鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

目的:从疑似禽霍乱的4只病死鸭的病料中分离并鉴定多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),并通过药敏试验筛选敏感药物用于治疗。方法:无菌采集肝脏组织病料,接种至普通营养琼脂、麦康凯及血琼脂培养基上进行病原菌的培养、分离纯化;对纯化后的分离菌进行革兰染色、镜检,提取其核酸作为模板,进行16S rRNA基因的PCR鉴定;圆纸片扩散试验测定分离菌株对18种抗菌药物的敏感程度。结果:在血琼脂培养基上分离菌株表现为稍微隆起、表面光滑、湿润、灰白色、露珠样、半透明的圆形菌落,但在普通营养琼脂和麦康凯培养基上不生长。革兰染色镜检显示分离菌为一种革兰染色阴性、菌体两端着色深、中间着色较浅的球状短小杆菌。PCR扩增16S rRNA出现1 500 bp的目的条带,其序列分析与Pm菌株Q的16S rRNA基因的相似性为99.86%;药敏试验表明,分离菌株对米诺环素敏感性最高,抑菌圈直径达19 mm,对四环素、强力霉素、庆大霉素、氨苄西林、头孢哌酮表现中度敏感,其他药物均为耐药。结论:本研究从一例疑似禽霍乱的病死鸭中分离鉴定出1株多杀性巴氏杆菌,分离菌株对米诺环素较为敏感,建议用于临床治疗。

两株兔源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及荚膜血清分型

为探明浙江省规模兔场主要传染病流行现状,明确其致病菌及血清型,开展了家兔流行病学调查与病原分离鉴定。调研发现,不少兔场存在以打喷嚏和鼻腔流出浆液性、黏液性或脓性分泌物为主要临床特征的呼吸道传染病,进而对浙江省家兔主产区发病严重兔场进行采样,从嵊州、宁波三家患病兔鼻腔中分离到两株病原菌,进行了病原分离鉴定、荚膜血清分型及药敏试验。根据分离菌的菌落形态、革兰氏染色特征、特异性PCR以及荚膜血清分型PCR鉴定结果,确定两株致病菌均为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,分别命名为ZJNB0321和ZJSZ0322。构建系统发育树,结果表明,两分离株属于同一分支,且与多杀性巴氏杆菌处于同一分支,并拥有独立的分支。药敏试验结果表明,不同地区分离株药敏特性不尽相同。研究结果为兔场合理用药及有效防控提供了科学依据。

牦牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为鉴定青海省某牦牛养殖合作社犊牦牛死亡病因,采集死亡犊牦牛的病料进行细菌分离鉴定及药敏试验。结果显示,从病死犊牦牛中分离获得1株A型多杀性巴氏杆菌;该分离株对呋喃唑酮等18种药物敏感,对磺胺甲基异噁唑和万古霉素耐药;耐药基因检测显示,该分离株携带磺胺类耐药基因sul1、四环素类耐药基因tetA与tetB及喹诺酮类耐药基因gyrA;动物致病性试验结果显示,该分离株具有较强毒力。研究结果可为牛巴氏杆菌病的防控提供参考。

