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遵义地区淋病奈瑟菌多抗原序列分型及耐药性分析 被引量:6
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作者 黄健 黄美容 +4 位作者 於薇 黄娅娅 陈泽慧 陈安林 闵迅 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期796-798,800,共4页
目的了解遵义地区淋病奈瑟菌(NG)流行的分子型别及耐药特征。方法用淋病奈瑟菌多抗原序列分型(NG-MAST)法对2013年遵义医学院附属医院分离的65株NG进行基因分型。同时用琼脂稀释法测定NG对青霉素、阿奇霉素等6种抗菌药物的最低抑菌浓度(... 目的了解遵义地区淋病奈瑟菌(NG)流行的分子型别及耐药特征。方法用淋病奈瑟菌多抗原序列分型(NG-MAST)法对2013年遵义医学院附属医院分离的65株NG进行基因分型。同时用琼脂稀释法测定NG对青霉素、阿奇霉素等6种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果 NG-MAST分型鉴定出37种ST型别,其中15种为新发现ST型别,包含≥2株细菌的簇群有9个,最大的簇群是ST3285。药敏结果显示,本地区流行的NG对环丙沙星、四环素、青霉素、阿奇霉素、大观霉素的耐药率分别为96.9%、92.3%、67.7%、3.1%、1.5%;未发现对头孢曲松耐药的菌株。NG的耐药模式以同时对青霉素、环丙沙星和四环素耐药的多重耐药株为主,占52.3%。结论 ST3285、ST2083、ST1768、ST1766等NG簇群为遵义地区流行的主要基因型别,需加强对相应菌株的流行趋势及耐药特征的定期监测。本地区流行的NG对阿奇霉素、大观霉素、头孢曲松的敏感性较好,可以推荐这些药物作为淋病的治疗药物。 展开更多
关键词 淋病奈瑟菌 多抗原序列分型 耐药性
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Rh血型D抗原弱表现型基因分型和序列分析 被引量:2
2
作者 邵超鹏 苏宇清 杨渝珍 《华中医学杂志》 CAS 2000年第6期293-295,共3页
目的 探讨 Rh血型 D抗原弱表现型 D抗原数目和 (或 ) D抗原表位数减少形成的分子基础。方法 常规 PCR技术检测 3名 D抗原弱表现型非血缘关系个体 D基因的第 4内含子 ,多重 PCR技术分析第 3、第 6和第 9外显子 ,并分别对 3名个体的 D... 目的 探讨 Rh血型 D抗原弱表现型 D抗原数目和 (或 ) D抗原表位数减少形成的分子基础。方法 常规 PCR技术检测 3名 D抗原弱表现型非血缘关系个体 D基因的第 4内含子 ,多重 PCR技术分析第 3、第 6和第 9外显子 ,并分别对 3名个体的 D基因部分序列进行分析。结果  3名 D抗原弱表现型个体 D基因第 4内含子 ,第 3、第 6和第 9外显子检测结果与正常 D基因完全一致 ,部分序列分析未发现基因突变和 D/CE基因交换。结论  D抗原数目和 (或 ) D抗原表位数的减少造成其血清学弱表现型可能与 展开更多
关键词 D基因 D抗原 RH血型 基因分型 序列分析
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西安市与上海市百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性、耐药相关分子特征及多位点抗原序列分型的比较研究 被引量:9
3
作者 张娟胜 张弟强 +4 位作者 林晨 常玲 马超锋 陈保忠 耿毛 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期691-696,共6页
目的 比较西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性、耐药相关分子特征及多位点抗原序列分型(MAST)特征,为改进我国百日咳的防治和疫苗策略提供参考。方法 采用E-test法检测2018年至2019年西安市和上海市临床分... 目的 比较西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性、耐药相关分子特征及多位点抗原序列分型(MAST)特征,为改进我国百日咳的防治和疫苗策略提供参考。方法 采用E-test法检测2018年至2019年西安市和上海市临床分离百日咳鲍特菌对红霉素、阿奇霉素、克拉霉素的耐药性;采用PCR法检测可水平转移的耐药基因与耐药相关突变位点;采用MAST方法对菌株进行分型,比较两市菌株耐药性的差异及抗原序列型别构成比的差异。结果 本研究共分离出百日咳菌株60株,其中西安市34株,上海市26株。西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性存在统计学差异(χ^(2)=13.650,P<0.001)。两市菌株MAST分型型别构成比也存在统计学差异(χ^(2)=18.642,P<0.001),西安市菌株以prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1型别为主,而上海市prn1/ptxP1/ptxA1/fim3-1/fim2-1与prn2/ptxP3/ptxA1/fim3-1/fim2-1型别几乎各占一半。两市所有耐药株均检出A2047G位点突变,所有敏感株均未检出该突变;耐药基因中,部分耐药株检出甲基化酶基因ermA和ermB,未检出其他耐药基因;所有敏感株均未发现耐药基因和位点突变。结论 西安市与上海市临床分离百日咳鲍特菌对大环内酯类抗生素的耐药性存在差异,两市菌株MAST型别分布亦存在差异,应进一步加强中国百日咳菌株耐药性和基因型演变的监测。 展开更多
