多形性胶质瘤母细胞瘤患者血清中miR-155、miR-365和BDNF的表达及意义

目的探讨多形性胶质瘤母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)患者血清中miR-155、miR-365和脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor,BDNF)的表达及其相关性。方法运用荧光素报告载体系统检测miR-155和miR-365直接调控的靶基因BDNF。并收集54例GBM患者和12例Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤患者的术前外周血标本,以20例健康志愿者的外周血标本作为对照,应用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验技术分别检测GBM和Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤患者血清中miR-155、miR-365和BDNF的表达水平,分析miR-155、miR-365与BDNF的相关性。结果 BDNF是miR-155和miR-365直接调控的靶基因,miR-155或miR-365均可下调BDNF蛋白的表达;GBM患者血清中miR-155与miR-365的表达水平分别为6.59±1.22、6.96±1.43,两者分别与健康志愿者(1.19±0.24、1.07±0.16)比较,差异均有统计学意义(P<0.01);Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤患者血清中miR-155与miR-365的表达水平分别为1.35±0.41、1.29±0.39,两者分别与健康志愿者比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。GBM患者血清中的BDNF表达水平为(5.52±1.23)ng/mL,与健康志愿者[(12.55±2.11)ng/mL]比较,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤患者BDNF表达水平为(11.83±3.43)ng/mL,与健康志愿者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析发现,miR-155与miR-365的表达呈正相关(rs=0.875,P<0.01),miR-155、miR-365的表达均与BDNF呈负相关(rs=-0.819,rs=-0.774,P<0.01)。结论 miR-155、miR-365和BDNF三者表达与GBM的发生发展密切相关,其有可能成为判断GBM疗效及预后的潜在生物学指标。

血清标志物联合miRNA-let-7对胶质母细胞瘤化疗效果及预后的评估价值

目的分析miRNA-let-7联合血清标志物对多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者化疗效果和预后的预测效果。方法收集25例GBM患者临床资料。纳入同期20名健康志愿者作为对照组。收集患者空腹血清样本,通过实时定量PCR分析血清样本中let-7b、let-7d以及let-7e水平。结果与对照组相比,GBM组患者外周血中let-7b(192.50±18.71 vs.98.13±11.68,t=6.42,P<0.0001)、let-7d(82.97±14.14 vs.44.62±6.83,t=2.41,P<0.05)以及let-7e(139.60±14.62 vs.75.86±9.72,t=5.45,P<0.001)水平显著降低。let-7b、let-7e水平在≥60岁、肿瘤大小≥5 cm、非额颞叶病变、ECOG为2、仅接受活检的GBM患者中显著降低(P<0.05)。此外,Let-7b、Let-7e水平在不同治疗反应的GBM患者中差异有统计学意义(P<0.05)。let-7b和let-7e高表达GBM患者的OS显著高于let-7b和let-7e低表达患者(P<0.05)。结论血液样品中的let-7b、let-7e表达可用于监测GBM、预测患者对治疗的反应和预后。

多形性胶质母细胞瘤相关基因和候选通路的生物信息学分析

目的:采用生物信息学方法分析与多形性胶质母细胞瘤(GBM)发生发展相关的关键基因和候选通路,探讨GBM的发病机制和治疗靶点。方法:自癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达综合(GEO)数据库获得基因表达数据集TCGA-GBM及GSE7696,分别采用Deseq2和limma R数据包筛选GBM组织与癌旁正常组织中的差异表达基因(DEGs),并对DEGs进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,采用STRING数据库进行蛋白-蛋白互作(PPI)网络分析,采用Cytoscape 3.9.1软件对PPI网络进行可视化并进行模块分析。结果:对TCGA-GBM转录数据和芯片数据集GSE7696进行DEGs分析后共获取13个共同上调差异表达基因(UDEGs)和77个共同下调差异表达基因(DDEGs)。GO功能富集分析,DDEGs主要富集于氯离子通道活性、γ-氨基丁酸(GABA)受体活性、GABA门控氯离子通道活性、GABA-A受体活性、顺行突触传递信号和化学突触传递等生物学过程;KEGG信号通路主要富集于GABA能突触、神经活性配体-受体相互作用、含血清素的神经突触和突触囊泡循环等信号通路。PPI和模块构建确定了2个重要的基因模块。Cytoscape 3.9.1软件分析,PPI网络中溶质载体家族17成员6 (SLC17A6)、溶质载体家族1成员2 (SLC1A2)、前速激肽前体1 (TAC1)、突触结合蛋白1 (SYT1)、RNA结合蛋白fox1同源物3 (RBFOX3)和γ-氨基丁酸A型受体亚基γ2 (GABRG2)被筛选为关键基因。结论:SLC17A6、SLC1A2、TAC1、SYT1、RBFOX3和GABRG2基因可能参与了GBM的发生发展,GABA能突触传递相关基因与通路调控网络的失调可能是GBM发病的主要机制。

