阻断PD-L1和MEK对非小细胞肺癌多细胞球体模型的治疗作用

目的观察阻断细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)对非小细胞肺癌(NSCLC)多细胞球体(MTS)模型的治疗作用。方法收集2019年1月~2020年1月的NSCLC患者样本,培养MTS模型,使用流式细胞技术观察MEK抑制剂与抗PD-L1抗体对NSCLC的MTS模型生长抑制、细胞因子产生和免疫检查点基因表达的影响。结果共成功建立7个MTS模型,成功率63.6%。7个MTS模型MEK、MAPK和PD-L1均呈高表达水平。将7种MTS模型分为空白组、阿特珠单抗组、司美替尼组和阿特珠单抗+司美替尼联合应用组,阿特珠单抗组和司美替尼组产生中度抗增殖作用,细胞死亡中位数为30%和25%,联合应用组表现出高度抗增殖效果,细胞死亡中位数为45%。RT-PCR处理后,联合组IFN-γ、IL-12和IL-6的表达显著增加(P<0.05),PD-L1和CTLA-4表达显著减少(P<0.05),司美替尼和阿特珠单抗组PD-L1表达显著减少(P<0.05)。结论在NSCLC的MTS模型中,双重阻断PD-L1和MEK具有优于单一抑制的疗效。

多细胞宏观底栖藻类生烃特点实验研究

对自然状态下产出的多细胞宏观底栖藻紫菜(porphyra yezoensis)在封闭体系中进行了加水模拟实验,研究了多细胞宏观底栖藻类在不同演化阶段的生烃能力及产物特征,并与浮游藻及海生单细胞藻类的模拟试验结果进行了对比。实验结果表明:随着温度的升高,多细胞宏观底栖藻类生烃率呈双峰分布。宏观底栖藻类的油气生成潜力低于浮游藻和单细胞藻类,且生成的油质较差。但宏观底栖藻和单细胞藻在高、过成熟阶段具有较好的生气潜力。

高频纳秒脉冲电场作用下多细胞系统穿孔特性仿真

为了研究高频纳秒脉冲电场(ns PEFs)杀伤肿瘤细胞的机理,结合笛卡尔传输网格(CTL)和动态电穿孔等效电路模型对1个典型的2维多细胞系统在ns PEFs作用下的穿孔特性进行了仿真。利用Pspice仿真软件建立了该多细胞系统电路模型,并分析了其穿孔数量和穿孔半径变化特性。首先施加了10个场强、频率和脉宽分别为5k V/cm、1 MHz和500 ns的高频纳秒脉冲到该多细胞系统模型,结果表明随脉冲个数增加穿孔区域分布变化不大,而穿孔半径分布有明显的累积效应,细胞外膜和细胞核膜上部分孔的半径逐渐增大。同时比较了电场强度为3、5和10 k V/cm时该系统中穿孔数量和最大孔径随脉冲个数增加的变化情况。结果显示场强增加时穿孔数量明显增加,特别是场强从3 k V/cm提高到10 k V/cm时,系统整个细胞核膜从未穿孔到穿孔数量增加到2.658 4×105个。另外,穿孔半径仍然存在累积效应。仿真结果说明适当参数的高频ns PEFs能使细胞核膜发生穿孔,并起到扩大细胞部分穿孔半径的作用,可为后续实验研究选择高频纳秒脉冲参数提供依据。

纤维堆囊菌的多细胞形态发生过程

粘细菌是具有复杂多细胞行为的革蓝氏阴性细菌 ,纤维堆囊菌是粘细菌中唯一能够降解纤维素的粘细菌种属。本文通过扫描电子显微镜和相差光学显微镜 ,分析了纤维堆囊菌在纤维素基质上的生长和子实体形态发生的多细胞行为特征 。

