多形拟杆菌感染的腹膜透析相关性腹膜炎1例

1病例资料患者男,52岁,因“维持腹膜透析1年余,发热2 d余”到汕头大学医学院第一附属医院就诊。患者2019年于我院确诊为糖尿病肾病,予行腹膜透析置管术,术后规律非卧床腹膜透析治疗(1.5%葡萄糖透析液2 L×2袋+2.5%葡萄糖透析液2 L×2袋)。2021年2月27日患者腹透过程中出现畏寒发热,脐周疼痛,伴腹透液出现混浊,体温39.4℃,既往高血压病史5年余,糖尿病10年余。

db/db2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌实时荧光定量PCR标准品制备方法的比较研究

目的比较研究db/db 2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)实时荧光定量PCR 2种标准品制备方法。方法收集2型糖尿病小鼠db/db模型组和db/m对照组肠道内容物,同时以多形拟杆菌ATCC29148为标准菌株,提取微生物DNA,用16SrRNA V6区多形拟杆菌引物,采用实时荧光定量PCR标准品制备中标准菌株法和正常组高阳性法2种标准品制备方式进行定量检测,比较2种方法的差异性。结果标准菌株法与正常组高阳性法测定db/m对照组和db/db模型组小鼠肠道多形拟杆菌的数量分别为(5.23×106±2.30×106)、(1.52×107±3.23×106)和(5.23×106±2.25×106)、(1.45×107±3.39×106),与db/m对照组相比,db/db模型组多形拟杆菌数量多,差异有统计学意义(P<0.05);标准菌株法与正常组高阳性法对检测多形拟杆菌的差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR的标准品制备中标准菌株法与正常组高阳性法均可检测出较多的多形拟杆菌,并且2种检测方式都可以对肠道菌群进行检测。

多形拟杆菌与宿主营养物质的利用

多形拟杆菌的基因组特点证明其是一种重要的糖化菌,多形拟杆菌对营养物质的利用主要表现在2个方面:一是降解难被宿主消化的营养物质;二是通过影响宿主的代谢机制,使营养物质被宿主更高效率的吸收和利用,本文就上述问题进行了综述。

多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶序列分析与酶学性质

α-L-鼠李糖苷酶在生物技术领域具有很好的生物催化应用前景。目前,仅16个细菌源GH78家族α-L-鼠李糖苷酶基因被报道,对α-L-鼠李糖苷酶的序列特征与分子催化机制了解尚不完善。人体肠道细菌多形拟杆菌可利用多种多糖与糖苷,其基因组包括6个预测的α-L-鼠李糖苷酶基因,本文集中于连续定位于一个基因座的2个α-L-鼠李糖苷酶基因BtRha78D和BtRha78E,通过研究二者的序列特征和酶学特性旨在确定此基因座的生物学意义。序列分析显示,BtRha78D和BtRha78E的序列组成与长度差异性大,与已发现的α-L-鼠李糖苷酶序列一致性较低,分子进化关系也较远;酶学性质研究表明,BtRha78D和BtRha78E可高效水解底物p NPR,最适p H分别为p H6.0与p H 7.0。BtRha78E在p H 7.5~8.0范围内,仍能保持52%以上的活性。BtRha78D和BtRha78E最适温度为50℃,对pNPR的kcat分别为14.78 s-1和5.48 s-1,Km分别为0.14 mmol/L和0.44 mmol/L,kcat/Km分别为105 600 s-1L/mol和12 500 s-1L/mol。BtRha78D和BtRha78E耐受低浓度(1%)有机溶剂,10%浓度显著降低酶活性,对二甲亚砜具有很好的耐受性,10%浓度下仍能分别保持42%和53%的活性。本研究揭示,α-L-鼠李糖苷酶BtRha78D和BtRha78E间的序列组成与长度差异性很大,具有相同的催化活性而酶学性质却不同,一个包含2个α-L-鼠李糖苷酶基因的基因座可能参与多形拟杆菌降解利用含α-L-鼠李糖基的多糖与糖苷化合物。