关键词 百日咳鲍特菌 大环内酯耐药性 基因型 分子特征 多位点抗原序列分型
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人类血小板抗原HPA-15系统PCR-SSP基因分型技术的建立 被引量:5
4
作者 陈悦康 李大成 +2 位作者 王大明 李茜 邓志辉 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期185-188,共4页
本研究目的是采用PCR-SSP技术建立人类血小板抗原HPA-15系统的基因分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。采用第11届国际输血协会(ISBT)血小板血清学与基因分型协作组推荐的序列特异性引物,调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最... 本研究目的是采用PCR-SSP技术建立人类血小板抗原HPA-15系统的基因分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。采用第11届国际输血协会(ISBT)血小板血清学与基因分型协作组推荐的序列特异性引物,调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-15系统基因分型技术。该分型技术的准确性和可靠性,采用第11届ISBT血小板协作组提供的质控样本进行验证,同时采用本研究合成的引物及商品化试剂盒,对50名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,作为平行对照。应用本研究的方法,对第11届ISBT送检的10份考核样本进行基因分型。结果表明:基因分型结果与ISBT公布的结果完全一致。50名随机的血小板志愿捐献者,经本研究的方法及美国G&T公司的试剂检测,基因分型的结果相符合;观察到的基因频率:HPA-15a和-15b分别为0.5100和0.4900。结论:本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 人类血小板抗原 HPA-15系统 序列特异性引物-PCR 基因分型
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人类血小板抗原1~6系统同步基因分型的研究 被引量:6
5
作者 邓志辉 吴国光 李大成 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期594-598,共5页
为研究采用PCR SSP技术,建立可靠的人类血小板抗原HPA 1,2,3,4,5,6系统的同步基因分型方法,并以所建立的方法研究血小板抗原。设计合成18条序列特异性引物,探索最佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+离子浓度,使HPA 1~6系统等位基因在... 为研究采用PCR SSP技术,建立可靠的人类血小板抗原HPA 1,2,3,4,5,6系统的同步基因分型方法,并以所建立的方法研究血小板抗原。设计合成18条序列特异性引物,探索最佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+离子浓度,使HPA 1~6系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳。引物的特异性和灵敏度采用基因型已知的质控DNA进行验证。应用此方法,对2000年度国际输血协会(ISBT)第十届血小板基因定型与血清学工作组送检的15份考核样本(其中血样2份,DNA样本13份)进行了基因分型。用此方法检测质控DNA,结果与已知的HPA基因型完全相符;15份第十届血小板基因定型与血清学工作组的考核样本的检测结果,与ISBT公布的结果完全相同,准确率达100%。 展开更多
关键词 序列特异性引物-PCR 人类血小板抗原 基因分型
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中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原的高分辨分型 被引量:5
6
作者 程良红 邹红岩 +5 位作者 高素青 金士正 李桢 周丹 张姝颖 吴国光 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第26期102-104,共3页