替莫唑胺治疗多形性胶质母细胞瘤及间变性星形细胞瘤的快速卫生技术评估

目的:基于快速卫生技术评估(HTA)方法,评价替莫唑胺(TMZ)的有效性、安全性和经济性,为临床决策提供循证依据。方法:系统检索PubMed、Embase、the Cochrane Library、中国知网、万方数据库和HTA相关网站及数据库,纳入TMZ治疗多形性胶质母细胞瘤(GBM)及间变性星形细胞瘤(AA)的HTA报告、Meta分析/系统评价及药物经济学研究。检索时间均为建库至2021年7月20日。由2名评价者独立筛选文献、提取数据、评价文献质量、交叉汇总核对,最终对结果进行定性分析与描述。结果:共纳入0篇HTA报告、17篇Meta分析/系统评价和6篇经济学评价。(1)有效性方面,在治疗新诊断GBM和AA中,13项研究结果显示,与单纯放疗比较,TMZ联合/不联合放疗方案更具优势,能够显延长总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)等;4项研究比较了TMZ单药与单纯放疗方案的有效性,其中1项研究结果显示TMZ在延长OS方面比放疗有优势,其余3项研究结果显示两者效果相当,研究结论并不完全统一,需要进一步论证。1项研究结果显示,新诊断GBM使用西仑吉肽方案、贝伐珠单抗联合伊立替康方案结合/不结合TMZ联合放疗方案,在提高生存率方面均优于TMZ联合放疗方案。另1项研究结果显示,新诊断GBM使用贝伐珠单抗联合TMZ或伊立替康治疗相较于TMZ单药治疗可显著提高6个月无进展生存率和延长中位PFS,复发性GBM使用贝伐珠单抗与伊立替康联合治疗相较于TMZ单药和贝伐珠单抗联合TMZ治疗可显著提高6个月无进展生存率。(2)安全性方面,TMZ可能增加患者血液毒性反应,但3—4级严重的血液毒性反应极少发生,大部分患者(包括老年患者)仍然耐受TMZ治疗。(3)经济性方面,2项来自我国的经济性研究结果显示,TMZ联合放疗相较于单独放疗不具有经济性。2项来自其他国家的经济性研究结果显示,TMZ联合放疗相较于单独放疗更有经济性。另2项经济性研究结果显示,与丙卡巴肼、洛莫司汀和长春新碱联合治疗方案及TMZ联合贝伐珠单抗治疗方案相比,TMZ治疗方案更具经济性。结论:GBM和AA使用TMZ联合放疗较单纯放疗具有良好的有效性,TMZ单药治疗与单纯放疗的有效性结论不统一,需要进一步论证;TMZ具有可接受的安全性;经济性结论不完全统一,受区域影响较大,需要进一步论证。