多形拟杆菌对大鼠血糖的影响

目的探讨多形拟杆菌对大鼠血糖的影响。方法将46只SD大鼠按体质量的不同分为5组:普通饲料喂养组(A组,n=8)、高脂饲料喂养组(B组,n=8)、高脂饲料喂养+多形拟杆菌菌液灌喂组(C组,n=8)、糖尿病模型组(D组,n=10)和糖尿病模型+多形拟杆菌菌液灌喂组(E组,n=11)。A组采用普通饲料喂养,B、C、D和E 4组采用40%脂肪和胰岛素抵抗诱导模型饲料,每只大鼠25g·d-1饲料喂养。适应性喂养4周后,隔夜空腹12h,D、E2组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液35mg·kg-1;A、B和C 3组大鼠腹腔注射0.1mol·L-1柠檬酸钠缓冲液。A、B和C 3组大鼠均造模成功,D组死亡2只,E组死亡3只。实验第1天开始,C、E 2组大鼠采用多形拟杆菌菌液灌胃,连续7d;A、B和D 3组采用等量0.9%氯化钠注射液灌胃,连续7d。5组大鼠第0—12周采用电子秤称体质量1次。第0、4、8和12周,使用全自动生化仪、采用己糖激酶法检测5组大鼠空腹血糖(FPG)水平,采用ELISA法检测5组大鼠血清胰岛素水平,实时荧光定量PCR法测定5组大鼠肠道多形拟杆菌的数量。结果与A、B 2组比较,C组大鼠第1—12周体质量均明显增加,D、E 2组大鼠第6—12周体质量均明显降低,C组大鼠第8、12周FPG水平均显著升高,D、E 2组大鼠第4、8和12周FPG水平均显著升高,C、D和E 3组大鼠第4、8和12周血清胰岛素水平均显著升高、肠道多形拟杆菌的数量均显著增多(P<0.05或P<0.01)。与C组比较,D、E 2组大鼠第1—12周体质量均明显降低,第4、8和12周FPG水平均显著升高、血清胰岛素水平均显著降低和肠道多形拟杆菌的数量均显著增多(P<0.05或P<0.01)。与D组比较,E组大鼠第6—12周体质量均明显增加,第4、8和12周FPG水平均显著升高、血清胰岛素水平均显著降低,第8、12周肠道多形拟杆菌的数量均显著增多(P<0.05或P<0.01)。肠道多形拟杆菌的数量与体质量、FPG水平均呈正相关(r=0.163、0.684,P<0.05或P<0.01),与血清胰岛素水平无相关性(r=-0.019,P>0.05)。结论大鼠肠道多形拟杆菌不但能促进大鼠体质量增加,而且升高FPG。

多形拟杆菌对仔猪肠道菌群的影响

多形拟杆菌在健康动物和人体的粪便中数量可达3.2×109cfu/g,是绝对的优势菌,多形拟杆菌在帮助宿主吸收多糖以及提高营养利用率、调控脂肪积累、加快肠道黏膜的血管形成和提高宿主的免疫力、维持肠道微生态平衡等方面均有着非常重要的作用。本实验从健康的猪肠道中分离多形拟杆菌,采用了生理生化实验进行鉴定。本文通过研究多形拟杆菌对仔猪肠道菌群的影响,对提升猪肉品质,增加猪肉瘦肉率和预防仔猪腹泻,维持仔猪肠道微生物态平衡有很大的借鉴意义。

db／db2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌、产甲烷短杆菌与GLP-1的相关性研究

目的：研究db／db2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌、产甲烷短杆菌与胰高血糖素样肽l（GLP-1）相关性，探索多形拟杆菌、产甲烷短杆菌对糖尿病影响的可能机制。方法：用6周龄2型糖尿病模型组db／db（n=6）和对照组db／m（n=6）小鼠，观察第7周到第12周中两组小鼠的体重、空腹血糖水平；第12周之后，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法测定肠道多形拟杆菌、产甲烷短杆菌的数量，其中以绝对与相对定量两种方式对多形拟杆菌进行检测，

