大鼠骨髓间质多潜能成年祖细胞体外培养和神经分化潜能的研究

目的:探讨大鼠骨髓间质中多潜能成年祖细胞(muhipotent adult progenitoi-cells or MAPCs)的体外培养与神经分化的方法,观察其增殖和分化特点。方法:采用Ficoll-Paque液(1.077g/L)和免疫微磁珠从大鼠双侧股骨和胫骨骨髓中分离与纯化出多潜能成年祖细胞,体外扩增,分别采用含碱性成纤维生长因子(bFGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)、成纤维生长因子-8(FGF-8)等试剂的无血清L-DMEM诱导MAPC分化为神经元。应用免疫荧光化学技术和RT-PCR等方法对分化细胞进行鉴定。结果:多潜能成年祖细胞在休外扩增可超过50代,细胞形态和神经分化能力没有发生变化。在碱性成纤维生长因子的诱导下,MAPC形态转变为典型的神经样细胞,神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性。继续用BDNF、FGF-8持续诱导,MAPC可分化为更加成熟的神经样细胞,微管相关蛋白-2(MAP-2)表达阳性;RT-PCR显示诱导出的神经样细胞,酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺β-羟化酶(DBH)mRNA表达水平明显升高。结论:建立了多潜能成年祖细胞体外分离、培养的条件,探索了多潜能成年祖细胞部分生物学特性,多潜能成年祖细胞在体外可以持续增殖并可诱导分化为较成熟的神经元样细胞,它可为多潜能成年祖细胞的临床应用提供材料。

大鼠骨髓间质多潜能成年祖细胞体内移植与多巴胺能神经元分化的研究

目的:探讨骨髓间质分离的多潜能成年祖细胞(MAPCs)通过系统移植(即尾静脉注射)方式进入大鼠脑组织内并修复受损的神经功能。方法:制作实验性帕金森疾病大鼠模型.将在体外纯化、增殖和已用5-溴-2脱氧尿苷(BrdUrd)处理过的多潜能成年祖细胞通过尾静脉注射入帕金森病大鼠体内。三个月后,对受试大鼠进行行为学评定;并应用免疫荧光化学技术和RT-PCR等方法对脑组织内的MAPCs及其分化细胞进行鉴定。结果:多潜能成年祖细胞能移行入大鼠脑组织内并在中脑黑质和纹状体区分化为神经元样细胞.如多巴胺能神经元,免疫荧光染色显示5-溴-2脱氧尿苷、神经元特异性烯醇化酶(NSE)或酪胺酸羟化酶(TH)表达阳性;6-羟多巴诱导的大鼠行为损伤有明显恢复;多巴胺-β-羟化酶(DBH)和多巴胺转运体(DAT)mRNA的表达水平明显升高。结论:骨髓间质分离的多潜能成年祖细胞能通过系统移植方式进入大鼠脑组织内,在中脑微环境中可自主分化为多巴胺能神经细胞并有效地修复6-羟多巴诱导的神经功能缺损。因此,多潜能成年祖细胞有望成为中枢神经系统疾病自体移植治疗的最佳候选干细胞之一。