1株牛源D:L3:L5型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及病原特性评价

【目的】通过探讨青海省西宁市某规模化奶牛场病死牛源多杀性巴氏杆菌的荚膜血清型、耐药性和毒力基因分布情况,为多杀性巴氏杆菌引起的牛呼吸道疾病的治疗和预防提供参考。【方法】对病死牛肺脏样本进行细菌分离,通过菌落观察和染色镜检、生化鉴定、特异性引物扩增、16S rRNA测序分析及系统发育树构建、荚膜血清及脂多糖分型、毒力基因检测、致病性试验和药敏试验对分离菌进行鉴定和病原特性评价。【结果】肺脏样本中分离得到的菌落呈现灰白色中间微凹陷的露珠样,未出现溶血环;革兰染色可见粉红色球杆菌;瑞氏染色可见两端浓染的蓝色球杆菌。生化鉴定结果显示,分离菌株D-葡萄糖、D-甘露醇、D-甘露糖、酪氨酸芳胺酶、磷酸酶、COURMARATE和ELLMAN反应结果为阳性;16S rRNA测序结果显示,分离菌株与多种多杀性巴氏杆菌相似性>95%,鉴定分离得到的菌株为多杀性巴氏杆菌,命名为XN222。荚膜血清分型及脂多糖分型结果显示,分离菌株XN222的荚膜血清分型为D型,其脂多糖分型为L3和L5型。毒力基因扩增结果显示,分离菌株XN222携带ptfA、fimA、hsf-2、sodA、tbpA、sodC等共计19种毒力基因。小鼠致病性试验结果显示,注射0.2 mL 1.5×10^(8)CFU/mL菌液,可导致100%(10/10)小鼠死亡,说明分离菌株XN222具有较强的致病能力。药敏试验结果显示,分离菌株XN222对头孢噻呋、左氧氟沙星、恩诺沙星、马波杀星、四环素和青霉素等15种抗菌药均敏感,对泰乐菌素中度敏感。【结论】本研究分离获得1株致病力较强的D型多杀性巴氏杆菌,该菌株的发现丰富了国内牛源多杀性巴氏杆菌亚型,可为多杀性巴氏杆菌引起的牛呼吸道疾病的防治、病原学调查和巴氏杆菌多价苗研制等提供生物素材。

牦牛源多杀性巴氏杆菌分离鉴定与药敏试验

本研究对刚察县沙柳河镇某养殖场中病死牦牛病料进行细菌的分离鉴定、PCR检测、分型鉴定以及药敏试验,结果于死亡牦牛病料组织中分离鉴定到荚膜A型脂多糖L3型多杀性巴氏杆菌,该菌株对多粘菌素、多粘菌素B、诺氟沙星、左氧氟沙星、阿莫西林、氨苄青霉素、头孢唑林、呋喃妥因、恩诺沙星、红霉素、四环素、氧氟沙星、头孢唑林/先锋霉素、阿莫西林—克拉维酸共14种药物敏感;对新生霉素、万古霉素、阿米卡星3种药物耐药;对强力霉素、氯霉素、庆大霉素中敏。该研究为本地区流行菌株疫苗研制以及药物防治提供了参考。

我国中东部主要养猪地区死亡育肥猪呼吸道病原菌的流行病学调查及猪多杀性巴氏杆菌的特性鉴定

【目的】从我国中东部主要养猪地区因呼吸道疾病死亡的育肥猪病料中分离主要病原菌,并进行鉴定和分型,为近年流行的猪呼吸道病原菌的防控治疗提供流行病学依据。此外,对分离的猪多杀性巴氏杆菌(Pm)特性进行鉴定,为Pm疫苗研制提供参考。【方法】收集2021-2023年我国中东部主要养猪地区规模化猪场因呼吸道疾病死亡的育肥猪的病猪肺脏;用血琼脂和TSA培养基分离病原菌,通过微生物学和分子生物学方法鉴定分离菌株;合成adk、est、gdh、mdh、pgi、pmi和zwf基因引物,以分离的Pm为模板进行PCR,通过测序7对管家基因对Pm进行MLST分型;通过PCR对Pm进行荚膜分型和脂多糖分型;通过PCR对Pm的毒力因子进行检测;在ICR小鼠对单一分离的A型和部分D、F型Pm进行毒力鉴定;检测JS-65、JS-51和JS-34在ICR小鼠的LD_(50)。【结果】共分离Pm 73株,分离率为15.53%;分离猪链球菌(SS)71株、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)29株和副猪格拉菌(GPS)10株,分离率分别为15.11%、6.17%和2.13%。分型结果表明,Pm主要为A:L3型,占55%;SS主要为9型,占38.03%;APP主要为15型,占51.72%;GPS主要为5/12型,占60%。混合感染包括Pm+SS,Pm+APP,SS+APP和Pm+APP+GPS,混合感染占总猪群的16.67%。共分离到3种Pm荚膜型:A(67%)、D(30%)和F(3%)型;2种脂多糖型:L3型(56%)和L6型(44%);9种ST分型:ST79、ST50、ST7、ST74、ST13、ST27、ST9、ST287和ST370,所占比例分别为33%、26%、16%、10%、4%、4%、3%、3%和1%。毒力基因检测结果表明:ptfA、fimA、hsf-2、exbB、exbD、tonB、fur、nanH、sodA和sodC的阳性率大于95%;hsf-1、pfhA、tadD、hgbA、hgbB、pmHAS、ompA、ompH、oma87和plpB阳性率在40%-90%之间;tbpA和nanB阳性率在10%-30%;未检出toxA。毒力鉴定结果表明A型菌株在剂量小于10^(2)CFU时导致小鼠全部死亡,D型菌株在10^(3)CFU剂量时小鼠死亡率为60%-100%,F型菌株在5×10^(3)CFU剂量时小鼠死亡率为60%。在ICR小鼠检测JS-65、JS-51和JS-34的LD_(50),结果表明JS-65 LD_(50)<10 CFU,JS-51 LD_(50)=6.3×10^(2)CFU,JS-34 LD_(50)=3.98×10^(3)CFU。【结论】2021-2023年我国中东部主要养猪地区病原菌分离结果表明,Pm、SS、APP和GPS是死亡育肥猪的主要呼吸道病原菌,Pm在肺脏中的分离率最高。采用RIRDC分型鉴定到一株ST370 Pm,拓展了猪Pm的MLST分型数据。Pm优势基因型为A:L3:ST79,其在ICR小鼠中毒力最强,最小致死量小于10 CFU,为后续Pm灭活疫苗研制奠定基础。