多形拟杆菌对小鼠急性铅毒性的缓解作用

为探究多形拟杆菌对小鼠急性铅毒性的影响,在急性铅暴露期间灌胃多形拟杆菌FTJS-8-K,测定了小鼠组织、粪便及血液中铅含量、肝肾功能损伤程度、肠屏障功能及肠道菌群的变化.结果表明,补充多形拟杆菌FTJS-8-K,可促进铅随粪便排出,减少组织铅蓄积,恢复了肝肾组织中丙二醛、谷胱甘肽水平,降低了氧化应激损伤的程度,提高了结肠与小肠中ZO-1、Occludin mRNA的表达,改善了由于急性铅暴露引起的肠道通透性增加,促使肠道中短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)含量增加.同时,多形拟杆菌FTJS-8-K可以改善急性铅暴露引起的肠道菌群紊乱,降低肠杆菌、假单胞菌属等条件致病菌的丰度,增加了瘤胃球菌、Rikenellaceae__unclassi-fied、S24-7__unclassified等的丰度.综上,多形拟杆菌FTJS-8-K可以显著缓解铅暴露引起的机体损伤,为今后通过膳食干预策略拮抗铅毒性提供了参考依据.

小鼠低菌模型的构建及多形拟杆菌对其补偿生长作用的研究

目的探讨高剂量抗生素构建低菌小鼠模型的可行性，并研究小鼠在不同生理状态下肠内拟杆菌的演替规律及对小鼠生长性能的影响。方法将120只SPF级的昆明小鼠分成3组：A组为空白对照组；B组为模型组，用22g/（kg·BW）的氨苄青霉素连续灌胃小鼠3d构建低菌动物模型；C组在构建低菌小鼠模型的基础上每天早晚2次各灌胃1ml的多形拟杆菌发酵液（10^9／m1），连续3d。用注射器稀释法测定小鼠肠内拟杆菌的活菌数，并测定各组小鼠体重和日增重。结果高剂量的抗生素处理可以使小鼠保持16d的低菌状态，但是给小鼠带来了一定的应激；C组小鼠在灌胃多形拟杆菌发酵液后，肠内拟杆菌在22～34d迅速生长并形成优势定植，且体重和日增重在实验后期显著增加即补偿生长。结论低菌模型较常规动物更能敏感地反映添加拟杆菌的生物学效应，但对小鼠有一定应激；多形拟杆菌对低菌小鼠具有明显的补偿生长效应，它可以缓解应激并使小鼠更快的恢复到正常的生理状态。

多形类杆菌的电镜观察

厌氧菌是人、畜体内正常菌群的重要组成部分。人的粪便中99%是厌氧菌。多形类杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)为专性厌氧菌,属脆弱类杆菌组,革兰氏染色阴性,一般为短杆形,两端圆而浓染,中间有不着色部分被认为是其特点,有荚膜,无芽胞,无鞭毛,不能运动。在含糖培养基上菌体呈多形性,有丝状体。多形类杆菌能产生内毒素,在脆弱类杆菌组中的抗原分型为血清型A,因产生β-内酰胺酶能破坏青霉素,故对其耐药。所以,研究多形类杆菌有一定的生物医学意义。

对1例多形拟杆菌血流感染的分析

临床药师通过参与1例多形拟杆菌血流感染的直肠溃疡患者治疗,将药学理论和临床实践相结合,从临床诊断、药物选择以及方案调整等方面提出合理化建议,患者感染得到有效控制。临床药师的参与,有利于患者治疗和促进临床合理使用抗菌药物。