目的:通过对异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原-A,B,DRB1基因的序列分析,探讨中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原高分辨分型的必要性。方法:实验于2000-08/2004-03在深圳市血液中心完成。供者和受者11... 目的:通过对异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原-A,B,DRB1基因的序列分析,探讨中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原高分辨分型的必要性。方法:实验于2000-08/2004-03在深圳市血液中心完成。供者和受者114对的血样分别来源中华骨髓库和各移植医院,供者和受者均签署知情同意书。采用聚合酶链式反应-测序分型技术对114对中国汉族无关供受者间的人类白细胞抗原-A,B,DRB1等位基因进行序列分析,观察中国汉族无关供受者对间等位基因水平的配合率、各等位基因家族的配对分布和错配分布规律。某些位点的模棱两可结果,则通过相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物分型试剂进行分离并确认最后结果。结果:①高分辨与低分辨分型结果比较:114对无关供受者对中,110对人类白细胞抗原-A,B,DRB1的聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨(等位基因星号后两位数)DNA分型结果相吻合,4对聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨结果不相符。②供受者间人类白细胞抗原-A,B,DRB1高分辨配对分类结果:39%的中国汉族供受者对完全配合,但61%的供受者间存在至少一个等位基因的错配。③供受者间人类白细胞抗原-A,B,DRB1等位基因家族配对分布结果:3个座位的错配率分别为A(23%),B(10%),DRB1(17%);A和DRB1座位的错配比较集中,A座位仅见于A02,A11和A24家族,DRB1座位见于DRB104,DRB108,DRB112,DRB114和DRB115家族;而B座位的错配则比较分散,比较高的是B35,B48,B61和B62。④供受者间人类白细胞抗原-A,B,DRB1错配等位基因组合结果:3个座位的错配等位基因组合呈现较高的多样性,比较常见的几种组合为A0201/0207,A1101/1102,A0201/0206,A0203/0207,B4002/4006,DRB11201/1202和DRB11501/1502。结论:中国汉族异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原等位基因配合率低且其分布具有一定规律和特殊性,在移植前有必要对无关供受者对进行人类白细胞抗原高分辨分型。 展开更多
关键词 HIA抗原 造血干细胞移植 等位基因 聚合酶链反应 人类白细胞抗原-A 异基因造血干细胞移植 中国汉族 分型技术 聚合酶链式反应-序列特异性引物 高分辨
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应用完整外显子2/3序列解决HLA-DRB1座位基因分型的歧义结果 被引量:1
7
作者 李桢 杨鹃 +1 位作者 程良红 邹红岩 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第44期8308-8312,共5页
背景:人类白细胞抗原基因测序分型中,当等位基因的差异碱基位于测序范围之外或不同等位基因对的杂合序列相同时,无法得到清晰的结果。目的:通过完整外显子2/3序列的测定,解决常规HLA-DRB1基因分型中的高比例歧义结果。方法:初次分型采... 背景:人类白细胞抗原基因测序分型中,当等位基因的差异碱基位于测序范围之外或不同等位基因对的杂合序列相同时,无法得到清晰的结果。目的:通过完整外显子2/3序列的测定,解决常规HLA-DRB1基因分型中的高比例歧义结果。方法:初次分型采用常规的测序方法检测320份样本的HLA-DRB1外显子2第一高变区以外的序列,测序反应设置codon86。后期采用一次性扩增外显子2/3,测序反应针对外显子2设置组特异性引物:DRB1*04/07/09为一组,其它基因家族为一组,设置conden86,对初次分型后为歧义结果的样本重新分型。结果与结论:初次分型有180份样本为歧义结果,占总样本数的56.25%。其中A类为差异碱基位于测序范围之外,共114例;B类为等位基因对的杂合序列相同,共17例;C类为两种情况同时存在,有49例。3种类别的歧义等位基因数分别为119个、34个、98个,占等位基因总数的33.06%、9.44%、27.22%。完整外显子2/3序列的测定使歧义结果比例从56.25%下降到14.37%,其中A类103例、B类8例、C类23例样本的等位基因得到确认。此次研究中发现了一个新等位基因,与跟它最相近的等位基因DRB1*110101相比,其外显子3的第381位碱基G>T,导致第98位氨基酸AAG(赖氨酸Lys)>AAT(天冬酰氨Asn)。序列已提交Genbank,编号HM807583,2010-08被世界卫生组织HLA因子命名委员会命名为HLA-DRB1*1197(编号HWS10010999)。提示,完整外显子2/3序列的测定能大幅降低歧义分型结果的比例。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原 聚合酶链式反应-基因测序分型 外显子 歧义等位基因 序列特异性引物
