多形外膜蛋白与沙眼衣原体泌尿生殖道感染的相关性研究

目的探讨多形外膜蛋白(Pmp)与沙眼衣原体泌尿生殖道感染的相关性。方法选取84例沙眼衣原体泌尿生殖道感染患者作为感染组,同期健康体检者40例为对照组,以Western-blot法检测两组对象血清Pmp蛋白抗体。结果感染组有78例检测出Pmp蛋白抗体阳性,阳性率为92.86%,对照组有6例检测出Pmp蛋白抗体阳性,阳性率为15.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);感染组Pmp蛋白抗体种类从A^I均有分布,其中阳性率PmpB-Ab最高,PmpD-Ab最低,对照组检出PmpA-Ab、PmpB-Ab、PmpF-Ab、PmpG-Ab,阳性率普遍低。感染组患者治疗3个月后再次检测沙眼衣原体原体(EB)抗体28例仍然为阳性,56例转阴,比较持续感染患者与转阴患者Pmp蛋白抗体检测结果,PmpA^I 9种类型均有分布,各类型阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论沙眼支原体泌尿生殖道感染患者体内血清均存在Pmp蛋白抗体,不同种类间免疫原性有一定差异,Pmp蛋白抗体的免疫保护能力有限。

D型沙眼衣原体多形外膜蛋白I的分段克隆表达及其免疫原性分析

目的获得D型沙眼衣原体多形外膜蛋白（Pmp）I的全长（PmpI—FL）和羧基端蛋白（PmpI—C），并鉴定蛋白免疫原性。方法用PCR扩增目的基因PmpI—FL和PmpI—C，分别将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中，连接产物转化人大肠埃希菌DH5a，提取质粒进行酶切、PCR、测序鉴定。再将重组质粒分别转化人大肠埃希菌BL21并诱导表达，考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶（GST）磁珠分别纯化PmpI—FL—GST融合蛋白和PmpI-C-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白分别免疫BALB／c小鼠，ELISA测定抗体效价。结果克隆目的基因PmpI—FL和PmpI—C的长度分别为2659和1195bp，序列均与基因库中一致，考马斯亮蓝染色和免疫印迹显示目的蛋白相对分子质量分别约为122000和69000；并得到纯化的蛋白。免疫小鼠所得血清经ELISA检测多克隆抗体效价达1：12800（抗PmpI-FL）和1：6400（抗PmpI-C）。结论成功表达具有强免疫原性的PmpI-FL-GST和PmpI-C—GST两种融合蛋白，为进一步研究其功能奠定基础。

沙眼衣原体多形外膜蛋白PmpI的原核表达、纯化、抗体制备及鉴定

目的：克隆、表达沙眼衣原体多形外膜蛋白I（PmpI）基因，并进行免疫原性鉴定，分析其生物学特征。方法用生物信息软件分析沙眼衣原体多形外膜蛋白PmpI的基因序列并预测PmpI蛋白的B细胞抗原表位。以D型沙眼衣原体DNA为模板，PCR扩增PmpI基因N端90~1464碱基序列，构建原核载体进行诱导表达。Ni离子亲合层析柱纯化重组蛋白，制备PmpI多克隆抗体并用Western印迹法检测其免疫原性。结果对蛋白质的二级结构和柔性区、氨基酸的亲水性、抗原指数和表面可及性预测结果综合分析，推测该蛋白含有8个优势B细胞表位。PCR扩增D型沙眼衣原体PmpI基因核苷酸序列长度为1375 bp。成功构建pET28a-PmpI原核表达重组体，经诱导表达、亲和层析纯化后获得了相对分子质量为50000的重组蛋白并制备其多克隆抗体。结论成功克隆并表达了D型沙眼衣原体多形外膜蛋白N-PmpI，为研究该蛋白的生物学功能奠定了一定基础。

沙眼衣原体pmp基因及Pmp蛋白的研究进展

多形外膜蛋白家族是衣原体科独有的蛋白，沙眼衣原体的9种多形外膜蛋白（PmpA—PmpI）由多形外膜多基因家族所编码。近年来，对于多形外膜基因家族的研究取得了许多进展，主要介绍编码多形外膜蛋白的多形外膜基因在分型中的意义、组织嗜性的关系以及该基因作为检测沙眼衣原体感染的生物标志物方面的进展，介绍基本特征、自我转运功能与感染症状的相关性和免疫功能方面的研究进展。