利用mNGS成功诊治多形拟杆菌致难治性腹膜透析腹膜炎一例

腹膜透析相关性腹膜炎是腹膜透析患者常见的并发症之一,但是厌氧菌感染所导致的腹膜炎较少见。该文报道了一例44岁女性患者,维持性腹膜透析4年余,因腹痛腹泻、腹膜透析液浑浊并被诊断为腹膜透析相关性腹膜炎收入院。该例患者的多次腹膜透析液培养结果均呈阴性,经验性抗感染治疗后无效,考虑为难治性腹膜透析相关性腹膜炎,最终经基于宏基因组二代测序(mNGS)技术病原学检查提示存在多形拟杆菌感染,并使用甲硝唑联合亚胺培南西司他丁钠抗感染,18 d后患者痊愈出院,随访至今未见腹膜炎复发或再发。该例诊治过程提示,应重视厌氧菌感染导致的腹膜透析相关性腹膜炎,可考虑将mNGS技术应用于常规腹膜透析相关性腹膜炎的检查,以提高病原微生物的检出率,并根据检测结果尽早选用合适的抗生素进行抗感染治疗,改善患者预后。

db/db2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌、史氏产甲烷短杆菌与GLP-1分泌的相关性研究

目的研究db/db 2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌、史氏产甲烷短杆菌与胰高血糖素样肽1(GLP-1)的相关性,探索肠道多形拟杆菌、史氏产甲烷短杆菌对糖尿病影响的可能机制。方法6周龄2型糖尿病模型组db/db(n=6)和对照组db/m(n=6)小鼠,观察第7周-第12周中2组小鼠的体质量、空腹血糖水平;第12周之后,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法测定小鼠粪样中肠道多形拟杆菌、史氏产甲烷短杆菌的数量,运用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠门脉血和结肠组织匀浆液中GLP-1的水平来反映GLP-1的分泌,并分析肠道菌群的变化与GLP-1分泌的相关性。结果(1)与对照组db/m相比,第7周-第12周的观察过程中模型组db/db小鼠体质量和空腹血糖明显升高(P<0.01);(2)与对照db/m组相比,模型组db/db小鼠结肠中多形拟杆菌、史氏产甲烷短杆菌的数量增加(P<0.05),且空腹血糖与粪样中多形拟杆菌的变化呈正相关。(3)与对照db/m组相比,模型组db/db小鼠门脉血、结肠组织匀浆液中GLP-1水平降低(P<0.05);空腹C肽水平下降(P<0.05)。(4)模型组db/db小鼠结肠内容物多形拟杆菌数量与门脉血、结肠GLP-1含量(r=-0.63,P<0.01;r=-0.35,P<0.01)呈负相关;史氏产甲烷短杆菌数量与门脉血、结肠GLP-1含量(r=-0.17,P<0.01;r=-0.46,P<0.01)呈负相关。结论肠道多形拟杆菌、史氏产甲烷短杆菌与GLP-1的分泌相关,可能是肠道菌群影响2型糖尿病的重要机制。

多形拟杆菌SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用

多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron,B.thetaiotaomicron)是人和动物肠道内的一种常在菌,其在调控糖代谢、调节肠道菌群等方面起重要作用。为建立一种快速、准确检测动物肠道中B.thetaiotaomicron数量的检测方法,本实验参照GenBank中B.thetaiotaomicron标准菌株的保守序列设计合成1对特异性引物。对反应条件进行优化,建立该细菌的SYBR Green荧光定量PCR检测方法。经特异性、敏感性和重复性试验结果显示,在常见的8种肠道细菌中,只能检测到B.thetaiotaomicron,最低检出量为110 copies/μL,重复性结果变异系数均不高于2%。为评估SYBR Green荧光定量PCR检测方法的实用性,本研究将12只小鼠平均分为2组,其中试验组小鼠灌胃0.2 mL 10^(9) CFU/mL B.thetaiotaomicron,对照组灌胃0.2 mL胨酵母浸膏葡萄糖(PYG)培养基,2周后,利用本研究建立的方法对小鼠粪便中细菌的全基因组DNA进行荧光定量PCR检测,结果显示试验组小鼠粪便样品中B.thetaiotaomicron含量高于对照组。以上结果表明,本研究建立的B.thetaiotaomicron SYBR Green荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可对动物肠道中的B.thetaiotaomicron含量进行检测。

