纳米二氧化钛暴露的神经毒性作用及机制

以多巴胺能神经细胞SH-SY5Y和PC12为实验模型,深入探讨了不同晶型(锐钛矿型、金红石型、混合型)和不同粒径(25,50,100nm)的纳米二氧化钛(TiO_(2)-NPs)暴露对多巴胺能神经细胞的毒性影响及机制.结果表明,金红石型TiO_(2)-NPs暴露具有更强的毒性作用,其次是混合型和锐钛矿型.此外,粒径较小的TiO_(2)-NPs对神经细胞的毒性更显著,特别是25nm粒径的TiO_(2)-NPs,其神经毒性作用与诱导活性氧自由基生成和细胞凋亡相关.蛋白免疫印迹法发现,TiO_(2)-NPs能上调Bax和细胞色素C的水平,下调Bcl-2的表达,同时激活Caspase-3,表明TiO_(2)-NPs通过影响线粒体凋亡途径相关蛋白的表达诱导多巴胺能神经细胞凋亡.

神经干细胞体外扩增和诱导分化为多巴胺能神经细胞

神经干细胞(neural stem cell, NSC)是神经系统发生的始祖细胞, 具有自我更新和多向分化潜能. NSC的研究不仅对阐明神经系统发育有重要意义, 对神经系统疾病的治疗也提出了新的思路. 在体外对NSC进行培养鉴定和扩增, 细胞巢蛋白表达阳性, 具有多向分化能力; 体外传代培养15代后, 细胞数量增加约2.4(±0.4)×104倍; 在无血清培养体系中诱导NSC分化为多巴胺能神经细胞, 结果表明, 抗坏血酸(ascorbic acid, AA)能明显提高NSC定向分化为多巴胺能神经细胞的比例(由对照的(0.7±0.3)%升高到AA 100 mmol/L时的(17.2±2.3)%, P < 0.01). 这为获得足够的治疗帕金森疾病(PD)的多巴胺能神经元提供了新的思路, 对更好地利用NSC移植治疗PD有重要意义.

多巴胺能神经细胞慢性损伤过程中RET的表达变化

目的:为了检测RET在多巴胺能神经细胞损伤过程中中脑黑质部位的表达变化,并探索其在多巴胺能神经细胞损伤中的可能作用。方法:本实验将C57BL/6小鼠分为三组:MPTP组、NS组和空白对照组,采用MPTP腹腔注射建立小鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞慢性损伤模型,设立第一周到第六周六个时间点(1w-6w),检测小鼠行为学变化,并采用免疫荧光染色和western blotting等方法检测中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和RET的表达情况。结果:行为学结果显示,随给药次数及时间延长,悬挂实验中,MPTP组悬挂评分逐渐下降,MPTP组第三周给药以后与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05);跳台实验中,小鼠受电击后跳上跳台的时间逐渐延长,错误次数逐渐增多。免疫荧光双标结果显示,在检测的各时间点,在小鼠中脑黑质一直有RET阳性细胞存在,且与TH阳性细胞共表达;western blotting结果显示,TH在给予MPTP后第三周表达开始降低,RET在给予MPTP后第一周和第二周持续高表达,并且也从第三周开始,其表达量明显降低。结论:这种表达变化提示RET的表达与多巴胺能神经细胞损伤有关。

多巴胺能神经细胞损伤过程中NCAM-140的表达变化

目的:检测NCAM-140在多巴胺能神经细胞损伤过程中中脑黑质部位的表达变化,探索其在多巴胺能神经细胞损伤中的可能作用。方法:采用MPTP腹腔注射建立小鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞慢性损伤模型,采用免疫荧光染色和western blotting检测中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和NCAM-140的表达情况。结果:在小鼠中脑黑质一直有NCAM-140阳性细胞存在,且与TH阳性细胞共表达;TH在给予MPTP后第三周表达开始降低,NCAM-140在给予MPTP后第一周至第三周持续高表达,并且从第四周开始,其表达量明显降低。结论:NCAM-140的表达与多巴胺能神经细胞损伤有关。