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应用PCR-SSP方法进行人类血小板抗原1~6系统的基因分型 被引量:4
8
作者 李大成 邓志辉 +2 位作者 张姝颖 李茜 吴国光 《江西医学检验》 2005年第4期291-294,共4页
目的研究采用PCR-SSP技术,建立人类血小板抗原1~6系统(HPA-1,2,3,4,5,6)的基因分型方法。方法合成18条序列特异性引物,通过调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-1~6系统同步基因分型技术。对第10届及第11届国际... 目的研究采用PCR-SSP技术,建立人类血小板抗原1~6系统(HPA-1,2,3,4,5,6)的基因分型方法。方法合成18条序列特异性引物,通过调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-1~6系统同步基因分型技术。对第10届及第11届国际输血协会(ISBT)血小板基因定型协作组送检的考核样本进行盲检来验证。并应用该技术对198名深圳地区健康的血小板志愿捐献者进行基因分型。结果应用本研究的方法,对第10届及第11届ISBT送检的考核样本进行基因分型,结果与ISBT公布的结果完全一致,符合率达100%。对198名随机的血小板志愿捐献者观察到的基因频率分别是:HPA-1a和1b为0.9924和0.0076,HPA-2a和2b为0.9545和0.0455,HPA-3a和3b为0.5556和0.4444,HPA-4a和4b为0.9975和0.0025,HPA-5a和5b为0.9848和0.0152,HPA-6a和6b为0.9798和0.0202。结论本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 人类血小板抗原 序列特异性引物-PCR(PCR—SSP) 基因分型
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自行构建人类白细胞抗原DQA1位点基因分型寡核苷酸芯片性能评价:100例样本与PCR-SSP法的比较
9
作者 王彤 王天骄 +1 位作者 彭莉 王杰 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第44期8245-8248,共4页
背景:人类白细胞抗原等位基因分型对器官移植和法医鉴定等有重要意义。目前的分型方法难以实现高通量和集成化,准确性和重复性也不理想。目的:比较自行构建的寡核苷酸芯片与序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with... 背景:人类白细胞抗原等位基因分型对器官移植和法医鉴定等有重要意义。目前的分型方法难以实现高通量和集成化,准确性和重复性也不理想。目的:比较自行构建的寡核苷酸芯片与序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCR-SSP)两种方法用于人类白细胞抗原DQA1基因分型的结果,以评价寡核苷酸芯片的性能。方法:纳入2006-01/2009-03于中国医科大学附属第一医院血液科门诊就诊的患者100例。分别用等位基因特异的PCR-SSP和自行构建的寡核苷酸芯片对患者的人类白细胞抗原DQA1进行分型。寡核苷酸芯片分型采用荧光标记的组间特异性引物扩增基因组DNA,扩增后的产物与分型芯片的探针杂交,由杂交产生的荧光信号确定人类白细胞抗原DQA1位点基因型。比较两种方法分型所获得的结果,不吻合的样本经第三方测序验证。结果与结论:100例临床样本经寡核苷酸芯片和PCR-SSP分型全部成功。分型结果的吻合率为94%。不吻合样本6例,其中4例PCR-SSP定型为杂合子,芯片分型全部为纯合子。经第三方验证,证实芯片的分型全部正确。另外2例不吻合的样本经测序,证实SSP分型错误1例,芯片分型错误1例。芯片的重复率为95%。说明自行构建的寡核苷酸芯片的特异性和灵敏度都能满足基因分型的需要,且稳定性较好。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原DQA1 寡核苷酸芯片 序列特异性引物-聚合酶链反应 基因分型 细胞移植
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HLA-II类抗原基因分型PCR-SSP方法在ALLo-HSCT中的应用
10
作者 魏彩霞 杨绵本 +4 位作者 李玛琳 景强 黎承萍 杨弘 肖敏 《昆明医学院学报》 2002年第1期48-51,共4页
准确的HLA配型是异基因造血干细胞移植 (Allo -HSCT)成功的关键之一 ,经典的血清学方法用于HLA -II类抗原的配型因存在诸多不足可导致漏配或错配 ,为了克服血清学方法的种种不足 ,我们建立了HLA -II类聚合酶链反应 -序列特异性引物 (PCR... 准确的HLA配型是异基因造血干细胞移植 (Allo -HSCT)成功的关键之一 ,经典的血清学方法用于HLA -II类抗原的配型因存在诸多不足可导致漏配或错配 ,为了克服血清学方法的种种不足 ,我们建立了HLA -II类聚合酶链反应 -序列特异性引物 (PCR -SSP)基因配型方法 .此方法可避开血清学方法的种种干扰 ,直接从基因水平检测HLA的个体遗传学差异 .结果表明 :PCR -SSP方法具有重复性好、特异性强、灵敏度高、实验结果易于判断等特点 ,对于Allo -HSCT选择理想供者 ,减少或减轻Allo -HSCT时GVHD的发生 ,有着至关重要的意义 .可满足Allo -HSCT对HLA配型准确性高的要求 ,为在同胞兄弟姐妹间和无血缘关系供 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 聚合酶链反应-序列特异性引物 HLA-Ⅱ类抗原 基因分型 血清学 PCR-SSP 恶性血液病 ALL0-HSCT