多杀性巴氏杆菌的分离鉴定和全基因组测序分析

多杀性巴氏杆菌(Pm)可感染多种动物,引起肺炎或全身性败血症,造成严重的经济损失。为鉴定河北昌黎县某肉牛养殖场导致牛大批病死的病原,本研究从病牛肺脏中分离到疑似Pm的菌株,对其进行革兰氏染色观察,16S rDNA基因的PCR扩增与序列分析,并对其荚膜和脂多糖进行PCR分型,PCR扩增其7个管家基因后分析分离菌的多位点序列分型(MLST)。结果显示,分离株为革兰氏阴性菌,与Pm的16S rDNA基因序列同源性达99.87%,表明分离到一株Pm。PCR分型鉴定结果显示其为血清B型和脂多糖L2型,MLST分型为ST44型,将该Pm分离株命名为PmB-1。将PmB-1以4.88 cfu/只经腹腔注射感染小鼠,进行致病性试验,结果显示PmB-1能引起小鼠内脏出血病变。采用IlluminaHiseq二代结合PacBio三代测序平台对PmB-1进行全基因组测序及生物信息学分析。结果显示,PmB-1基因组含1条染色质,长2 331 836 bp,编码2 141个基因,并含19个rRNA,58个tRNA和42个sRNA;含有3个前噬菌体、5个基因组岛,5个获得性免疫(CRISPR-Cas)系统、3个插入序列以及1个转座子元件。致病性预测分析结果显示,PmB-1含244个毒力相关基因,224个耐药基因,495个基因参与病原与宿主的互作,14个基因编码分泌系统蛋白,535个基因编码转运蛋白,190个基因编码分泌蛋白,499个基因编码跨膜蛋白,17个基因编码双组分调控系统。本研究分离到一株Pm,并对其进行小鼠致病性试验,全基因组测序和生物信息学分析,为预防Pm的感染、流行和研究其致病机制提供了参考依据。

