多形性腺瘤基因样因子2在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后的关系研究

目的探究多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后的关系。方法选取南京医科大学附属无锡人民医院妇科2014年7月至2020年1月收治的106例上皮性卵巢癌患者作为研究对象,于所有受试者入组24 h内收集并整理临床基础资料,采用常规免疫组化法对卵巢癌组织和癌旁正常组织中PLAGL2表达进行检测。随访观察患者预后,并根据预后结局分为预后不佳组和预后良好组。COX回归分析影响上皮性卵巢癌患者预后的因素。以受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评估PLAGL2对上皮性卵巢癌患者预后的预测价值。结果随访12个月内,106例上皮性卵巢癌患者中死亡19例,生存率82.08%。卵巢癌组织中PLAGL2阳性表达率高于癌旁正常组织(χ^(2)=9.339,P<0.05)。COX多因素回归分析结果显示,年龄46~58岁、国际妇产科联合会(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、病理分级低分化、术后残余病灶直径>1 cm及PLAGL2阳性表达均为上皮性卵巢癌患者预后的影响因素(P<0.05)。ROC分析显示,上皮性卵巢癌组织中PLAGL2表达对上皮性卵巢癌患者预后的ROC的灵敏度、特异度和AUC分别为89.47%、66.67%、0.781(P<0.05)。结论PLAGL2在预后不佳的上皮性卵巢癌患者中阳性表达率较高,且上皮性卵巢癌组织中PLAGL2表达对患者预后具有较高的预测效能。

多形性腺瘤基因样因子2在胃癌组织中的表达及其影响胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化的机制

目的观察多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达,探讨其对胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化(EMT)的影响及分子机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌及相应癌旁组织和人胃癌MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901细胞株中的表达。将PLAGL2小干扰RNA(siRNA)转染SGC-7901细胞,Real-time PCR、Western blot检测PLAGL2 mRNA和蛋白表达,Transwell侵袭实验检测敲低PLAGL2对细胞侵袭的影响,Western blot检测敲低PLAGL2对EMT相关分子标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关分子表达的影响。分别采用Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001和抑制剂XAV939处理转染PLAGL2-siRNA的SGC-7901细胞,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭变化。结果PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达量(mRNA:1.11±0.27;蛋白:0.98±0.26)高于癌旁组织(mRNA:0.37±0.10;蛋白:0.28±0.11;t=-20.941,P<0.01;t=-20.186,P<0.01)。PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901中的表达量高于人胃黏膜正常细胞GES-1(mRNA:t=-12.327,P<0.01;t=-19.812,P<0.01;t=-13.080,P<0.01;t=-15.218,P<0.01;蛋白:t=-11.816,P<0.01;t=-21.162,P<0.01;t=-14.517,P<0.01;t=-15.899,P<0.01)。转染后,SGC-7901的PLAGL2 mRNA和蛋白表达(mRNA:2.10±0.29;蛋白:1.96±0.27)较Control siRNA组(mRNA:6.61±0.73;蛋白:6.46±0.71)显著降低(t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01)。转染24、48、72 h后PLAGL2-siRNA组侵袭细胞数[(30.75±5.74)、(48.75±6.90)、(64.50±4.80)个]较Control siRNA组[(51.00±4.97)、(75.75±4.92)、(132.50±5.57)个]显著减少(t=-1.000,P<0.05;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01),同时N-cadherin、Vimentin、β-catenin、基质金属蛋白酶(MMP)-7、c-Myc蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著增高(t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-1.000,P<0.01;t=-8.205,P<0.01)。此外,SKL2001能够逆转敲低PLAGL2对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用,XAV939则能够进一步加强以上作用。结论胃癌组织PLAGL2表达上调,siRNA干扰PLAGL2可通过抑制Wnt/β-cateninn信号通路的激活和EMT抑制胃癌侵袭。

PLAGL2对SP-C基因表达的调控及其机制的初步研究

目的研究多形性腺瘤样因子2(pleiomorphic adenoma gene like-2,PLAGL2)对肺表面活性蛋白C基因(surfactant protein-C,SP-C)表达的影响及调控机制。方法通过定点诱变技术分别突变掉SP-C基因启动子上PLAGL2的结合位点以及PLAGL2的第6?7位锌指结构域并获得相应的突变体;利用细胞共转染和荧光素酶报告基因检测技术研究PLAGL2对SP-C基因启动子表达活性的影响及比较正常及突变体的PLAGL2或SP-C基因启动子之间相互作用的差异以明确PLAGL2对SP-C基因的调控及作用靶点。结果细胞共转染试验中,荧光素酶活性检测结果表明PLAGL2可明显增加SP-C基因的表达(P<0·001),SP-C基因表达活性的增高与PLAGL2的作用浓度呈正相关;当定点诱变掉PLA-GL2的第6或7位锌指结构域后,PLAGL2的突变体质粒均不能增高SP-C基因的表达活性,与对照组相比较,差异具有显著性(P<0·001);同样,当定点诱变掉PLAGL2在SP-C基因启动子上的结合位点后,PLAGL2也不能增高SP-C基因启动子突变体质粒的表达活性,与对照组相比较,两者具有明显差异(P<0·01)。结论在肺Ⅱ型细胞中,PLAGL2通过其第6和7位锌指结构域结合于SP-C基因启动子上的PLAGL2结合位点序列来促进SP-C基因的表达。

PLAGL2与结肠癌侵袭能力的相关性研究

目的探讨多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在结肠癌和癌旁组织中的表达水平以及与结肠癌临床病理因素之间的关系,研究PLAGL2对结肠癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法通过免疫组化检测40例新鲜结肠癌组织及40例癌旁组织中PLAGL2的表达情况,根据术前影像检查结果及术后组织病理结果判断病人分期情况,分析PLAGL2与临床病理因素之间的关系。构建重组质粒pc DNA3.1-PLAGL2,利用转染试剂脂质体2000对SW480细胞进行转染PLAGL2质粒及对照组空载体质粒,分SW480、Vector、PLAGL2三组进行细胞培养,通过Transwell侵袭实验比较三组细胞侵袭能力的差异,并通Western-blot方法检测三组细胞中E-cadherin、vimentin及MMP-7的表达情况。结果 PLAGL2在Ⅲ~Ⅳ期、Ⅰ~Ⅱ期结肠癌组织与癌旁组织中的免疫组化评分(IS值)分别为8.12±2.997、5.71±2.494、2.17±0.984,差异有统计学意义(F=64.225,P<0.01)。卡方检验结果提示PLAGL2表达增高的病例临床分期较晚(χ2=5.700,P=0.017)、肿瘤较大(χ2=8.174,P=0.008)以及更易发生远隔脏器转移(χ2=13.610,P<0.001);Transwell侵袭实验比较细胞侵袭个数,PLAGL2组明显高于SW480和Vector两组,差异有统计学意义(F=27.997,P<0.01);Western-blot方法检测PLAGL2组细胞中E-cadherin表达明显降低(F=38.461,P<0.01)、vimentin(F=28.741,P<0.01)及MMP-7表达升高(F=24.520,P<0.01),差异有统计学意义。结论 PLAGL2的表达上调与结肠癌的发生、发展密切相关,并且能够促进结肠癌细胞的侵袭能力,可能机制与诱发上皮间质化(EMT)形成有关。