指纹图谱、多成分定量分析及化学模式识别分析相结合的心安胶囊质量评价

目的建立指纹图谱、多成分定量分析和化学模式识别分析相结合的心安胶囊质量评价方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)法,结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立24批心安胶囊的指纹图谱,并进行相似度评价,确定共有峰;采用同一HPLC法测定心安胶囊中牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷和异槲皮素的含量;以指纹图谱共有峰峰面积为变量,采用MetaboAnalyst 5.0工具绘制聚类分析(CA)热图,采用SIMCA 14.1软件进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)。结果24批心安胶囊共有12个共有峰,相似度均大于0.97;指认出绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷和异槲皮素6个共有峰。牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷、异槲皮素检测质量浓度的线性范围分别为2.36~151.35、9.15~585.20、1.20~76.50、0.68~43.20、0.44~27.90μg/mL(r均大于0.999);精密度、重复性、稳定性(24h)试验的RSD均小于2.00%;平均加样回收率分别为95.80%(RSD=0.96%,n=6)、102.10%(RSD=0.93%,n=6)、103.26%(RSD=1.28%,n=6)、103.89%(RSD=0.73%,n=6)、102.09%(RSD=1.79%,n=6)。5种成分的含量分别为0.9888~1.5591、4.3366~11.2201、0.0651~0.8305、0.0438~0.6925、0.0232~0.4272 mg/粒。CA、PCA结果显示,24批样品可分成3类,S1~S15为一类,S16~S18为一类,S19~S24为一类;PLS-DA发现,6号峰对应成分和牡荆素葡萄糖苷(7号峰)、牡荆素鼠李糖苷(8号峰)、金丝桃苷(10号峰)、异槲皮素(11号峰)的变量重要性投影值均大于1。结论所建立的HPLC指纹图谱、多成分定量方法简单、可行,结合化学模式识别分析可用于心安胶囊的质量控制;牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷等可能是影响各批样品质量的差异标志物。

基于HPLC特征图谱和多成分定量分析建立加味四妙颗粒的质量评价方法

目的建立加味四妙颗粒的对照特征图谱和多种成分进行定量分析方法,为本品质量控制和评价提供方法与依据。方法对20批加味四妙颗粒进行HPLC测定,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)生成加味四妙颗粒对照指纹图谱并进行相似度评价,将对照指纹图谱与各阴性供试品、混合对照品图谱进行匹配,对共有峰进行药味归属指认和多成分定量测定。结果各批次加味四妙颗粒样品与生成的对照指纹图谱相似度均在0.9以上;标定了19个共有峰,其中1、4、15号峰来源于川牛膝,2、6、10号峰来源于醋延胡索,3、16、18号峰来源于苍术,5、7号峰来源于大血藤,8、11号峰来源于薏苡仁,9、14、17号峰来源于黄柏,12、13、19号峰来源于甘草;指认了4、5、9、10、13、14、17、18、19共9个共有峰,即杯苋甾酮、红景天苷、木兰花碱、延胡索乙素、甘草苷、盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱、苍术素、甘草酸铵,在相应的浓度范围内线性关系良好(r>0.9995),加样回收率在96.71%~102.92%之间,精密度、稳定性、重复性、加样回收率RSD值均小于3.0%。结论建立的加味四妙颗粒HPLC对照特征图谱和多指标成分定量测定方法,为加味四妙颗粒的质量控制和评价提供参考依据。

基于多波长高效液相色谱指纹图谱和多成分定量分析的益肝明目口服液质量标准研究

目的建立益肝明目口服液的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并对其中6种成分(芍药苷、绿原酸、木犀草苷、阿魏酸、川陈皮素和橙皮苷)进行定量分析。方法采用色谱柱Inertsil ODS-SP(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱,体积流量0.8 mL·min^(-1),检测波长190~600 nm,柱温35℃。建立12批益肝明目口服液的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价;在不同检测波长(230、284、325、348 nm)下,对6个指标成分进行含量测定。结果通过与对照品的保留时间和紫外光谱图对比,指认其中6个成分(芍药苷、绿原酸、木犀草苷、阿魏酸、川陈皮素、橙皮苷),并对其进行了定量分析。结果显示12批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度在0.916~0.999。6个成分的含量分别为909.91~1249.15、38.71~62.76、13.17~29.45、27.01~49.60、2.19~7.52、264.97~496.05μg·mL^(-1)。结论建立的多波长HPLC指纹图谱及定量分析方法稳定性、重复性好,操作简单,可以为完善益肝明目口服液的质量标准提供参考。