广东鹅源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、耐药表型和耐药基因的检测及相关性分析

为了解广东地区鹅源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行情况、药物敏感性、耐药基因的携带情况以及耐药表型与耐药基因的相关性,本实验对2019年~2022年从广东地区采集的193份疑似感染Pm病鹅的心脏血液和肝脏组织划线接种于不同的培养基分离细菌,对分离菌纯化后采用PCR扩增分离菌的KMT1基因并测序,采用多重PCR扩增分离菌的5个荚膜基因及8个脂多糖基因,分析分离菌的荚膜分型与脂多糖(LPS)分型。结果显示分离到83株鹅源Pm,其中82株为荚膜A型,1株无法通过荚膜定型;LPS分型为L1型。采用K-B纸片扩散法检测分离菌的药物敏感性;通过PCR检测分离菌7类药物的15种耐药基因,包括β-内酰胺类(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)、bla_(OXA))、氨基糖苷类(aadA1、aph(3’)Ila)、喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS)、酰胺醇类(floR)、四环素类(tetM、tetX)、大环内酯类(ermF、ereD)、磺胺类(sul1、sul3)耐药基因。采用统计学软件SPSS22中的完全随机设计两样本率的卡方检验分析分离菌的耐药表型和相应耐药基因的相关性。药敏试验结果显示,83株鹅源Pm对多种药物敏感性较高,其中对喹诺酮类的环丙沙星和氧氟沙星、氨基糖苷类的丁胺卡那和大观霉素、β-内酰胺类的头孢曲松、磺胺类的复方新诺明、大环内酯类的阿奇霉素敏感的菌株占比均在63%以上;对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素耐药的菌株占比高于50%,对氨基糖苷类的新霉素和四环素类的四环素耐药的菌株分别占49.40%(41/83)和46.99%(39/83)。耐药基因的检测结果显示,分离菌检出耐药基因qnrB、sul3、blaTEM、aadA1、aph(3’)Ila、ereD、ermF、tetM、floR,检出率分别为9.63%(8/94)、27.71%(23/83)、28.92%(24/83)、48.19%(40/83)、14.46%(12/83)、49.40%(41/83)、3.61%(3/83)、1.20%(1/83)、32.53%(27/83),未检出耐药基因qnrA、qnrS、sul1、tetX、bla_(CTX-M)、bla_(OXA)。相关性分析结果显示,aadA1基因与Pm对新霉素、链霉素、卡那霉素、大观霉素的耐药性具有极显著的相关性(P<0.001);bla_(CTX-M)基因、floR基因分别与Pm对头孢拉定、氟苯尼考的耐药性具有显著相关性(P<0.05)。上述结果表明,广东地区鹅源Pm主要为A∶L1基因型,对多种药物敏感,耐药基因携带率不高,部分药物的耐药表型与耐药基因具有相关性。本研究为广东地区鹅源Pm病的监测和防治提供参考依据,为Pm耐药机制的研究奠定基础。

猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及药敏试验

试验从四川地区某猪场病死猪肺脏组织中分离细菌,并对其进行形态学观察、16S rRNA序列比对、菌种特异性与荚膜血清型鉴定、毒力基因检测、药敏试验以及动物回归试验。结果显示:在病猪肺脏组织中分离得到的细菌菌落形态呈现表面光滑、细小透明的露滴状菌落;革兰染色镜检显示为革兰阴性短杆菌;16S rRNA测序结果显示,该分离菌与多杀性巴氏杆菌同源性大于99.6%;细菌种特异性KMT1基因和荚膜血清型分型鉴定,表示该分离菌为多杀性巴氏杆菌且与荚膜血清A型相符;毒力基因检测显示该分离菌携带了6种主要毒力基因(ptfA、pfhA、sodA、plpB、tonB、nanH);药敏试验结果显示,该分离菌对22种试验药物中的10种抗菌药物敏感,对7种抗菌药物耐药;动物回归试验显示该菌株能导致试验猪肺脏出血、气管有血性泡沫;且发现肝组织中存在两端钝圆小杆菌,表明该株分离菌具有较强的致病性。试验从四川地区成功分离得到1株猪源荚膜血清为A型的多杀性巴氏杆菌,对其进行了细菌生物学特性研究,同时复制了多杀性巴氏杆菌的发病模型,为防治该病提供依据。