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汉坦病毒抗原性差异及其基因分型 被引量:10
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作者 柯正 宋干 +2 位作者 杭长寿 霍子威 李盈盈 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期34-39,共6页
用抗汉坦病毒单克隆抗体(McAb)对汉坦病毒B78株(来自病人血)和R178株(分离自褐家鼠)进行间接免疫荧光试验,以分析病毒的单克隆抗体反应谱,又用病毒免疫血清进行交叉中和试验,结果表明,两株病毒均具有双型(Ⅰ型/... 用抗汉坦病毒单克隆抗体(McAb)对汉坦病毒B78株(来自病人血)和R178株(分离自褐家鼠)进行间接免疫荧光试验,以分析病毒的单克隆抗体反应谱,又用病毒免疫血清进行交叉中和试验,结果表明,两株病毒均具有双型(Ⅰ型/HTN型和Ⅱ型/SEO型)反应特征,但R178株基本上属于Ⅰ型。用汉坦病毒Ⅰ-Ⅳ型型特异性引物进行PCR扩增,B78株用Ⅰ型和Ⅱ型引物均得到特异性扩增,而R178株虽经重复扩增均未见特异性扩增片段。初步认为,B78株和R178株可能是发生在宿主转换(野鼠→家鼠)过程中介于Ⅰ型和Ⅱ型之间的过渡型变异株,而这类双型病毒在自然界中可能比较常见。这对阐明汉坦病毒的变异规律及广谱抗原性毒株的研制具有一定的理论和实际意义。 展开更多
关键词 汉坦病毒 变异 抗原性变异 序列分析 基因分型
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基于PCR-序列分析法检测浙江省汉族人群HLA-E基因多态性
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作者 董丽娜 何亿镇 +2 位作者 和艳敏 章伟 朱发明 《浙江医学》 CAS 2024年第24期2602-2606,共5页
目的建立并使用PCR-序列分析法分析浙江省汉族人群人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因的多态性。方法随机选取2024年2至4月浙江省血液中心获捐的150例血小板献血者的外周血样本,抽提标本基因组DNA并采用PCR法扩增HLA-E基因全长序列,利用Sange... 目的建立并使用PCR-序列分析法分析浙江省汉族人群人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因的多态性。方法随机选取2024年2至4月浙江省血液中心获捐的150例血小板献血者的外周血样本,抽提标本基因组DNA并采用PCR法扩增HLA-E基因全长序列,利用Sanger测序分析HLA-E基因的第2~4号外显子序列,采用Assign SBT v4.7.1专业软件确定HLA-E基因型。结果150例浙江省汉族人群外周血标本共检出4种HLA-E基因型,HLA-E*01:01,01:01、HLA-E*01:01,01:03、HLA-E*01:03,01:03、HLA-E*01:03,01:12基因型的频率分别为14.00%、51.33%、32.67%、2.00%;等位基因HLA-E*01:01、HLA-E*01:03、HLA-E*01:12的频率分别为39.67%、59.33%、1.00%。结论PCR-序列分析法以Sanger测序为基础,可实现HLA-E基因分型。浙江省汉族人群HLA-E基因高度保守,多态性较低,仅检出3种HLA-E等位基因。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原-E 基因分型 多态性 PCR-序列分析法
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PCR-SSP/PCR-SBT-HLA高分辨等位基因分型比较 被引量:11
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作者 黄飞 肖露露 +1 位作者 阎文瑛 钱小兵 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B03期21-24,共4页