基于指纹图谱结合多成分定量分析的视疲宁片质量评价研究

目的:建立视疲宁片(SPN)的HPLC特征指纹图谱,结合聚类分析、主成分分析、多成分定量分析,为其质量评价提供依据。方法:采用Agilent C18柱(250mm×4.60mm,5μm),以流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱(0～15min,20%～25%乙腈,20～25min,25%～45%乙腈,25～30min,45%～95%乙腈);体积流量为1mL·min-1;检测波长为280nm;柱温30℃。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版)对10批SPN指纹图谱进行相似度评价,对共有峰进行聚类分析与主成分析,并对指认的6种指标成分进行定量分析。结果:10批SPN HPLC指纹图谱相似度均大于0.90,共20个共有峰,各峰分离度较好。10批SPN样品聚类分析与主成分分析结果具有一致性,且经主成分分析20个共有峰可综合分为6个主成分,累积方差贡献率为95.91%;通过与对照品比对确定6种指标成分,分别为绿原酸(3号峰)、阿魏酸(5号峰)、橙皮苷(7号峰)、淫羊藿苷(12号峰)、橙黄决明素(18号峰)、大黄酚(20号峰),所建立的成分分析方法可用于6种成分的含量测定。结论:HPLC特征指纹图谱结合模式识别可反映SPN的内在质量,建立的多成分定量分析方法对SPN的质量控制具有参考价值。

基于多成分定量分析的市售红参药材质量评价研究

为综合评价市售红参药材质量,收集43批市售红参药材,采用HPLC对样品中的9种人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5含量进行测定,结合相关性分析、主成分分析、因子分析、方差分析及聚类热图分析对市售红参药材质量进行综合评价。含量测定结果表明,市售红参药材中常见人参皂苷含量水平较高而稀有人参皂苷含量均较低。多元统计分析结果表明,人参皂苷Rg1、Rb1含量与稀有人参皂苷含量呈显著正相关,且人参皂苷Rg1、Rb1及稀有人参皂苷含量对评价市售红参药材质量具有重要作用。结合红参炮制原理及红参药材质量现状,建议提升现行质量标准中人参皂苷Rb1的含量限度。

基于GC指纹图谱和多成分定量分析的不同产地炮制辅料羊脂油的质量评价研究

目的建立中药炮制辅料羊脂油的GC指纹图谱及多成分含量测定方法。方法采用GC法建立羊脂油指纹图谱,并进行聚类分析(HCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和主成分分析(PCA);对羊脂油所含6个主要脂肪酸进行多成分同时定量分析。结果18批羊脂油样品的指纹图谱相似度大于0.94,共匹配出15个共有峰,指认出肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、十七碳酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯六个化合物。GC多成分含量测定结果显示肉豆蔻酸、棕榈酸、十七碳酸、硬脂酸、油酸、亚油酸在羊脂油中的质量分数分别为1.76%~3.08%、15.83%~22.88%、0.92%~1.96%、8.02%~29.21%、16.84%~34.93%、1.12%~10.21%。PCA分析提取出5个主成分,累计方差贡献率为83.58%,含括了定量的6个主要脂肪酸成分,较好地反应了羊脂油中主要脂肪酸的信息。结论所建立的GC指纹图谱及多成分含量测定方法可为炮制辅料羊脂油的质量控制提供参考。

