同位素稀释-高分辨气相色谱/高分辨质谱法测定大气中多溴联苯醚和多溴联苯153

针对环境监测的特点和要求,建立了同位素稀释-高分辨气相色谱/高分辨质谱测定大气中多溴联苯醚（PBDEs）和多溴联苯153（BB153）的方法。采用正己烷/二氯甲烷（1∶1,v/v）及正己烷分别对PBDEs和BB153进行快速溶剂萃取,并通过复合硅胶柱净化。在校准曲线最高浓度的10%和90%加标水平下得到的天然内标的平均回收率分别为100%和104%,平均相对标准偏差（n=7）分别为5%和6%;二至十溴代联苯醚和BB153相应的13C同位素标准物质回收率在36.5%~133%之间;而一溴代联苯醚13C同位素标准物质回收率较差,可能是由于物化性质与其他化合物不同。在实际采样体积为300 m3的情况下,未发生污染物穿透现象;分析物检出限低于2×10-4ng/Nm3,提取内标回收率在56%~126%之间（一溴代联苯醚除外）。实验结果表明该方法能对化合物准确定量,适用于大气中二至十溴代联苯醚和BB153的分析。

多溴联苯醚-153对大鼠体内外神经细胞的毒性研究

目的通过体内外实验,研究BDE-153对大鼠神经细胞的毒性损伤,为研究PBDE的神经毒性提供一定的科学依据。方法 (1)体内实验部分:将40只新生雄性清洁级SD大鼠按窝别和体重随机分为溶剂对照(橄榄油)组和低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高剂量(10 mg/kg)BDE-153染毒组,每组10只。在仔鼠出生第10天,采用一次性腹腔注射方式进行染毒,并且每周称重并记录大鼠的食欲、饮水量和体重增长状况,观察大鼠的神经行为变化。两个月后,在光镜和电镜下观察脑组织病理学形态和大鼠海马神经细胞超微结构以及TUNEL染色结果 ,采用比色法和流式细胞术分别检测LDH活力和细胞凋亡;(2)体外实验部分:体外培养大鼠原代神经元,分别用10、20和40μmol/L BDE-153染毒48 h后(另设DMSO溶剂对照组和空白对照组),在倒置显微镜下观察神经细胞的形态学改变,采用Hoechst 33258和AO/EB染色法观察BDE-153染毒后神经细胞凋亡,采用比色法、CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测LDH活力、细胞活力和神经细胞凋亡率。结果 (1)染毒后大鼠一般状况以及行为无明显改变。体内神经细胞病理形态学和超微结构观察显示,BDE-153能引起大鼠神经细胞形态发生改变。与对照组相比,体内外各染毒组海马神经细胞凋亡率和LDH活力均呈剂量依赖性地增加,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与对照组比较,体外各染毒组神经细胞的细胞活力呈现剂量依赖性地降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BDE-153能引起体内外大鼠神经细胞的损伤,表现为细胞形态学和超微结构的改变,神经细胞活力降低,使细胞膜的通透性和细胞凋亡率增加。

哺乳期多溴联苯醚-153暴露对成年雄性大鼠海马神经细胞凋亡及p53表达的影响

目的研究哺乳期多溴联苯醚-153(BDE-153)暴露对成年大鼠海马神经细胞凋亡及p53基因和蛋白表达的影响。方法将40只4日龄清洁级SD雄性大鼠按体重随机分成4组,分别为对照(橄榄油)组和1、5、10 mg/kg BDE-153染毒组,每组10只。于出生第10天(PND10),采用腹腔一次性注射方式进行染毒,染毒容量为10 ml/kg。染毒2个月后,测定海马神经细胞的凋亡率和TUNEL阳性细胞率及海马p53基因和蛋白的表达。结果与对照组相比,10 mg/kg BDE-153染毒组大鼠海马神经细胞TUNEL阳性细胞率和p53基因的表达均升高,5、10 mg/kg BDE-153染毒组大鼠海马神经细胞凋亡率和p53蛋白的阳性率均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。且随着BDE-153染毒剂量的升高,大鼠海马神经细胞凋亡率和TUNEL阳性细胞率及p53基因的表达和p53蛋白的阳性率均呈上升趋势。结论 p53基因和蛋白可能参与了BDE-153诱导的神经细胞凋亡过程。