【目的】为了预测无关捐献者干细胞移植(HSCT)后GVHD的发生及程度和选择相容的干细胞捐献者,通过同时采用PCR-序列特异性引物扩增技术(sequence specific primer,PCR-SSP)和PCR-直接碱基序列分析基因分型技术(sequence based genotyping... 【目的】为了预测无关捐献者干细胞移植(HSCT)后GVHD的发生及程度和选择相容的干细胞捐献者,通过同时采用PCR-序列特异性引物扩增技术(sequence specific primer,PCR-SSP)和PCR-直接碱基序列分析基因分型技术(sequence based genotyping,PCR-SBT)的方法,提高HLA基因分型的准确性和分辨水平。【方法】采用PCR-SSP和PCR-SBT分别对57份捐献者血样进行HLA-A、B和DRB1位点的高分辨等位基因分型(即识别基因的编码达到*后4位数)。【结果】PCR-SBT实验中有27份DNA的基因分析结果模棱两可,PCR-SSP实验中有10份DNA的基因分析结果模棱两可。经两种方法相互佐证实验后,57份样本均获得结果一致、清楚和精确的HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型。【结论】PCR-SSP和PCR- SBT是HLA高分辨基因分析的标准方法,两种方法具有实验互补意义,若同时应用两种方法能够有效改善HLA等位基因高分辨分型的准确性和重复一致率。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原 序列特异性引物扩增 直接碱基序列分析 高分辨基因分型
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应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立 被引量:4
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作者 黄以宁 廖灿 +3 位作者 汤雪薇 李焱 谢杏梅 曾瑞萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期148-152,共5页
HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快... HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取 6 3份已知HLA DRB型的脐血标本 ,经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交 (RDB)基因分型 ,同时采用SSOP和PCR SSP方法进行比较。结果表明 ,所有样本用RDB方法基因分型均获得成功 ,可准确地分辨 6 0个HLA DRB等位基因 ,且结果与用SSOP和PCR SSP方法的结果完全一致。结论提示 ,RDB方法可准确地分辨HLA DRB等位基因 ,分辨率高 ,操作简单 。 展开更多
关键词 反向斑点杂交技术 HLA-DRB基因分型 脐血 特异性序列引物PCR 序列特异性寡核苷酸探针 白细胞抗原
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河南汉族人群血小板抗原HPA1-16bw基因多态性研究 被引量:7
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作者 滑世轩 王书勤 +1 位作者 岑东 燕备战 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期545-547,共3页
目的研究河南地区汉族人群血小板抗原基因分布频率,建立地区性血小板抗原基因库,为血小板配合输注提供实验依据。方法用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对160例无血缘关系的河南汉族体检健康者进行HPA1-16bw系统基因分型。结果 HPA... 目的研究河南地区汉族人群血小板抗原基因分布频率,建立地区性血小板抗原基因库,为血小板配合输注提供实验依据。方法用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对160例无血缘关系的河南汉族体检健康者进行HPA1-16bw系统基因分型。结果 HPA1-6和HPA-15基因频率分别为1a 0.987 5,1b 0.012 5;2a 0.946 9,2b 0.053 1;3a 0.590 6,3b0.409 4;4a 0.996 9,4b 0.003 1;5a 0.990 6,5b 0.009 4;6a 0.981 2,6b 0.018 8;15a 0.540 6,15b 0.459 4。HPA7-14bw,16bw仅检测到a/a等位基因,基因频率均为1.000 0。经χ2检验各系统HPA符合Hardy-Weinberg平衡法则。HPA基因分布存在种族和地区差异。结论河南汉族人HPA-15和HPA-3基因型杂合率最高。HPA基因分型有助于输注血小板时降低免疫性血小板减少症的发生概率。 展开更多
关键词 人类血小板抗原 序列特异性引物聚合酶链反应 基因分型 基因频率
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阿奇霉素耐药及头孢曲松低敏淋球菌基因分型与多态性研究 被引量:2
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作者 黎小东 梁景耀 +5 位作者 毕超 杨日东 李平 梁艳华 张锡宝 曹文苓 《国际检验医学杂志》 CAS 2017年第11期1495-1498,1501,共5页