多形拟杆菌对肺癌细胞生物学行为及转录组基因表达的影响

目的探讨多形拟杆菌对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及转录组基因表达的影响。方法选用肺癌细胞系H1975和SK-MES-1,以细菌培养基为对照组,多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)上清液为处理组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞的增殖能力,采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞迁移及侵袭能力,通过转录组筛选两组细胞差异表达的基因,通过基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,探究差异基因集中的具体通路。组间比较采用t检验进行统计分析。结果与细菌培养基组比较,H1975细胞系和SK-MES-1细胞系中,细菌处理组细胞的增殖率显著下降(0.767±0.063比1.000±0.047、0.707±0.049比1.000±0.124),差异有统计学意义(t=7.827、5.838,P均<0.001),迁移水平(0.066±0.030比0.567±0.107,t=6.350,P<0.05;0.066±0.030比0.475±0.056,t=9.042,P<0.01)和侵袭水平(0.271±0.033比1.454±0.221,t=7.475,P<0.05;0.349±0.029比1.664±0.107,t=16.806,P<0.01)也显著下降,差异有统计学意义。通过GO和KEGG富集分析,发现丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PIK3)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等在H1975和SK-MES-1细胞系的细菌处理组和培养基对照组之间差异有统计学意义。Venn分析发现转录延长因子1(TCEA1)和人内皮素2(EDN2)等在两个细胞系中均受到调控。结论多形拟杆菌可能通过TCEA1和EDN2基因调控肺癌H1975和SK-MES-1细胞系的生物学行为,发挥抑癌作用。

多形拟杆菌对糖尿病模型小鼠的影响

目的研究多形拟杆菌(BT)干预糖尿病模型小鼠后对血糖、体重和C肽的影响。方法 (1)用四氧嘧啶(200 mg/kg腹腔注射)制备糖尿病模型小鼠,并分成四组:空白组(n=10)、空白给菌组(n=10)、四氧嘧啶糖尿病模型组(n=11)和模型给菌组(n=11),15 d。(2)BHI血琼脂培养基培养ATCC 29148标准菌株,比浊法测定混悬菌液数量。(3)用多形拟杆菌菌液干预空白给菌组和模型给菌组小鼠,观察15 d中四组小鼠的体重、空腹血糖水平的变化;实时荧光定量PCR测定小鼠肠道内多形拟杆菌的数量;运用酶联免疫法(ELISA)测定血清中C肽的水平。结果 (1)给予菌悬液后,空白给菌组与空白组相比,BT在第3天就可以定植并维持到第15天。与模型组相比,模型给菌组在第15天时可以定植;(2)线性回归相关性分析显示,肠道内多形拟杆菌与体重呈负性相关(r=-0.70,P<0.05);与空腹血糖(FPG)呈正性相关(r=0.71,P<0.05);与C肽呈负性相关(r=-0.62,P<0.05);与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)呈正性相关(r=0.55,P<0.05);与胰岛素分泌指数(HOMA-IS)呈负性相关(r=-0.43,P<0.05)。结论 (1)外源性灌胃给予多形拟杆菌可以在肠道内定植。(2)肠道内多形拟杆菌的数量变化与糖尿病有相关性。

