合成生物学在多糖结合疫苗研发中的应用

由于合成生物学的快速发展,目前已经实现了人工设计DNA和蛋白质的合成,对具有重要生物学功能、结构也更为复杂的糖类物质进行精准设计合成,也将是合成生物学未来发展的重要方向。近年来,一种基于细菌寡糖转移酶体系的蛋白多糖偶联技术发展迅速,已被广泛应用于病原细菌多糖结合疫苗的生物合成制备。本文综述了该技术体系中的寡糖转移酶元件、载体蛋白元件、异源多糖抗原合成线路以及工程菌株改造等核心关键模块的最新研究进展。使用生物活体系统,发酵生产多糖结合疫苗,具有产物均一性好、步骤简便、绿色环保等优势,是一种亟待发展的新兴技术,同时也存在一些技术细节需要完善。未来,寡糖转移酶的定向进化、纳米颗粒型蛋白载体的应用、多糖合成基因的组合重排、工程菌株的代谢途径优化,将有望进一步促进多糖结合疫苗的生物合成研究。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的 观察A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性。方法 疫苗放不同温度和不同时间后 ,用乙醇沉淀法测定A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的游离多糖含量 ,SepharoseCL 4B凝胶层析法测定分子大小。结果液体疫苗放置 2～ 8℃ 9个月 ,游离多糖含量为 30 %以上 ;4℃放置 18个月 ,Kd <0 2的多糖回收率 <6 0 %。冻干疫苗放置 2 5℃和 37℃ 12个月 ,或放置 2～ 8℃ 18个月 ,游离多糖含量均不高于 2 5 % ,Kd <0 2的多糖回收率 >6 0 %。结论 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的稳定性。

病原细菌多糖疫苗和多糖结合疫苗研究进展

在许多病原细菌中,荚膜多糖和O抗原多糖能够刺激机体产生保护性抗体,因此利用病原细菌的多糖制成的疫苗能有效预防传染病,同时避免了病原细菌耐药性的出现。此类疫苗包括多糖疫苗和多糖结合疫苗。细菌体内糖基化的发现,使得利用生物法生产多糖结合疫苗成了多糖结合疫苗生产的热门方向。我们简要综述了多糖疫苗和多糖结合疫苗在研究和应用方面的主要进展。

某新上市国产冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗免疫原性及安全性观察

目的评价某新上市国产冻干A＋C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗接种婴幼儿的安全性和免疫原性。方法采用随机、盲法、对照的方法,选择900名6~23月龄健康儿童,其中6~11月龄300人,12~23月龄600人,每个年龄组按1∶1比例随机分到试验组和对照组。实验组接种某新上市疫苗,对照组接种罗益（无锡）生物制药有限公司生产的同类疫苗。每人接种2剂疫苗,间隔1个月,评价试验组和对照组疫苗免疫后不良反应发生率、抗体阳转率及抗体几何平均滴度（GMT）。结果免疫后两个年龄段A、C群抗体阳转（4倍增长）率均〉95%,试验组与对照组的阳转率差异无统计学意义。12~23月龄接种1剂、2剂疫苗后抗体阳转率差异无统计学意义;6~11月龄段,试验组A群抗体水平高于对照组;两个年龄段试验组的C群抗体水平均低于对照组,但均处于较高水平（〉1∶128）。实验组与对照组全身及局部不良反应率差异无统计学意义,未观察到与试验疫苗相关的严重不良事件。结论某新上市国产冻干A＋C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在6~23月龄的儿童中具有良好安全性和免疫原性。

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗临床试验——安全性观察报告

目的 :了解 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性。方法 :于 2 0 0 2年 10月～ 2 0 0 3年 1月 ,在江苏省射阳县对 3～ 4月龄的健康婴幼儿接种 3针 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗 ,以多糖疫苗为对照组 ,进行安全性观察 , 期临床观察4 7人、 ～ 期临床观察 2 36人。结果 :接种 A脑膜炎球菌多糖结合疫苗各针次的副反应均以弱发热反应为主 ,发生率最高为 7.33%、最低为 0 .80 % ,对照组的弱发热反应发生率最高为 1.72 % ,最低为 0 .86 %。结论

b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的研制

［摘 要］目的 研制b型流感嗜血杆菌（Hib）结合疫苗并考察其稳定性。方法 用溴化氰活化提纯Hib荚膜多糖抗原，通过己二酰肼（ADH）与破伤风类毒素（TT）蛋白共价结合，制备b型流感嗜血杆菌结合物，并考察放置在2～8℃及室温9个月和37℃ 3个月后的稳定性。结果 用本工艺提取的多糖，合成的多糖衍生物，多糖蛋白结合物的化学组成及结构特性均达到了国外同类产品的质控要求。结合物在2～8℃及室温放置9个月后基本无降解。结论 为临床评价Hib结合疫苗的安全性和保护效果及确定效期提供了实验基础。