哺乳期多溴联苯醚-153染毒对成年大鼠皮质细胞内钙离子浓度和钙激活相关酶的影响

目的研究哺乳期多溴联苯醚-153（BDE-153）染毒对成年大鼠皮质细胞内钙离子浓度和钙激活相关酶水平的影响，为研究多溴联苯醚的神经发育毒性提供科学依据。方法40只雄性新生乳鼠按体重和窝别随机分成1、5、10mg／kgBDE-153组和橄榄油溶剂对照组，每组10只。在出生第10天，染毒组按0．1ml／10g体重-次腹腔注射染毒BDE-153，橄榄油溶剂对照组给予同剂量橄榄油。染毒后2个月时处死大鼠，冰皿上迅速分离大脑皮质，用流式细胞仪测定细胞内caz＋浓度，用比色法测定钙调神经磷酸酶（CaN）、Ca，Mg2-ATP酶活力，实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法（Western．blot）检测钙激活蛋白酶calpain-1和calpain-2的基因和蛋白表达。结果对照组、1、5和10mg／kgBDE-153组大鼠皮质细胞内caz＋平均荧光强度分别为10．83、1．48、1．93和0．62，各染毒组细胞内caz＋浓度均明显低于对照组，差异有统计学意义（P〈O．05）。各染毒组CaN酶活力、Ca2＋-Mg2_ATP酶活力、calpain-1基因和蛋白表达量与对照组的差异无统计学意义（P〉0．05）。随着BDE．153染毒剂量的增加，BDE．15染毒组calpain-2蛋白的表达量逐渐升高，与对照组f基因：（0．81±0．26），蛋白：（0．15±0．07）]比较，5、10mg／kgBDE-153组calpain-2的基因[5mg／l（gBDE-153组：1．16±0．52，10mg，kgBDE．153组：1．32±0．23]及蛋白表达量[5mg／kgBDE．153组：0．31±0．07，10mg／kgBDE-153组：0．37±0．061明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；10mg／kgBDE．153组calpain-2的蛋白表达量（0．37±0．06）明显高于1mg／kgBDE-153组（0．22±0．07），差异有统计学意义（P（0．05）。结论ca：价导的calpain-2激活可能是BDE-153神经毒性的主要机制之-。

多溴联苯醚-153染毒对大鼠神经细胞内钙离子浓度及其相关激酶活力和含量影响的体内和体外实验研究

目的研究多溴联苯醚-153(BDE-153)对大鼠体内、体外神经细胞内钙离子浓度及其相关激酶活力和含量的影响。方法体内实验:将40只4月龄清洁级雄性SD大鼠按窝别和体重随机分为4组,分别为溶剂对照(橄榄油)组和低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高剂量(10 mg/kg)BDE-153染毒组,每组10只。在仔鼠出生第10天,采用一次性腹腔注射方式进行染毒,染毒容量为0.01 ml/g;断乳后(出生第21天)继续饲养2个月。体外实验:将神经细胞分别暴露于含终浓度0(对照)、10、20、40μmol/L BDE-153的培养基染毒48 h。测定仔鼠大脑皮质细胞和神经细胞内钙离子、钙激活中性蛋白酶(calpain)浓度和钙调神经磷酸酶(CaN)、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的活力。结果体内实验结果显示,与溶剂对照组比较,各剂量BDE-153染毒组仔鼠大脑皮质细胞内钙离子的浓度较低,而calpain的浓度较高,差异均有统计学意义(P<0.05);Ca N和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的活力均无明显变化。且随着BDE-153染毒剂量的升高,仔鼠大脑皮质细胞内钙离子的浓度呈下降趋势,而calpain的浓度呈上升趋势。体外实验结果显示,与溶剂对照组比较,各浓度BDE-153染毒组神经细胞内钙离子和calpain的浓度均较高,除10μmol/L BDE-153染毒组钙离子浓度外,差异有统计学意义(P<0.05);且随着BDE-153染毒浓度的升高,神经细胞内钙离子和calpain的浓度均呈上升趋势。结论 BDE-153染毒可导致细胞内钙离子和calpain的浓度升高,这可能是BDE-153的神经毒性作用机制之一。

BDE-153暴露对大鼠中枢胆碱能系统关键酶活力及细胞内钙离子浓度的影响

目的研究哺乳期BDE-153暴露对大鼠成年后大脑皮质胆碱能系统关键酶的活力及细胞内Ca2+浓度的影响。方法将40只出生第4天的雄性清洁级SD大鼠按体重随机分成4组,分别为溶剂对照(橄榄油)组和低(1 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高剂量(10 mg/kg)BDE-153染毒组,每组10只。在仔鼠出生第10天,采用一次性腹腔注射方式进行染毒,染毒容量为0.01 ml/g。染毒两个月后,采用流式细胞仪测定大脑皮质细胞内Ca2+的浓度,采用比色法测定皮质乙酰胆碱转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(TchE)的活力。结果与溶剂对照组比较,各剂量BDE-153染毒组大鼠大脑皮质神经细胞内Ca2+浓度均降低,差异有统计学意义(P<0.05);仅高剂量BDE-153染毒组皮质组织内ChAT和TchE活力降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论哺乳期BDE-153暴露可抑制成年大鼠大脑皮质胆碱能系统的功能,使细胞内Ca2+浓度降低,这可能是BDE-153神经毒性的主要机制之一。