指纹图谱、多成分定量与模式识别相结合的预知子(三叶木通)配方颗粒质量评价

目的:建立指纹图谱、多成分定量分析和化学模式识别相结合的预知子(三叶木通)配方颗粒质量评价方法。方法:制备预知子(三叶木通)标准汤剂和配方颗粒,建立高效液相色谱法指纹图谱,对其中8个主要成分含量进行测定,并计算转移率和出膏率。进行相似度评价、聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),评价配方颗粒和标准汤剂化学成分的一致性。结果:预知子(三叶木通)标准汤剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木通苯乙醇苷B、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、木通皂苷D质量分数分别为1.94~10.33、2.18~13.77、1.77~9.15、2.31~19.34、1.77~6.48、1.16~5.55、2.55~9.90、0.92~8.93 mg·g–1,转移率分别为36.25%~56.02%、24.64%~40.23%、35.88%~58.41%、29.45%~50.69%、16.55%~29.54%、26.25%~46.59%、25.33%~41.66%、11.03%~17.35%,出膏率为13.59%~24.49%。预知子(三叶木通)配方颗粒指标成分含量、转移率、出膏率与标准汤剂接近,指纹图谱相似度、HCA、PCA、PLS-DA评价表明,配方颗粒和标准汤剂化学成分一致性较好。结论:预知子(三叶木通)配方颗粒与标准汤剂化学成分一致性较好,结果合理、可靠,可为其工艺优化及质量评价提供参考。

HPLC法同时测定健腰密骨片浸膏粉中5种指标成分

目的:建立健腰密骨片浸膏粉的多成分定量分析方法,为评价浸膏粉中间体的质量提供依据。方法:采用HPLC法,以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,测定健腰密骨片浸膏粉中5种成分的含量。结果:木兰花碱、丹酚酸B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ5种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.9997;5种化合物的平均回收率分别为100.47%、104.37%、95.38%、95.93%、96.66%。该方法的专属性、重复性均良好。结论:该分析方法准确、重复性好,可作为健腰密骨片浸膏粉的质量控制方法。

潜阳育阴颗粒UPLC指纹图谱和多成分定量方法的建立

目的建立潜阳育阴颗粒的指纹图谱和多成分定量方法。方法采用超高液相色谱(UPLC)法,以马钱苷峰为参照,建立15批潜阳育阴颗粒的UPLC指纹图谱,确定共有峰并采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》评价相似度;进行聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),并以变量重要性投影(VIP)值大于1.0为标准筛选影响潜阳育阴颗粒质量的差异性成分;采用UPLC法测定差异性成分和哈巴苷、阿魏酸、杯苋甾酮的含量。结果15批潜阳育阴颗粒样品有18个共有峰,相似度均大于0.96;指认峰6为莫诺苷,峰7为马钱苷,峰11为金丝桃苷,峰12为二苯乙烯苷,峰13为阿魏酸,峰14为杯苋甾酮,峰16为哈巴俄苷,峰17为肉桂酸,峰18为大黄素。CA和PCA结果均显示,15批样品可分为6类,S1、S2、S4~S6为一类;S3为一类,S7、S8为一类,S9、S10为一类,S11~S14为一类,S15为一类;PLS-DA结果显示,峰3、9、6(莫诺苷)、7(马钱苷)、15、12(二苯乙烯苷)、16(哈巴俄苷)的VIP值均大于1.0。15批样品中,哈巴苷、哈巴俄苷、莫诺苷、马钱苷、二苯乙烯苷、阿魏酸、杯苋甾酮的含量分别为0.336~0.563、0.205~0.377、0.692~0.837、0.433~0.562、1.294~2.030、0.020~0.027、0.167~0.235 mg/g。结论成功建立了潜阳育阴颗粒的UPLC指纹图谱和多成分定量方法,可用于提高和完善该制剂的质量控制标准;莫诺苷、马钱苷、二苯乙烯苷、哈巴俄苷等可能是影响该制剂质量的差异性成分。