霍乱O139血清群多糖结合疫苗的生物合成研究

目的:霍乱是由霍乱弧菌引起的一种烈性传染病,其防治已成为一个全球性的公共卫生问题。其中1992年出现的O139血清群是除O1外另一种病原体,发病数日益增多。因此,有必要寻找一种安全有效适用于各种人群的疫苗。方法:敲除霍乱弧菌O139血清群93-3株脂多糖合成途径中O抗原连接酶基因waa L,在周间质产生游离的多糖,之后转入包含来自脑膜炎奈瑟球菌的糖基转移酶和霍乱毒素B亚单位(CTB)编码序列的共表达载体,经IPTG诱导后制备全菌蛋白样品,利用抗His抗体检测糖蛋白的表达,利用Ni柱和离子交换柱对糖蛋白进行纯化,并对其进行糖定量和蛋白定量。结果:以未糖基化、相对分子质量约为14×103的底物蛋白CTB为对照,当共表达CTB和糖基转移酶Pgl L时,通过Western印迹可检测到相对分子质量约为20×103的糖基化蛋白,经Ni柱及阳离子交换柱纯化,得到纯度较高的O139群霍乱O抗原多糖结合蛋白,其纯度约为84.2%,并计算得其糖-蛋白比为0.103∶1。结论:通过生物法合成了一种霍乱O139血清群的多糖结合疫苗,为后续进行动物评价打下了基础。

冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的 观察冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2～8℃条件下的稳定性.方法 将冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗放置在2～8℃条件下,定期取样,检查其物理外观,检测多糖含量、水分含量和分子大小,并进行鉴别试验以及异常毒性和免疫原性试验,考察其稳定性.结果 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗于2～8℃保存30个月,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准.结论 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2～8℃条件下,其质量稳定.

A、C群脑膜炎多糖结合疫苗接种后副反应的观察

目的：了解A、C群脑膜炎多糖结合疫苗接种后副反应。方法：2009年8~11月对到本院免疫规划门诊进行A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗接种的各年龄段人群450例进行接种后副反应的观察。结果：450例中有28例有局部或全身副反应,占接种人数的6.22%,均为预防接种一般反应。结论：该疫苗是安全的。

13价肺炎球菌多糖结合疫苗的接种意愿及其影响因素调查分析

目的 针对广州市某2个社区儿童家长进行调查,收集其对13价肺炎球菌多糖结合疫苗的了解、接种意愿等行为状况,为13价肺炎球菌多糖结合疫苗的接种工作提供参考.方法 2017年7月1日-2017年12月31日,针对广州市某2个社区儿童预防接种信息,分别随机抽取各150名在册儿童个案,联系其家长进行面对面的问卷调查.共发放320份问卷,回收有效问卷316份.结果 此次调查中,针对不同文化程度人群进行了13价肺炎球菌多糖结合疫苗的知晓率调查中,大专及以上、高中或中专、初中及以下知晓率为85.33%、50.00%和 53.85%,差异有统计学意义(P<0.01).此外,此次调查中还针对不同家庭收入、不同职业家长进行了调查,其结果 两项调查结果 差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 开展预防接种服务工作时,需要发挥各种媒体的优势开展相关知识宣教,从而可以有效提高家长对肺炎球菌性疾病的了解,并对13价肺炎球菌多糖结合疫苗相关知识进行掌握.同时,通过不断健全社区疫苗以及接种管理工作机制,可以更好地为民众提供高效、规范的预防接种服务.