重楼皂苷D激活Hippo通路抑制多形性胶质母细胞瘤细胞增殖与侵袭

目的探讨重楼皂苷D(polyphyllin D,PPD)抑制多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)恶性生物学行为的分子机制。方法使用的细胞模型为DBTRG-05MG(DBTRG)和A172细胞株。将PPD处理后的细胞,通过MTT实验、实时无标记细胞分析技术(real-time cellular analysis,RTCA)和集落形成实验检测PPD对细胞存活能力的影响;流式细胞术、DAPI染色、Westernblot检测PPD对细胞凋亡的影响;Transwell细胞侵袭实验和RTCA测定PPD对细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验和高内涵成像分析系统测定PPD对细胞迁移能力的影响;Westernblot测定PPD所导致的Hippo信号通路相关蛋白质的表达以及蛋白质的磷酸化水平的变化;通过Caspase-3抑制剂(Z-DEVDFMK,Z-DEVD)与PPD共处理明确Caspase-3对MST1的激活作用;利用分子对接研究PPD与Caspase-3在三维空间的相互作用;通过靶点稳定性药物亲和反应实验明确PPD与Caspase-3的直接结合。结果PPD对GBM细胞的增殖具有显著的抑制能力。PPD能够诱导GBM细胞发生凋亡。PPD处理组的GBM细胞侵袭、迁移能力显著下降。PPD能够下调YAP蛋白及其下游靶基因Cyr61、c-Myc的转录,促进YAP上游信号分子LATS1、MST1的磷酸化,表明PPD能够激活GBM细胞中的Hippo信号通路。Z-DEVD能够拮抗PPD对MST1的磷酸化,表明PPD通过激活Caspase-3进而激活Hippo信号通路。分子对接模拟发现PPD能够在C-末端区域与Caspase-3结合;基于靶点稳定性的药物亲和反应实验表明PPD阻碍了蛋白酶pronase对Caspase-3的水解作用,表明PPD与Caspase-3具有直接结合作用。结论PPD通过靶向Caspase-3激活Hippo信号通路抑制GBM细胞增殖、侵袭和迁移并诱导凋亡。

RCOR3基因在多形性胶质母细胞瘤中的表达和预后

目的利用生物信息学分析方法研究RCOR3基因在多形性胶质母细胞瘤中表达和预后情况。方法采集多组基因芯片数据库数据,包括UALCAN-OMICS、GEPIA、HPA、TIMER和STRING数据库中RCOR3基因与多形性胶质母细胞瘤基因芯片数据,进行表达和预后分析。结果GEO数据库中采集GSE13276数据集,共鉴定出300个差异表达基因,其中高表达172个,低表达128个,RCOR3基因在多形性胶质母细胞瘤中呈低表达。GO富集通路为染色质组装、白细胞介素-4和白细胞介素13信号通路等;KEGG富集通路为丝裂原活化蛋白激酶等。RCOR3基因与肿瘤免疫检查点基因MLH1、PVR、LAG3呈正相关,与CD40呈负相关。RCOR3基因启动子甲基化水平明显低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05),并与多形性胶质母细胞瘤分期、IDH突变、1p/19q缺失、平均年龄和预后相关。结论RCOR3低表达与多形性胶质母细胞瘤形成具有相关性,患者总生存周期和无病生存周期明显缩短。

基于随机森林算法及人工神经网络的多形性胶质母细胞瘤诊断模型的构建

目的 基于随机森林算法及人工神经网络(ANN)构建多形性胶质母细胞瘤(GBM)的诊断模型。方法 从GEO数据库中下载GSE4290、GSE50161数据集作为训练集,下载GSE66354、GSE11650、GSE15824数据集作为验证集。使用R语言4.2.1软件筛选训练集中GBM脑组织样本及正常脑组织样本之间的差异表达基因(DEGs)。使用Metascape在线工具对DEGs进行聚类分析,使用R语言4.2.1软件对DEGs进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。基于DEGs应用随机森林算法筛选关键基因,再以关键基因构建诊断GBM的ANN模型。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分别利用训练集和验证集对ANN模型进行内部和外部验证。结果 共筛选出461个DEGs。聚类分析结果显示,DEGs主要富集于跨突触信号、神经元系统、调节化学突触传递等;GO功能富集分析结果显示,DEGs主要参与的生物过程包括调节跨突触信号、转运神经递质等,富集的细胞组分主要包括谷氨酸能突触、离子通道复合物等,主要涉及的分子功能包括γ-氨基丁酸(GABA)-A受体活性、GABA-门控氯离子通道活性等;KEGG通路富集分析结果显示,DEGs主要富集在调节化学突触传递、调节跨突触信号、运输神经递质等信号通路。筛选出6个关键基因,即KIAA0101、DnaJ(Hsp40)同源物亚家族C成员6(DNAJC6)、凝血因子Ⅱ凝血酶受体(F2R)、富含亮氨酸重复及免疫球蛋白结构域蛋白2(LINGO2)、微小染色体维持蛋白2(MCM2)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)。基于上述6个关键基因构建的ANN模型诊断GBM的曲线下面积为0.952~1.000。结论 与GBM相关的关键DEGs有6个,分别为KIAA0101、DNAJC6、F2R、LINGO2、MCM2、CRH,基于这些基因构建的ANN模型对GBM具有较高的诊断效能。