目的分析广州地区阿奇霉素耐药及广谱头孢菌素低敏淋球菌基因分型和基因多态性特征。方法检测阿奇霉素(AZM)和头孢曲松(CRO)最小抑菌浓度(MIC)。检测AZM耐药(AZM-R)淋球菌23SrRNA、多重可传递耐药调节(mtrR)基因和青霉素结合蛋白2(PBP2... 目的分析广州地区阿奇霉素耐药及广谱头孢菌素低敏淋球菌基因分型和基因多态性特征。方法检测阿奇霉素(AZM)和头孢曲松(CRO)最小抑菌浓度(MIC)。检测AZM耐药(AZM-R)淋球菌23SrRNA、多重可传递耐药调节(mtrR)基因和青霉素结合蛋白2(PBP2)编码基因(penA)突变类型。采用淋球菌多抗原序列分型法(NG-MAST)检测菌株基因型。结果共检测淋球菌485株,包括AZM-R菌株(MIC≥1mg/L)77株(15.9%),其中AZM低度耐药(AZM-LLR,MIC=1mg/L)菌株33株(6.8%)、AZM中度耐药(AZM-MLR,MIC≥2mg/L)菌株44株(9.1%)。AZM-MLR菌株中CRO低敏(MIC≥0.125mg/L)菌株19株(占43.2%),构成比高于AZM-LLR菌株中的CRO低敏株(18.2%,P<0.05)。各类菌株间23SrRNA、mtrR、penA基因突变或联合突变检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。AZM-LLR与CRO低敏菌株,以及AZM-MLR与CRO低敏菌株间各类突变检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。未检出A2059G突变及AZM高度耐药株(MIC≥256 mg/L)。77株AZM-R菌株经NG-MAST检测,检出67株序列类型,其中30株有异常。多数序列类型表现为单一表型。结论该地区出现的AZM耐药及CRO低敏淋球菌值得持续监测和进一步研究,以明确其耐药机制。 展开更多
关键词 淋球菌 阿奇霉素 抗菌药物耐药性 多抗原序列分型
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低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP基因分型在骨髓移植中的应用 被引量:2
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作者 郑黎燕 孔繁华 +5 位作者 屠敏 金荔 陈兴国 奚永志 郭斯启 刘楠 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期142-147,共6页
为满足临床骨髓移植对HLA配型的要求,本研究采用先进、快速的DNA提取方法和低分辨率与高分辨率HLA-ⅡPCR—SSP分型方法,对150例临床骨髓移植供、受者进行HLA-Ⅱ类分型研究,并且对分型方法进行了改进,建立了随时间释放DNA聚合酶活性... 为满足临床骨髓移植对HLA配型的要求,本研究采用先进、快速的DNA提取方法和低分辨率与高分辨率HLA-ⅡPCR—SSP分型方法,对150例临床骨髓移植供、受者进行HLA-Ⅱ类分型研究,并且对分型方法进行了改进,建立了随时间释放DNA聚合酶活性的分型方法。结果表明:DNA提取方法可以满足微量HLA-Ⅱ类DNA分型方法对DNA样本的要求,200μl全血DNA产量为4—12μg,A260/A280为1.7~1.9。低分辨率和高分辨率HLA-Ⅱ类PCR-SSP均具有良好稳定性、可靠性和准确性。低分辨率HLA-Ⅱ类PCR—SSP方法耗时1.5小时,适用于同胞兄弟姐妹间的骨髓移植配型。高分辨率HLA-Ⅱ类亚型PCR-SSP分型方法耗时2小时50分钟,适用于同胞兄弟姐妹间骨髓移植配型的特殊病例和无血缘关系骨髓移植供、受者间的配型。本研究的分型方法对于推动我国骨髓移植工作的开展和未来的发展均具有重要的意义。 展开更多
关键词 骨髓移植 HLA-Ⅱ类抗原 聚合酶链反应-序列特异性引物 基因分型 组织相容性
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HLA-C基因分型与皖籍汉族人寻常性银屑病关系的研究 被引量:3
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作者 张安平 张学军 朱文元 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2003年第2期73-75,78,共4页
目的 探讨皖籍汉族人寻常性银屑病 (PsV )与HLA C等位基因的相关性。方法 运用聚合酶链反应 -序列特异性引物 (PCR SSP)法 ,对 166例皖籍PsV患者和 2 48例健康对照进行HLA C基因分型。结果 ①PsV患者组HLA Cw 0 60 2等位基因频率较... 目的 探讨皖籍汉族人寻常性银屑病 (PsV )与HLA C等位基因的相关性。方法 运用聚合酶链反应 -序列特异性引物 (PCR SSP)法 ,对 166例皖籍PsV患者和 2 48例健康对照进行HLA C基因分型。结果 ①PsV患者组HLA Cw 0 60 2等位基因频率较对照组显著升高 (OR =4.13 ,95 %可信限 2 .3 8~ 7.16,Pc <0 .0 1) ,但HLA Cw 0 3 0 4等位基因频率则较对照组明显减低 (OR =0 .3 2 ,95 %可信限 0 .17~ 0 .60 ,Pc <0 .0 1) ;②早发型PsV (I型银屑病 )及有PsV家族史患者携带HLA Cw 0 60 2等位基因频率分别高于迟发型PsV (II型银屑病 )及无PsV家族史患者 (OR =4.3 2 ,95 %可信限 2 .44~ 7.67,Pc <0 .0 1和OR =13 .2 8,95 %可信限 6.12~ 2 9.11,Pc <0 .0 1)。结论 皖籍汉族人PsV与HLA Cw 0 60 2等位基因高度关联 ,且携带该等位基因的个体易发生早发型银屑病 ,并有家族倾向性。 展开更多