酪氨酸激酶受体和神经细胞黏附分子对老年大鼠黑质致密部多巴胺能神经细胞的影响

胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF）能有效地保护中脑黑质多巴胺能神经细胞，是迄今所发现的对多巴胺能神经细胞作用最强的神经营养因子。其对多巴胺能神经细胞的营养作用需要通过膜受体-GDNF家族受体α1（GDNF family receptor α1,GFRα1），跨膜传递信息的信号转导受体一酪氨酸激酶受体（receptor tyrosine kinase，RET）和神经细胞黏附分子（neuronal cell adhesion molecule，NCAM）。

AP-1蛋白c-Jun与Fral形成二聚体促进类多巴能神经细胞SH-SY5Y存活

目的探讨激活蛋白-1（he-1）c-Jun与Fral对类多巴胺能神经细胞存活能力的影响。方法（1）体外培养SH-SY5Y细胞，裂解后进行免疫共沉淀实验，检测c-Jun是否与Fral形成二聚体。（2）将细胞分为4组，分别为对照组[加入二甲基亚砜（DMSO）]、SP600125组、U0126组及SP600125＋U0126组[分别加入c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125、MEK1／2抑制剂U0126及SP600125＋U0126]。免疫印迹法检测c-Jun或Fral表达，MTT法检测细胞活力。（3）用滴度为100MOI腺病毒（Ad）感染细胞，共分为4组，分别为对照组（转染绿色荧光蛋白）、Ad-c-Jun组、Ad-Fral组、Ad-c-Jun＋Ad-Fral组（后3组分别转染相应Ad），免疫荧光染色检测感染率，MTT法检测细胞活力。结果（11免疫共沉淀结果显示c-Jun和Fral形成二聚体。（2）免疫印迹结果显示SP600125组c-Jun表达减少，U0126组Fral表达减少。MTT结果显示，4组细胞活力差异有统计学意义（F=16．647。P=0．ooo）。其中对照组与SP600125组、U0126组及SP600125＋U0126组差异有统计学意义B0．05）。（3）过表达c-Jun、Fral后，4组细胞活力差异有统计学意义（F=14．543，P=0．000），其中对照组与Ad-c-Jun组差异无统计学意义（P〉0．05），对照组与Ad-Fral组差异有统计学意义（P〈0．05），Ad-Fral组与Ad-c-Jun＋Ad-Fral组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论c-Jun与Fral形成二聚体促进类多巴胺能神经细胞存活。

绞股蓝皂苷对原代培养胚鼠中脑多巴胺能神经细胞的保护作用

目的探讨绞股蓝皂苷（GPs）对原代培养的胚鼠中脑多巴胺（DA）能神经细胞的保护作用。方法原代培养胎鼠中脑腹侧神经细胞，分别应用100、200、400、800μg／mL GPs作用6h、12h、24h、48h、72h、96h，同时设空白对照组和阳性对照m6F）组，应用MTT比色试验检测GPs对细胞活性的影响，筛选GPs的最佳作用浓度和时间。免疫细胞化学染色检测抗酪氨酸羟化酶（TH）的表达；应用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）诱导细胞损伤，同时设空白对照组和Gps预处理组．应用免疫细胞化学染色和流式细胞仪分别检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达和细胞凋亡。结果MTT检测结果显示400μg／mLGPs作用48h后细胞活性最高，与NGF组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。TH免疫染色显示400μg／mL GPs组和NGF组TH阳性细胞数均高于空白对照组．差异有统计学意义（P〈0．05）；iNOS免疫染色和流式细胞仪检测显示400μg/mL GPs预处理组iNOS阳性细胞数和细胞凋亡率高于空白对照组．但仍低于MPTP组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论400μg／mL GPs作用48h对MPTP诱导的DA能神经细胞的损伤具有保护作用。

帕金森病和帕金森综合征是一回事吗?

问：我因肌肉震颤、动作不协调就医，大夫怀疑我患的是“帕金森综合征”，我查阅了一些医学类书，上面有的说帕金森病，有的说帕金森练合征，把我给弄糊涂了。请问两者是不是一回事？ 答：帕金森病即震颤麻痹，是一种不明原因导致多巴胺神经细胞不断死亡、多巴胺功能下降而引起的疾病．中老年人多见。