西藏那曲市牦牛源B型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及基因组分析

旨在对引起西藏牦牛呼吸道感染的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,明确病原菌的血清型、耐药性和致病性等生物学特性及基因组特征和遗传进化关系。本研究从西藏林芝、拉萨、那曲地区采集牦牛鼻咽拭子和组织病料498份,进行流行病学调查、细菌学分离纯化、生化试验、PCR鉴定、K-B药敏试验、动物致病性试验和分离株全基因组测序,并通过Mauve软件和MEGA 7软件进行基因共线性和系统进化分析。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定,发现在西藏林芝、拉萨、那曲地区巴氏杆菌阳性率为2.61%,且从病死牦牛肺组织中分离出B型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm XZ01”株;药敏试验发现Pm XZ01株对头孢菌素类、喹诺酮类、羧苄西林、丁胺卡那、复方新诺明和氯霉素类抗生素敏感;动物试验发现感染Pm XZ01株的家兔(1.2×10^(8) CFU·mL^(-1))和小鼠(1×10^(7) CFU·mL^(-1))死亡率高达100%,说明在该浓度下Pm XZ01株具有较强的致病性和致死性。全基因组测序获得Pm XZ01株全基因组大小为2331787 bp,GC含量为40.47%,重复序列总长度为3266 bp;含有121个非编码RNA基因,包括59个tRNA基因,19个rRNA基因,43个ncRNA基因;2个假基因,5个基因岛,3个前噬菌体,68个碳水化合物活性酶基因;CARD注释分析发现1个PBP3抗性基因和2个EF-Tu抗性基因;VFDB和PHI-base注释分析发现101个毒力因子相关基因及663个表型突变基因等;共线性分析发现Pm XZ01株与猪源HB03株(CP003328.1)、HN07株(CP007040.1)和禽源P1702株(CP097616.1)共线性最好,而与牦牛源Tibet-Pm1株(CP072655.1)共线性较差;系统进化树分析发现Pm XZ01株与中国广东牛源GDZQ201401株(KP083466.1)属于同一分支,进化关系最近。本研究完成了西藏牦牛巴氏杆菌病的流行病学调查,以及牦牛源B性多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、生物学特性和全基因组测序分析,为探索西藏牦牛源B型多杀性巴氏杆菌病的流行规律和致病机制以及防控提供了参考。

1株羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及病原特性研究

【目的】确定齐齐哈尔市某羊场育成绵羊发病和死亡的病原菌,并探究其病原学特性,为该病的有效防治提供科学依据。【方法】无菌采集病死羊肺脏组织,结合临床病征进行实验室诊断,分离培养病原菌。通过形态学观察、生化试验、16S rRNA PCR扩增并测序、kmtⅠ基因鉴定、荚膜血清分型、毒力基因检测、药敏试验、耐药基因检测和小鼠致病性试验对分离菌进行鉴定和病原特性分析。【结果】致病菌株为多杀性巴氏杆菌,分离菌在血平板上长出表面光滑、灰白色的圆形凸起菌落,革兰染色可见聚集成线状或散在单个的革兰阴性短杆菌。生化试验结果显示,该菌能发酵麦芽糖、阿拉伯糖、蔗糖、木糖、葡萄糖、果糖、海藻糖、甘露醇、尿素酶、山梨醇和β-半乳糖苷酶,精氨酸、靛基质试验呈阳性。荚膜血清分型结果显示,分离株为多杀性巴氏杆菌荚膜D型。药敏试验结果显示,分离株对恩诺沙星、杆菌肽和洛美沙星3种药物耐药,对新霉素等4种药物表现为中介,对氨苄西林等16种药物敏感。分离株携带14种毒力基因和6种耐药基因。小鼠感染分离菌后全部死亡。【结论】本研究成功分离到1株D型多杀性巴氏杆菌菌株,其携带多种毒力基因和耐药基因,对小鼠具有较强致病性,研究结果为探究羊源多杀性巴氏杆菌的生物学信息和病原学特征提供了数据。

一株鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为确认山东省德州市某肉鸭场疑似为鸭多杀性巴氏杆菌感染的病原菌,本试验对于送检病死鸭进行剖检、细菌分离培养、菌落观察、生化试验、PCR鉴定、16Sr RNA基因测序分析以及药敏试验等方法鉴定该病原菌。结果显示:分离得到的病原菌在含有5%胎牛血清的营养琼脂培养基中呈现为圆形、湿润、光滑的灰白色菌落,革兰氏染色为阴性短杆菌,瑞氏染色呈现两极浓染;分离菌株的生化特性可以发酵葡萄糖、蔗糖以及甘露醇,硫化氢、氧化酶等试验阳性;细菌特异性PCR扩增片段与预期条带大小一致;16S rRNA基因序列系统进化树显示与多杀性巴氏杆菌同源性为99%;分离菌株对于新霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢噻肟、林可霉素具有耐药性,对于氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、粘杆菌素B、卡那霉素、大观霉素敏感。本研究结果为鸭源多杀性巴氏杆菌病的防治提供一定参考依据。

羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为确定陕西某规模化奶山羊场部分羊出现精神沉郁,食欲减退,采食量减少,呼吸困难甚至出现死亡的病因,以病羊病变组织为研究对象,采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、药敏试验、致病性试验等方法对分离菌株进行鉴定和分析。结果显示,从病死羊肝脏组织中分离到1株革兰氏阴性、无芽孢、无鞭毛且两极浓染的短杆菌,在TSA培养基上呈现出贫瘠的细小、透明、露滴状菌落;在麦康凯培养基上不生长;在血琼脂平板上长出灰白色、圆形、光滑、湿润、不透明的露滴样菌落;分离菌株能分解葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、触酶、鸟氨酸脱羧酶,不能分解麦芽糖、乳糖、吲哚、枸橼酸盐、硫化氢、尿素、甲基红反应,与多杀性巴氏杆菌生化特性基本一致;分离菌株16S rRNA序列与GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌的16S rRNA相似性达99.9%以上;分离菌对羧苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮、庆大霉素等抗菌药敏感,对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢氨苄、头孢拉定、四环素、多西环素、红霉素等抗菌药耐药;致病性试验结果显示,在24 h内攻毒小鼠全部死亡,说明分离菌有较强的致病力。研究结果丰富了羊多杀性巴氏杆菌的流行病学资料,并为该病的防治提供了参考。

绵羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

[目的]分离、鉴定绵羊源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),研究分离菌株的生物学特性。[方法]对内蒙古自治区呼和浩特市托克托县某家庭养殖户出现典型呼吸道疾病症状的绵羊进行现场解剖,观察呼吸系统主要器官和脾脏的病理学变化,制备肺组织病理切片;无菌采集肺组织进行细菌分离培养,对分离菌株进行表型鉴定、分子生物学鉴定和荚膜血清型鉴定;采用PCR法检测毒力基因携带情况;利用纸片扩散法开展分离菌株对11种抗菌药物的敏感性试验;采用腹腔注射法评价分离菌株对小鼠的致病性。[结果]发病羊只肺脏与胸膜、心包膜粘连,肺组织中存在坏死灶,肺门淋巴结肿大,脾脏有出血点。经分离和纯化培养,获得1株细菌,命名为2021-TX-06株,该菌株在含5%马血清的TSA培养基上呈白色、圆形、微凸起的小菌落,为革兰阴性小杆菌,能发酵利用甘露醇、山梨醇、海藻糖、木糖、葡萄糖,符合Pm的生化反应特性;经16S rDNA序列PCR扩增及序列比对,确定2021-TX-06株为Pm;经荚膜血清分型鉴定,该菌株为荚膜血清D型,携带ptfA、fimA、Fur等15种毒力基因,对四环素、头孢曲松、庆大霉素、多黏菌素B等药物敏感,对诺氟沙星、恩诺沙星、氯霉素耐药;以5×10^(8)CFU/mL浓度的菌液腹腔注射试验组小鼠,72 h后死亡率为100%,从死亡小鼠肺脏中回收到与攻毒菌株一致的菌株。[结论]从出现典型呼吸道疾病症状的绵羊肺组织中分离到1株荚膜血清D型Pm流行株,该菌株携带多种毒力基因,对部分抗菌药物表现出一定耐药性,对小鼠具有较强致病力。

鹿源多杀性巴氏杆菌辽宁株的分离鉴定及耐药性分析

研究旨在确证鹿源多杀性巴氏杆菌的血清型和耐药性等特征,无菌采集某养鹿场发病鹿的心脏、肝脏、肺脏、脾脏等病料,进行细菌分离培养、分子生物学鉴定、生化试验及致病性试验、药敏试验。结果显示,通过细菌学和分子生物学方法进行鉴定,确认分离到一株鹿源多杀性巴氏杆菌,分离株在10%绵羊鲜血营养琼脂培养基上形成圆形光滑、半透明的菌落,瑞氏染色呈两极浓染的小短杆状菌;通过血清型特异引物鉴定方法确认分离株为荚膜血清型D型。致病性试验结果显示,小鼠感染分离株后发病率为100%,死亡率为50%,并表现肾脏、肝脏及肠道黏膜等多器官出血和变质性变化。分离株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、美罗培南等12种药物敏感。研究表明,试验分离的鹿源多杀性巴氏杆菌具有较强的致病性,且对大多数抗菌药物仍具有敏感性,可能与鹿的生存环境和日常很少用药有关。

