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结核分枝杆菌多组分蛋白候选疫苗EPDPA015f和EPDPA015m的免疫作用初步评价
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作者 王瑞欢 范雪亭 +8 位作者 钱程宇 曹滨 于晋杰 李马超 李桂莲 赵秀芹 栾秀丽 刘海灿 万康林 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期294-303,共10页
目的初步评价新型结核融合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015f和混合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015m的免疫原性和有效性, 为研制结核疫苗提供新的抗原组合。方法将构建和表达的EPDPA015f和EPDPA015m蛋白与铝佐剂混合, 采用皮下多点的方式对... 目的初步评价新型结核融合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015f和混合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015m的免疫原性和有效性, 为研制结核疫苗提供新的抗原组合。方法将构建和表达的EPDPA015f和EPDPA015m蛋白与铝佐剂混合, 采用皮下多点的方式对6周龄BALB/c小鼠进行3次免疫, 间隔为10 d, 每次50 μg/只。末次免疫10 d后采集血液和脾脏样本。采用酶联免疫吸附试验、多重微球技术、酶联免疫斑点法检测血清抗体滴度、细胞因子分泌水平;采用体外结核分枝杆菌生长抑制试验检测小鼠脾细胞体外抑制结核分枝杆菌生长的能力。多组间比较采用单因素方差分析, 两组间比较采用t检验。结果 EPDPA015f和EPDPA015m均可诱导产生多种高水平的细胞因子和较高滴度的IgG抗体。与佐剂组相比, EPDPA015f组诱导产生Th1(IL-2、TNF-α、IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-6、IL-10)、Th17(IL-17)型细胞因子及其他促炎细胞因子(GM-CSF、IL-12)的差异有统计学意义(P均<0.05);EPDPA015f组诱导产生的IgG抗体滴度高达1∶4×10^(6)。体外结核分枝杆菌生长抑制试验结果显示, PBS组、佐剂组、EPDPA015f组和EPDPA015m组的菌落数(lgCFU)分别为3.46±0.11、3.51±0.06、2.98±0.09和3.19±0.08;其中EPDPA015f组的菌落数最少, 与其他组比较差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001和P<0.01)。结论 EPDPA015f引起较为全面且高水平的细胞免疫和体液免疫应答, 并表现出较优的体外分枝杆菌抑制能力, 具有作为预防型疫苗或加强型疫苗的潜力。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 多组分蛋白 T细胞表位 疫苗 免疫学评价
原文传递
马链球菌马亚种8组分融合蛋白的表达及小鼠免疫效果的评价 被引量:4
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作者 何聆瑜 祖浩宇 +4 位作者 王宁 杨光璞 杜承 王晓钧 郭巍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期191-200,共10页
马腺疫是由马链球菌马亚种(S.equi)引起的急性接触性马属动物传染病,严重影响幼驹的生长发育。我国尚无预防该病的有效疫苗,也缺乏S.equi动物感染和免疫保护模型。为在原核系统中表达马链球菌马亚种(S.equi)的多组分融合蛋白,并评价其... 马腺疫是由马链球菌马亚种(S.equi)引起的急性接触性马属动物传染病,严重影响幼驹的生长发育。我国尚无预防该病的有效疫苗,也缺乏S.equi动物感染和免疫保护模型。为在原核系统中表达马链球菌马亚种(S.equi)的多组分融合蛋白,并评价其对小鼠的免疫保护效果,本研究以S.equi HLJ2018株DNA为模板,分别经PCR扩增其cne、eag、SclC、SclI、SclF、eq5、eq8和ideE基因,并分别克隆至pGEX-6p-1载体中,构建表达这8个蛋白的重组质粒并分别经PCR和测序鉴定。通过在各基因之间引入蛋白接头Gly-Gly-Gly编码基因序列并利用同源重组技术依次串联该8个基因,得到融合基因se8,利用其构建重组质粒pET-28a-SE8(His标签)及pGEX-6p-1-SE8(GST标签),均经PCR和测序鉴定后,将这两个表达SE8及分别表达该8个蛋白的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和柱层析法纯化,采用SDS-PAGE检测各蛋白的表达及纯化效果;采用western blot检测各蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,获得分子量约181 ku的His标签融合8组分重组蛋白SE8(His-SE8)、204 ku的GST标签融合8组分重组蛋白SE8(GST-SE8)及8个单组分重组蛋白,且上述蛋白均以可溶性形式表达;Western blot结果显示,8个单组分重组蛋白均能够与自然感染S.equi的马阳性血清反应,His-SE8能够与自然感染S.equi的马阳性血清反应,GST-SE8能够与感染S.equi小鼠的阳性血清反应。上述结果表明,8个单组分重组蛋白及SE8均获得了表达,且纯化效果和反应原性均较好。以纯化的His-SE8(100μg)添加明矾佐剂后免疫小鼠,利用间接ELISA(iELISA)分别检测免疫后小鼠血清中9种重组蛋白的特异性抗体及His-SE8特异性抗体亚型水平;免疫后28 d,以10倍最小完全致死剂量(MLD)的S.equi攻击小鼠后评价His-SE8的免疫保护效果,连续14 d每天监测小鼠临床症状、体质量变化和存活率。iELISA结果显示,His-SE8免疫组小鼠可产生该9种蛋白的特异性抗体,其中EQ5、EQ8和CNE的抗体水平较高,SclF、SclI和IdeE的抗体水平较低,SclC、EAG和His-SE8的抗体水平居中,且His-SE8特异性IgG1水平极显著高于IgG2a和IgG2b水平(P<0.0001);免疫保护实验结果显示,攻菌后3 d免疫组小鼠临床症状缓解,其体质量在攻菌后4 d~8 d恢复正常,存活率达100%;对照组小鼠体质量持续下降,且攻菌后7 d内全部死亡。上述结果表明,His-SE8具有较强的免疫调节和免疫原性,能够诱导小鼠产生高水平的体液免疫应答,具有良好的免疫保护效果。本研究为马腺疫亚单位疫苗的研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 马链球菌马亚种 多组分融合蛋白 亚单位疫苗
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Bovine serum albumin:An efficient and green biocatalyst for the one-pot four-component synthesis of pyrano[2,3-c]pyrazoles 被引量:1
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作者 Xingtian Huang Zhipeng Li +1 位作者 Dongyang Wang Yiqun Li 《Chinese Journal of Catalysis》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1461-1468,共8页
The use of biocatalysts is attracting an increasing amount of attention in chemical catalysis.Here,we have shown that bovine serum albumin(BSA),a ubiquitous,inexpensive,non-enzymatic transport protein,can serve as a... The use of biocatalysts is attracting an increasing amount of attention in chemical catalysis.Here,we have shown that bovine serum albumin(BSA),a ubiquitous,inexpensive,non-enzymatic transport protein,can serve as an efficient,retrievable catalyst in the one-pot four-component reaction of aryl aldehydes,malononitrile,hydrazine hydrate,and ethyl acetoacetate for the synthesis of pyrano[2,3-c]pyrazoles under mild reaction conditions.The BSA biocatalyst also displayed a high catalytic affinity for acyclic/cyclic ketones to yield the corresponding pyrano[2,3-c]pyrazoles or their spirocyclic variants.The BSA could be used for at least five cycles without serious loss of catalytic activity.This novel,efficient protocol has the merits of high yield,operational simplicity,and a relatively benign environmental impact.Moreover,the method extends the promiscuity of BSA as a biocatalyst. 展开更多
关键词 Bovine serum albumin BIOCATALYST Multicomponent reaction Pyrano[2 3-c]pyrazole Biocatalytic promiscuity
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