CDK1在多形性胶质母细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的现代学者通过多种方法进行研究发现,细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent protein kinase 1,CDK1)在当今已知的多种肿瘤组织中呈现出高表达现象,而且还可能与肿瘤发展密切相关。但如今对于CDK1基因在多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)中的作用尚不明晰。所以,研究主要是对CDK1基因在多形性胶质母细胞瘤的增殖调节中起到的影响进行初步探讨。方法从GEPIA在线数据库与proteinatlas在线数据库中提取了CDK1在各种肿瘤中的表达。选取2019年8月至2021年9月期间赤峰学院附属医院收治的54例多形性胶质母细胞瘤患者,记录年龄、性别、部位、复发和IDH1变异等情况后进行相关性分析,并通过免疫组化染色比较CDK1在多形性胶质母细胞瘤和癌旁正常组织中的表达水平,并观察其差异,进而得出结论。结果通过上述2个数据库中的资料发现,与正常组织相比,多形性胶质母细胞瘤中CDK1基因的表达水平上调。多形性胶质母细胞瘤临床病理特征中和复发有关(P=0.016),和年龄、性别、部位和IDH1变异情况无关。通过进一步的试验而发现,病理切片组织的免疫组织化学染色法(immunohistochemistry,IHC)表明在癌组织中的CDK1表达呈高水平。结论试验的结果表明,GBM的异常增殖与细胞周期蛋白依赖性激酶1的高表达相一致。它们的表达与多形性胶质母细胞瘤的病理性增殖有关,而且多形性胶质母细胞瘤临床病理特征中和复发有关,和年龄、性别、部位和IDH1变异情况无关。所以,CDK1可能是未来的一种治疗靶点,可为其治疗提供一种新的策略。

内质网应激通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导多形性胶质母细胞瘤干细胞凋亡的机制

【目的】探索内质网应激(ER stress)通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路诱导多形性胶质母细胞瘤肿瘤干细胞(GSC)凋亡的机制。【方法】临床获取多形性胶质母细胞瘤肿瘤组织标本,剪碎、胰酶消化、过滤、去除红细胞后,培养GSC;免疫荧光技术检测GSC抗原CD133、GFAP、Nestin、A2B5的表达;caspase3/7细胞凋亡检测试剂盒检测衣霉素(Tun)和毒胡萝卜素(Thap)对GSC的凋亡作用及MTS法检测细胞增殖活性;同时Western blot分析凋亡蛋白caspase3,ER stress标志蛋白C/EBP同源性蛋白(CHOP)及PI3K/AKT/m TOR信号通路标志蛋白AKT、m TOR表达水平;使用si RNA沉默CHOP基因后,检测上述蛋白表达水平变化。【结果】1周后肿瘤干细胞球形成,并可以表达CD133、GFAP、Nestin、A2B5等GSC抗原。ER stress激活后,可诱导GSC凋亡及降低细胞增殖活性,CHOP表达上调而p-m TOR、p-AKT(Ser473)、p-AKT(Thr308)表达下调;相反,沉默CHOP基因后,ER stress被抑制,上述效应减弱。【结论】ER stress可能通过负性调节PI3K/AKT/m TOR信号通路诱导GSC凋亡。

CD44在脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤及脑转移瘤中的表达

目的 研究 CD44粘附分子在脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤和脑转移瘤中的表达及其在瘤细胞转移、侵袭中的作用 .方法 采用免疫组化 SABC法检测脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤和脑转移瘤各 2 0例及 10例正常脑组织中 CD44 s,CD44 v3,CD44 v6和 CD44 v3- 10的表达 .结果 1CD44 s在脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤和脑转移瘤中的表达率分别为15 % ,10 0 %和 90 % ,其表达在前两者间有显著性差异 (P<0 .0 1) ;2 CD44 v3,CD44 v6和 CD44 v3- 10在脑膜瘤和多形性胶质母细胞瘤中无阳性表达 ,在脑转移瘤中表达率分别为40 % ,5 0 %和 75 % (P<0 .0 1) ;3CD44 s,CD44 v3,CD44 v6和CD44 v3- 10在正常脑组织中均无阳性表达 .结论 1CD44 s蛋白可能在多形性胶质母细胞瘤的脑内侵袭过程中起重要作用 ;2 CD44 v蛋白可能在部分脑转移瘤向颅内转移的过程中起作用 。