金贝口服液指纹图谱及多成分定量研究

目的:建立金贝口服液药材提取原液-中间品-成品的指纹图谱,同时进行多种成分定量检测,为该产品生产工艺进程及成品质量控制提供有效方法及参考依据。方法:首次采用高效液相色谱法(HPLC)建立金贝口服液药材提取原液-中间品-成品指纹图谱和3指标成分定量分析方法,采用乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,对10批药材提取原液、中间品及成品进行检测,分别建立相应的HPLC指纹图谱,并对三者间进行相似度评价分析,同时对指纹图谱中多指标成分进行定量分析。结果:各批次药材提取原液、中间品、成品各自相似度均在0.9以上,质量稳定;指认出绿原酸、黄芩苷、丹酚酸B 3种主要成分,方法学考察符合规定,相对保留时间和相对峰面积RSD%均小于3.0%。结论:该方法简便快捷,重现性好,为金贝口服液药材提取原液-中间品-成品提供了一套准确有效、切实可行的质量标准,从而能有效地用于金贝口服液生产进程中的质量监控及产品质量评价。

知母栽培品和野生品的指纹图谱建立及差异性成分确认

目的建立知母栽培品和野生品的指纹图谱,确认两者的差异性成分。方法采用蒸发光散射检测器,以高效液相色谱法结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立14批知母栽培品和14批知母野生品的指纹图谱,并进行相似度评价,通过与混合对照品色谱图比对指认共有峰。同法测定知母栽培品和野生品中指认共有峰对应成分的含量,通过主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析确认两者的差异性成分,并比较其含量。结果在28批知母药材中共有10个共有峰,指认出新芒果苷(峰1)、芒果苷(峰2)、异芒果苷(峰3)、知母皂苷BⅡ(峰7)、知母皂苷BⅢ(峰8)、知母皂苷Ⅰ(峰9)、知母皂苷AⅢ(峰10)7个成分;各样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均不低于0.963。知母栽培品与野生品中7个成分的平均总含量分别为74.18、84.72 mg/g,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。知母栽培品与野生品可被分为两类,差异性成分为新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ(变量投影重要性值均大于1)。知母栽培品中新芒果苷含量明显高于野生品(P<0.05),芒果苷、知母皂苷BⅡ和知母皂苷AⅢ含量均明显低于野生品(P<0.05)。结论成功建立了知母的指纹图谱,并初步确认了知母栽培品和野生品的差异性成分。

以人参皂苷为例探讨浓度对一测多评法定量准确性的影响

目的:以人参皂苷为例探究内参物与待测成分浓度比对一测多评方法定量准确性的影响。方法:利用超高效液相色谱法(UPLC),采用外标法对人参中9种成分,人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rh1、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd进行定量。以人参皂苷Rg1为内参物,采用一测多评法测定其余8种成分含量,并与外标法的定量结果比较,评估所建立的一测多评法的定量准确性。根据这9种人参皂苷的含量,用对照品配制人参皂苷Rg1与人参皂苷Rf、Rb2、Rd质量浓度比为100∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、0.5∶1、0.25∶1的模拟样品溶液,验证内参物与其他成分的浓度差异对一测多评法定量准确性的影响。结果:一测多评法和外标法计算得到的人参样品中人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2的含量结果一致[相对标准偏差(RSD)<3%],但2种方法计算得到的人参皂苷Rh1、Rb3、Rd的结果差异较大,RSD 7.06%~9.61%。经模拟样品溶液的验证,当内参物人参皂苷Rg1与待测成分浓度比为5或10甚至更高时,外标法和一测多评法计算结果差异较大。结论:定量成分与内参物浓度差异过大会增大一测多评法的定量误差,故建议在建立一测多评方法时,应选择与内参物浓度接近的成分进行定量。

一测多评法在食品研究中的应用进展

一测多评法作为一种多成分质量评价新方法,已在食品的多成分检测中得到了成功应用,特别是解决了多成分定量分析中对照品短缺和检测成本高的问题。本文主要综述了2012年以来,使用一测多评技术在食品检测方面的研究进展,同时针对一测多评技术应用中待测色谱峰的定位、低紫外吸收化合物的检测、不同类型化合物的检测等关键问题进行了探讨和展望,以期该方法越来越广泛地运用于食品科研和生产实践中。