两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对2型糖尿病小鼠肠道菌群的影响

为研究两色金鸡菊乙酸乙酯提取物对糖尿病小鼠肠道菌群的影响,初步判断它们之间的关系,收集正常组、模型组、二甲双胍对照组以及两色金鸡菊乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组粪便样本,采用实时荧光定量PCR技术检测粪便样本中球形梭菌与多形拟杆菌的水平;运用Pearson分析,对目标菌属水平与各组小鼠的空腹血糖(FBG)做相关性分析。结果表明:(1)与正常组比较,模型组中球形梭菌与多形拟杆菌水平均增高(P=0.017,P=0.002);(2)两色金鸡菊乙酸乙酯提取物低剂量组与模型组相比,球形梭菌与多形拟杆菌的水平下降,且有统计学差异(2周:P=0.010,P=0.002;4周:P=0.001,P=0.002);(3)球形梭菌水平、多形拟杆菌水平均与FBG水平呈正相关。可见2型糖尿病小鼠肠道菌群球形梭菌与多形拟杆菌水平较正常组增高;两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可降低模型组群球形梭菌与多形拟杆菌水平。

多形拟杆菌对肥胖大鼠减肥影响的初步研究及毒性实验

目的研究人体肠道内的多形拟杆菌对肥胖大鼠的减肥作用。方法从人体肠道中提取、分离和鉴定1株多形拟杆菌。建立高能饲料诱发的大鼠肥胖模型,给大鼠灌胃多形拟杆菌菌液,25 d后观察大鼠体重及肠道内多形拟杆菌的数量变化。结果灌胃多形拟杆菌菌液的给药组的大鼠体重与灌胃生理盐水的模型组相比,增长慢(P<0.05),差异有显著性,且体内拟杆菌数量多于模型组,差异有显著性(P<0.05)。结论提示多形拟杆菌菌液对肥胖大鼠有一定的减肥作用。

重组大肠杆菌生产多形拟杆菌肝素酶I的发酵优化

以实验室前期构建的N端融合SUMO标签的多形拟杆菌肝素酶Ⅰ(SUMO-Bt-Hep Ⅰ)生产菌株重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pE-SUMO-Bt-HepⅠ为研究对象,通过单因素确定其最佳表达条件:诱导温度25℃、诱导剂浓度0.4mmol/L、诱导时间12 h;首先通过Plackett-Burman试验,筛选出培养基中3个主要影响酶活的因素:葡萄糖、酵母提取物和蛋白胨。并通过响应面试验确定最佳培养基为:葡萄糖9.52g/L,酵母提取物9.61g/L,蛋白胨19.92g/L,硫酸铵4g/L,磷酸氢二钠18g/L,磷酸二氢钾3g/L,硫酸镁5g/L。在此最佳培养基下发酵酶活预测可达55133IU/L,3次验证试验获得的SUMO-Bt-HepI酶活力平均为56961 IU/L,与理论预测值接近,比优化前(24215.9 IU/L)提高了2.3倍。通过5L发酵罐的分批补料扩大培养得到的最高发酵酶活为3.937×10^5IU/L,比摇瓶提高了6.91倍,这是目前报道发酵生产肝素酶I的最高水平,对工业化应用具有一定的指导意义。

两色金鸡菊醇提物对2型糖尿病小鼠肠道菌群的影响

目的探讨两色金鸡菊醇提物,肠道菌群和2型糖尿病(T2DM)之间的可能联系。方法收集模型组(A),两色金鸡菊醇提物高剂量组1.8 g/kg(B),两色金鸡菊醇提物中剂量组1.2 g/kg(C),二甲双胍对照组0.2 g/kg(D),空白对照组(E)粪便样本,采用16S r DNA实时荧光定量PCR技术检测粪便样本中球形梭菌与多形拟杆菌的水平;运用Pearson分析方法,对目标菌属水平与各组小鼠的空腹血糖(FBG)做相关性分析。结果 1与正常组比较,模型组中球形梭菌与多形拟杆菌水平均增高(P=0.017,P=0.002)。2两色金鸡菊醇提物高剂量组与模型组相比,球形梭菌与多形拟杆菌的水平下降,且有统计学差异(2周:P=0.027,P=0.006;4周:P=0.007,P=0.012)。3球形梭菌水平、多形拟杆菌水平均与FBG水平呈正相关。结论两色金鸡菊醇提物对2型糖尿病小鼠肠道菌群存在着一定的影响且与其血糖水平存在相关性。