MiR-128-3p靶向抑制HOXA5调控多形性胶质母细胞瘤的增殖、侵袭与凋亡

目的探索HOXA5在胶质母细胞瘤(GBM)中高表达的原因及miR-128-3p调控胶质母细胞瘤进展的分子机制。方法通过慢病毒转染上调或下调U87细胞中miR-128-3p的表达水平,再利用蛋白质免疫印迹法检测HOXA5的表达水平的变化来探索miR-128-3p与HOXA5在GBM中表达的相关性。利用双荧光素报告基因实验验证miR-128-3p对HOXA5的靶向抑制关系。利用miR-128-3p与HOXA5过表达的质粒转染U87细胞进行拯救实验,通过CCK-8、Transwell、流式细胞学分析与裸鼠体内实验验证miR-128-3p调控GBM增殖、侵袭及凋亡方面的分子机制。结果上调U87细胞中miR-128-3p表达后HOXA5的表达水平显著下降,下调U87细胞中miR-128-3p表达后HOXA5表达水平明显升高(P<0.05),两者表达呈显著负相关。miR-128-3p可靶向结合HOXA5基因的3’UTR区并抑制HOXA5表达。miR-128-3p+Control组U87细胞增殖、侵袭及抗凋亡能力显著下降。结论miR-128-3p可通过靶向抑制HOXA5负向调控GBM细胞的增殖、侵袭及抗凋亡能力,HOXA5在GBM中呈高表达与miR-128-3p表达水平降低有关。

颅内多发多形性胶质母细胞瘤3例报告

目的探讨颅内多发多形性胶质母细胞瘤的临床特点。方法对3例多发多形性胶质母细胞瘤病人行手术治疗,术后给予放疗等辅助治疗,结合文献分析其影像学特点,总结临床经验。结果多发多形性胶质母细胞瘤临床特点为:病程短,病情进展迅速,容易误诊。CT上常表现为脑实质内多发病灶,形态不规则,边界不清,伴有程度不一的瘤周水肿和占位效应。MRI检查示病灶T1W像上呈低信号,T2W为高信号,边界不清,但在肿瘤增殖旺盛处,T1W为高信号,T2W为低信号。结论术前对该病作出正确诊断,有助于治疗方案的设计及治疗效果的评估。

基于中性粒细胞-淋巴细胞比值与血清C反应蛋白-清蛋白比值的累积评分在胶质母细胞瘤患者中的预后意义

目的探讨联合中性粒细胞-淋巴细胞比值(NLR)与血清C反应蛋白-清蛋白比值(CAR)在多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者中的预后潜力。方法回顾性分析2015年1月至2020年1月于该院诊断并接受系统治疗的123例成年GBM患者的临床病理资料与实验室检查数据,通过受试者工作特征曲线确定NLR与CAR的最佳截断值,曲线下面积(AUC)评价两种炎症-免疫标志物的对患者总生存率的预测价值。Kaplan-Meier生存分析评估NLR、CAR及NLR-CAR评分与GBM患者预后的关系。采用Cox比例风险回归分析确定具有独立预后意义的临床变量并构建预测GBM患者总生存率的列线图模型。通过一致性指数和校准曲线评价模型的预测能力。结果CAR的最佳截断值为0.06,AUC为0.710(95%CI:0.619~0.802),而NLR的最佳截断值为2.23,AUC值为0.696(95%CI:0.596~0.796)。生存分析表明治疗前高CAR(χ^(2)=7.964,P=0.005)与高NLR(χ^(2)=15.625,P<0.001)均与GBM患者不良预后有关。基于CAR和NLR的最佳截断值构建累积评分系统,0、1和2分患者的中位总生存期分别为43.6个月(95%CI:26.5~60.9)、24.4个月(95%CI:11.2~37.6)和10.0个月(95%CI:7.4~12.6),评分越高,患者预后越差(2分vs.0分:χ^(2)=22.557,P<0.001;2分vs.1分:χ^(2)=6.816,P=0.009;1分vs.0分:χ^(2)=9.964,P=0.002)。单、多变量Cox回归分析证实,全切除与高CAR-NLR评分是GBM患者死亡的独立风险因子,而辅助放疗和IDH1突变是患者的保护因素。基于上述4个独立预后变量构建预测GBM患者总生存率的列线图模型,结果展示该模型的一致性指数为0.775(95%CI:0.746~0.803),校准曲线表明预测生存概率与患者实际生存概率具有高度一致性,提示该列线图具有较好的预测能力。结论基于CAR与NLR的累积评分为GBM患者的预后提供了更为详尽的风险分层,可作为一项客观有效的预后评估工具。