关键词 基因分型 皖籍 汉族人 寻常性银屑病 人类白细胞抗原 聚合酶链反应-序列特异性引物
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HLA-Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析 被引量:2
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作者 武大林 凌汉新 +1 位作者 丁红 张怡 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期247-249,共3页
目的验证微量序列特异性引物(SSP)技术进行HLA-Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法采用聚合酶链反应结合微量SSP技术(简称微量PCR-SSP法)以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果... 目的验证微量序列特异性引物(SSP)技术进行HLA-Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法采用聚合酶链反应结合微量SSP技术(简称微量PCR-SSP法)以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果(1)微量PCR-SSP法检测的110例样本中,99例检出HLA-DR的396个等位基因、11例检出HLA-DQ的22个等位基因,检出10%的单倍型个体;(2)两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误或漏检率较高,其误差在DR和DQ分别为38.81%和50.75%;(3)错误发生和易混淆的抗原为:DR15/16、11/12、13/14、8、12和DQ5/6、8/9。结论微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 序列特异性引物 人类白细胞抗原-Ⅱ类 等位基因分型 单克隆抗体 SSP法 移植配型 HLA-Ⅱ 基因分型 血清学分型
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对LABType~SSOP HD试剂的不确定HLA分型结果的分析 被引量:1
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作者 王东梅 王丽君 +7 位作者 倪蕾 崔爽 王琳 李伟 刘娜 赵波涛 单小燕 张志欣 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期752-753,共2页
目的总结使用LABType~流式磁珠反向杂交法(polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleoti-de probes,PCR-SSOP)高分试剂(high definition,HD)对人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)分型的经验,对其不确定结... 目的总结使用LABType~流式磁珠反向杂交法(polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleoti-de probes,PCR-SSOP)高分试剂(high definition,HD)对人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)分型的经验,对其不确定结果进行分析。方法用测序分型(sequencing-based typing,SBT)的方法对SSOP HD试剂HLA分型得到的不确定结果进行验证分析,比较两者之间的差别。结果 2种分型方法在低分水平上是完全一致的,在高分水平上仅1例不符,吻合率为98%,这50份验证样本的SSOP不确定分型结果中,12份样本的SSOP检测结果出现明显的磁珠假性反应,2份为SSOP不能区分的基因型,36份为HLA罕见型。结论用LABType~ SSOP HD试剂进行HLA高分辨分型的结果可靠,对稀有型和调整探针后的结果应进行验证,保证HLA基因分型结果的准确。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原 测序分型 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针法
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