浙东白鹅种鹅多杀性巴氏杆菌分离鉴定及药敏试验

浙江省某浙东白鹅种鹅场发现数只患病鹅与病死鹅,剖检后取样分离到一株目标菌株,经过分离培养和纯化、涂片镜检及16S rDNA扩增测序等试验进行鉴定。结果显示,单菌落经革兰氏染色后镜检呈革兰氏阴性短小杆菌,进行16S rDNA的扩增测序后,分离菌株与多杀性巴氏杆菌同源性高达99.93%,判定该分离株为多杀性巴氏杆菌。用E-test法对分离菌株进行最小抑菌浓度检测,发现该菌对庆大霉素、美罗培南、氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明、头孢曲松、环丙沙星、粘菌素敏感,对红霉素耐药。可见,从浙东白鹅种鹅场患病鹅和病死鹅体内分离到的菌株为多杀性巴氏杆菌,该菌对庆大霉素等8种抗生素敏感,可以单独用药或联合用药治疗,但不能使用红霉素。

貉源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella Multocida）又称多杀巴斯德菌,多杀巴斯德菌含3个亚种,属于巴斯德菌属,可以引起人及多种动物发病[1]。在动物的感染表现并有相应的专用疾病名称,如猪肺疫、毛皮动物巴氏杆菌病等[2]。于爱红等[3]报道了该菌导致人手术切口感染。可以导致人的不同器官感染[4]。该病原菌发生无明显季节性、环境条件、饲养条件改变等不良因素致使机体的抵抗力下降,促进病原菌大量增殖并引起发病[5],

21株猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对来自苏中地区25个疑似感染多杀性巴氏杆菌的规模化猪场随机采取的250份病料,通过涂片镜检、分离纯化、生化试验、PCR鉴定和动物试验,从4个猪场分离出共21株多杀性巴氏杆菌。采用纸片法检测了分离菌株对13种药物的敏感性,其耐药性顺序为:头孢氨苄、复方新诺明>红霉素、链霉素>青霉素G、四环素、林可霉素>卡那霉素>庆大霉素>利福平>诺氟沙星>氧氟沙星>氟苯尼考。分离株对氟苯尼考和氧氟沙星敏感的比例分别为85.71%和80.95%,可作为临床控制猪多杀性巴氏杆菌病的首选药物。

兔源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了对疑似感染巴氏杆菌的病死兔进行病原的分离、鉴定并分析其耐药情况,本试验对送检的病死兔进行剖检,结合传统分离培养及16S rRNA和荚膜抗原A(capA)基因的PCR扩增等鉴定病原菌,PCR方法扩增其23个毒力基因,最后进行药敏试验。结果显示,分离菌在血琼脂培养基的菌落特征为光滑、湿润、半透明、灰白色、圆形、露珠状,染色镜检可观察到革兰阴性、两端染色较深的红色短杆菌。PCR扩增及测序结果显示,该分离菌株的16S rRNA和capA基因与多杀性巴氏杆菌Q菌株(GenBank登录号:CP033597)同源性分别为99.86%和100%。23个毒力基因中仅pfhA、oma 87、fur、pmHAS基因检测出目的条带,其余19个毒力基因均未检出。该分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、头孢拉定、氨苄西林、卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素、红霉素和多黏菌素B共9种药物敏感,对四环素、复方新诺明和克林霉素等耐药。结果表明本试验从病死兔中分离鉴定出1株荚膜血清A型的多杀性巴氏杆菌,可选用环丙沙星和红霉素等进行治疗。该结果可为临床巴氏杆菌病的治疗提供一定的理论依据。

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定和药敏试验

为了对河南省猪高热综合征发生期间多杀性巴氏杆菌引起的感染有全面了解,从2006-2010年河南省发生猪高热综合征的245家规模化猪场568份病料中分离革兰氏阴性小球杆菌,通过培养特性试验、生化试验和PCR试验分离鉴定到35株。对分离菌进行毒力和药敏试验,结果显示所分离的猪多杀性巴氏杆菌对小鼠均有毒力,对头孢噻呋、头孢噻肟、环丙沙星、氟苯尼考敏感。