表观扩散系数灰度直方图在多形性胶质母细胞瘤鉴别诊断中的价值

目的探讨表观扩散系数(ADC)灰度直方图在多形性胶质母细胞瘤(GBM)与原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)、单发脑转移瘤(SMT)鉴别诊断中的价值。方法 29例GBM患者(GBM组)、38例PCNSL患者(PCNSL组)、28例SMT患者(SMT组)均行MRI检查,绘制ADC灰度直方图,对比三组ADC灰度直方图参数,包括灰度值的均值、方差、偏度、峰度及第1、10、50、90、99百分位数(Perc.01%、Perc.10%、Perc.50%、Perc.90%、Perc.99%),用受试者工作特征(ROC)曲线分析以上参数对GBM、PCNSL、SMT鉴别诊断的效能。结果三组ADC图灰度均值、方差、偏度、峰度、Perc.01%、Perc.10%、Perc.50%、Perc.90%、Perc.99%比较差异有统计学意义(P均<0.05)。ADC灰度直方图参数中Perc.50%鉴别GBM、PCNSL的AUC最大(0.90),灵敏度与特异度分别为84.21%、86.21%;Perc.50%鉴别GBM、PCNSL的AUC最大(0.794),灵敏度和特异度相同,分别为96.43%、55.17%;Perc.90%鉴别PCNSL与SMT的AUC最大(0.814),灵敏度和特异度分别为92.86%、68.42%。结论 ADC灰度直方图可鉴别GBM与PCNSL、SMT,以灰度值第50百分位数鉴别效能最高。

替莫唑胺治疗多形性胶质母细胞瘤的化疗耐药机制

胶质瘤约占原发性颅内肿瘤的50%以上,多形性胶质母细胞瘤(GBM)为WHOⅣ级胶质瘤,复发率高,5年生存率不到10%。化疗是GBM综合治疗中的重要一环,而替莫唑胺作为多形性胶质母细胞瘤基石化疗药物在临床广泛应用,然而因其化疗耐药性的存在,严重影响了治疗效果的进一步提高。本文针对目前胶质瘤化疗药物的主要耐药机制:多药耐药、DNA损伤修复机制、凋亡通路异常、胶质瘤干细胞学说等几个方面,结合替莫唑胺药理机制进行分析、总结,希望对提高替莫唑胺在多形性胶质母细胞瘤中的疗效有一定启示。

原代培养多形性胶质母细胞瘤的增殖与放射敏感性

目的探讨多形性胶质母细胞瘤的增殖活性与放射敏感性,为临床治疗提供参考。方法观察了5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤的形态学变化并绘制生长曲线。采用免疫组化链酶亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC)检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并用四唑盐比色法(MTT)检测原代培养多形性胶质母细胞瘤以60Co2Gy放射剂量照射后的存活分数。结果5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞形态多样,生长曲线和增殖活性各不相同,放射敏感性也存在明显差异。结论多形性胶质母细胞瘤存在不同放射敏感性的细胞群,放射治疗应体现个体化原则。

抗MRP3单链抗体-sTRAIL融合蛋白诱导U251多形性胶质母细胞瘤凋亡

采用重组PCR技术获得抗多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)的单链抗体(scFv)与人源可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble TNF-related apoptosis inducingligand,sTRAIL)的融合蛋白质的基因编码序列,利用原核表达载体pMAL-c2,构建含麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)标签肽的antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白,经亲和层析柱纯化.获得纯化的antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白,用MRP3阳性U251多形性胶质母细胞瘤做增殖抑制实验、细胞凋亡诱导实验,结果均显示具有明显的活性,而MBP无明显作用.上述结果表明,成功表达了antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白,该融合蛋白具有诱导U251多形性胶质母细胞瘤细胞凋亡的活性,为开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础.