A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性及免疫原性分析

目的:探讨并分析婴幼儿接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性及免疫原性。方法:选取115名接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的婴幼儿作为研究对象,观察其接种疫苗后的表现,根据其出现全身或局部不良反应的情况评价该疫苗的安全性。在接种疫苗前及接种疫苗后30 d,检测并评价婴幼儿的免疫原性。结果:接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗前,这115名婴幼儿A群流脑抗体的阳性率和C群流脑抗体的阳性率分别为2.61%和6.09%,几何平均滴度(GMT)分别为4.30和4.38。接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗后30 d,这115名婴幼儿A群流脑抗体的阳性率和C群流脑抗体的阳性率分别为95.65%和97.39%,GMT分别为162.27和157.39。这115名婴幼儿接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗后出现的不良反应有发热、腹泻、皮肤斑丘疹、皮肤瘙痒、皮肤水泡疹等,其上述不良反应多较为轻微。结论:为婴幼儿接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的安全性及免疫原性。

A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗预防接种不良反应病例报告分析

目的:分析A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性,提出预防接种不良反应(AEFI)的防治对策。方法:选取2021年3月-2022年3月成都欧林生物科技股份有限公司出库的414730支A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗接种者为研究对象,分析AEFI发生情况,讨论发生AEFI儿童的年龄、性别、临床表现及联合用药情况。结果:2021年3月-2022年3月成都欧林生物科技股份有限公司共出库A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗414730支,发生AEFI 7例,发生率为0.169/万剂,均发生在2021年。7例AEFI儿童中,以6~11个月月龄儿童最多,共5例,占71.43%;0~2个月、3~5个月儿童各1例,各占14.29%。7例AEFI儿童中,男3例,女4例,性别占比男∶女为1∶1.3。7例AEFI儿童中,发热6例,累计发生率为0.14/万剂;疫苗接种部位肿胀、皮疹各1例,累计发生率均为0.02/万剂。7例AEFI儿童中,单独使用A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗5例,联合其他药品使用2例。7例AEFI儿童中,涉及产品批号S-20200401者4例,累计出库47504支,发生率为0.84/万剂;涉及产品批号S-20200402者2例,累计出库51709支,发生率为0.39/万剂;批号不详1例。结论:A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性高,AEFI发生率较低。

Hib-CRM197多糖结合疫苗经皮免疫诱导的抗Hib抗体应答

经皮免疫(TCI)是一种新型免疫方法,英国国立生物制品标准和控制研究所Mawas等检测了TCI b型流感杆菌(Hib)-白喉毒素(DT)交叉反应物质(CRM197)多糖结合疫苗加霍乱毒素(CT)或大肠杆菌不耐热肠毒素突变体(LTK63和LTR72)诱导的抗Hib和DT抗体应答.

基于决策树-Markov模型的13价肺炎球菌多糖结合疫苗纳入青海省免疫规划成本效益分析

目的分析13价肺炎球菌多糖结合疫苗(Pneumococcal polysaccharide conjugate vaccine,PCV13)纳入青海省免疫规划(Expanded Program on Immunization,EPI)的成本效益。方法建立决策树-Markov模型,计算PCV13纳入青海省EPI的2021年出生队列接种成本和肺炎球菌性疾病(Pneumococcal disease,PD)经济负担,与未纳入EPI相比的净效益和效益成本比(Benefit-cost ratio,BCR)。结果PCV13纳入青海省EPI与未纳入EPI相比,PCV13总接种成本将增加12845万元,PD总经济负担将减少12921万元,产生的净效益为76万元,BCR为1.01。具有成本效益的每剂次PCV13最高价格为460元。结论按照当前国产PCV13价格将PCV13纳入青海省EPI从全社会角度略具有成本效益,建议降低疫苗价格以进一步提高成本效益,适时将PCV13纳入青海省EPI。

2007-2020年中国多糖结合疫苗使用现状

目的分析中国多糖结合疫苗使用现状。方法从中国药品检定部门网站、国家免疫规划信息管理系统和中国统计年鉴收集2007-2020年多糖结合疫苗批签发量、2014-2020年报告接种剂次数和出生人口,分析疫苗批签发量,估算出生儿童多糖结合疫苗人均接种剂次。结果2007-2020年中国多糖结合疫苗共批签发46120.4万剂,年均上升5.53%;其中TT、CRM_(197)、OMP载体蛋白的疫苗分别占92.63%、6.69%、0.68%。2014-2020年出生儿童人均接种多糖结合疫苗1.46剂,从2014年的1.17剂上升至2020年的2.51剂;东部、中部、西部地区人均接种剂次分别为1.84剂、1.62剂、1.13剂。结论2007-2020年中国多糖结合疫苗使用量逐年增加,东部地区疫苗覆盖水平相对较高。需完善多糖结合疫苗免疫策略以指导其合理使用。