银翘解毒丸质量评价方法研究

目的建立银翘解毒丸指纹图谱及多成分同时定量分析法,为其质量控制及评价提供技术支持。方法采用高效液相色谱-二极管阵列(HPLC-DAD)法建立指纹图谱,并同时测定绿原酸、连翘酯苷A、牛蒡苷3个指标性成分的含量,对26批银翘解毒丸进行分析;采用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法初步筛查山银花替代金银花非法投料情况。结果银翘解毒丸指纹图谱中标定了15个共有峰,相似度为0.709~0.997;聚类分析结果显示,指纹图谱相似度为0.85以下的样品为质量存疑。26批样品中有5批质量存疑;2批绿原酸及牛蒡苷的含量极低,3批连翘酯苷A的含量极低,质量分析结果与指纹图谱结果具有一致性。26批样品中,山银花阳性检出3批,阳性检出率为11.54%。结论该方法准确、可靠,可检测不按标准投料、非法投料等问题,可用于银翘解毒丸的质量控制及评价。

黄芩水煎液中化学成分的定性及定量研究

目的 分析黄芩Scutellaria baicalensis水煎液中的化学成分,并对其中的主要成分进行定量研究,为黄芩质量标准的建立和进一步研究提供参考依据。方法 定性分析采用UHPLC LTQ-Orbitrap MS技术,0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,分析化合物的精确相对分子质量及碎片离子信息。通过对照品对比、分析化合物质谱裂解碎片推测未知物。定量分析采用HPLC-UV技术,1%乙酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,测定10批黄芩中主要成分含量。结果 从黄芩水煎液中分析鉴定了86种化合物,含65个黄酮、11个有机酸、7个氨基酸、2个苯乙醇苷、1个其他类化合物。对黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、汉黄芩素及千层纸素A进行了含量测定,结果表明黄芩不同批次之间的黄酮类成分含量有一定差异,但6个黄酮的总量相对稳定(18.09%~25.33%,RSD为9.95%)。结论 全面分析了黄芩水煎液的化学成分,并建立了6个黄酮成分的定量分析方法,可为黄芩的质量控制和质量标准建立提供数据参考。

香菊片质量控制研究

目的建立香菊片的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,以及同时测定其中9种主要功效成分(没食子酸、绿原酸、咖啡酸、升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、迷迭香酸、蒙花苷、甘草酸铵)含量的方法。方法色谱柱为Kromasill00-5-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为40℃,进样量为5μL。结果香菊片的HPLC指纹图谱共标定18个共有峰,指认了其中9个指标成分,各批次样品与指纹图谱共有模式的相似度均大于0.950。没食子酸、绿原酸、咖啡酸、升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、迷迭香酸、蒙花苷、甘草酸铵的质量浓度分别在各自线性范围内与峰面积线性关系良好(R2≥0.9983,n=6);检测限介于0.011~0.053 ng,定量限介于0.037~0.192 ng;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%(n=6);平均加样回收率介于100.24%~100.70%,RSD介于0.20%~0.53%(n=6)。结论该方法操作简便,结果准确,重复性和稳定性均较好,可用于香菊片的质量控制。

仙茅中酚苷类成分高效液相色谱法测定方法的建立

目的建立同时测定仙茅中多种酚苷类化合物的HPLC方法。方法 Angilent 1100高效液相色谱仪,Zorbax SB C18色谱柱;检测波长:230 nm;柱温:30℃;进样量20μL;流速1 mL.min-1;流动相:乙腈(A)-0.1%醋酸水溶液(B),梯度洗脱程序为:0～25 min,4%～6%A;25～58 min,6%～17%A;58～85 min,17%～22%A。结果 8种酚苷成分5-羟甲基糠醛(1),2-羟基-5-(2-羟乙基)苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),苔黑酚龙胆二糖苷(3),苔黑酚葡萄糖苷(4),苔黑酚-1-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),2,6-二甲氧基苯甲酸(6),仙茅苷(7)和仙茅素A(8)的质量浓度和峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率符合含量测定要求。结论该方法简便、灵敏、重复性好,适用于同时测定仙茅中多种酚苷类成分。