人脑多形性胶质母细胞瘤原代培养及生长特性观察

目的探讨原代培养人脑多形性胶质母细胞瘤细胞的方法,观察培养细胞的生长活性,建立人脑多形性胶质母细胞瘤细胞体外实验模型。方法采用酶消化法原代培养14例人脑多形性胶质母细胞瘤细胞,用倒置相差显微镜和荧光显微镜观察增殖过程中细胞的形态学特点,台盼蓝染色法观察生长活性,描记生长曲线以研究细胞的生长特性。结果 12例原代培养成功,第4代以后肿瘤细胞纯度达98%以上。培养成功的细胞状态稳定,增殖活跃,有明显的对数生长期。结论采用酶消化法可成功原代培养人脑多形性胶质母细胞瘤细胞,酶消化法加划除法可获得高纯度的肿瘤细胞,成功率较高,适宜体外培养细胞。

HMGB1在多形性成胶质细胞瘤中的作用及其机制研究

目的研究高迁移率蛋白(HMGB1)在多形性成胶质细胞瘤(GBM)中的作用及其机制。方法用9 L胶质瘤细胞颅内接种Wistar鼠构建同源GBM模型。建立GBM模型鼠后将其随机分为3组:GBM+Saline(n=20),GBM+Ad(n=20),GBM+Ad+Gly(n=20)。10 d后对GBM+Ad组鼠进行Ad-TRAIL感染(8×107pfu/5μl),GBM+Ad+Gly组鼠进行Ad-TRAIL感染和甘草酸(Glycyrrhizin)喂养(稀释于氢氧化钠,100 mg腹腔注射,每天两次连续喂养10d),GBM+Saline组和对照组用生理盐水处理。采用ELISA测定体内和体外HMGB1的含量水平,TUNEL法测定细胞的凋亡,免疫细胞组化(ICC)检测HMGB1的表达。结果 HMGB1在GBM+Ad组中的血清含量为5.540±0.054 ng,显著高于GBM+saline组的0.0060±0.004 ng(P=0.0001);GBM+Ad+Gly组中HMGB1血清含量(0.07±0.016 ng)显著低于GBM+Ad组(P=0.04);GBM+saline组的HMGB1血清含量高于对照组,但差异无统计学意义(P=0.923)。免疫细胞组化实验中,HMGB1在GBM-Ad组中呈高阳性表达。体外检测中,GBM+Ad组中HMGB1浓度(77.505±1.196 ng)高于GBM+saline组(8.623±0.052 ng)(P=0.0003);GBM+Ad0组中HMGB1浓度低于GBM+saline组,但差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL法检测Ad-TRAIL感染GBM原代细胞后的细胞凋亡发现,GBM+Ad组的细胞死亡率为(78.91±0.17)%,显著高于GBM+saline组(18.29±0.73)%(P=0.04)。相关性分析结果显示HMGB1含量水平与细胞死亡率呈正相关,R2=0.9976,P<0.0001。GBM+saline和GBM+Ad+Gly组鼠在第12天开始出现死亡,在第24天和第25天全部死亡;而GBM+Ad组在第16天开始出现死亡,在第40天时有50%(5/10)长期存活。结论HMGB1在GBM治疗中高释放,且其浓度与细胞凋亡正相关。HMGB1是GBM的治疗靶点,并且是检测腺病毒治疗或免疫治疗GBM疗效的潜在生物标记。

多形性胶质母细胞瘤生长活性的实验研究

目的 探讨多形性胶质母细胞瘤(GBM)的生长活性。方法 观察了5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤及U2 5 1细胞株的形态学变化,绘制生长曲线,并采用免疫组化SABC法检测PCNA的表达。结果 5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤及U2 5 1细胞株其生长曲线各不相同。GBM细胞形态多样,增长最快的细胞系常显示较多的形态一致性和PCNA的高表达。结论 细胞形态、生长曲线和PCNA的表达可以较好的反映GBM的增殖活性。