卵巢癌多细胞球体对紫杉醇耐药及其机制的探讨

背景和目的:多细胞球体(multicellularspheroids,MCS)对传统细胞毒化疗药物的敏感性明显低于单层细胞。本实验旨在探讨卵巢癌MCS耐药的分子机制。方法:以单层细胞为对照,以三维培养方法获得的人卵巢癌A2780MSC和CAOV3MCS为模型,采用台盼蓝拒染法比较紫杉醇对单层细胞和MCS生长的抑制作用,流式细胞仪比较单层细胞和MCS细胞周期的分布和细胞凋亡率;采用流式细胞仪、蛋白质免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测单层细胞及MCS的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达及亚细胞分布;采用RT-PCR法检测mdr1mRNA表达水平。结果:(1)不同浓度的紫杉醇(0.2、2.0、10.0、20.0μmol/L)作用后,MCS细胞生长抑制率明显低于单层细胞(PA2780=0.003,PCAOV3=0.015);经20.0μmol/L的紫杉醇作用后,单层细胞的细胞凋亡率明显高于MCS,差异有统计学意义(PA2780=0.034,PCAOV3=0.032)。(2)流式细胞仪、蛋白质免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测提示P-gp在单层细胞中不表达,在MCS中表达明显升高(P均<0.05);RT-PCR证实MCS中有mdr1mRNA表达,而单层细胞中未检出其表达。(3)流式细胞仪检测提示将单层细胞培养成MCS时,G0/G1期细胞比率增加,S期和G2/M期细胞比率降低(P均<0.05)。结论:卵巢癌MCS对紫杉醇化疗耐药性增加,其高表达P-gp。

华南震旦系陡山沱组磷质震积岩及其与多细胞生物群相关性初探

埃迪卡拉纪(震旦纪)陡山沱期是Rodinia超大陆裂离的重要地质时期,是多细胞生物起源和发展的重要转折时期和磷质聚集时期,也是化学、气候和环境变化的剧烈时期。液化岩脉、液化角砾岩、脉化变形构造、以及阶梯状层内断层等磷质震积岩的发现,表明扬子地区在陡山沱期晚期至少发生过两次以上的地震事件。地震构造运动将地球内部积累能量快速地释放,可能是磷质来源和热水活动一种重要的方式或通道。海水中磷等无机营养盐分的增加,海水温度的升高,有利于多细胞生物的起源和发展,同时多细胞生物的繁盛又有利于磷的聚集。

上调p38表达提高卵巢癌多细胞球体顺铂敏感性

目的研究p38在卵巢癌多细胞球体化疗耐药中的作用。方法构建p38正义真核表达载体,稳定转染卵巢癌细胞并三维培养形成多细胞球体,RT-PCR及Western blot分析p38表达;CCK-8细胞毒性试验和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果(1)多细胞球体p38表达低于单层细胞。(2)FACS检测转染p38真核表达载体的多细胞球体经顺铂作用后,细胞凋亡率高于转染空载体和未转染的多细胞球体;(3)CCK-8细胞毒性试验示转染p38真核表达载体的多细胞球体相对于转染空载体和未转染的细胞球体对顺铂敏感性更高。结论p38介导顺铂对卵巢癌化疗耐药,上调p38表达,可提高卵巢癌多细胞球体对顺铂的敏感性。

3^H-脱氧葡萄糖掺入判断高能X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体的疗效

目的 用3H-脱氧葡萄糖(3H-DG)掺入判断6MV X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体(MTS)的疗效。方法 MTS分别作低剂量分割和单次照射,中等剂量单次照射。MTS消化成单个细胞后用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡比率。96孔盘每孔1个MTS,加37 kBq 3H-DG后掺入60 min,吸出MTS抽滤后测量β计数。结果 2～8 Gy低剂量照射后未见明显细胞周期阻滞和凋亡,分割照射组MTS的摄取减低,4.84 Gy单次照射后的摄取明显高于其他各组(P<0.05);15～30 Gy照射后,细胞G2-M期阻滞百分率增加,各照射组3H-DG摄取均小于对照组(P<0.05),随照射剂量递增,MTS摄取3H-DG的能力降低;15 Gy照射后第10天有活细胞增殖,25或30 Gy照射后第40天有活细胞增殖。结论 用3H-DG可以监测高能X线照射A549肺腺癌MTS的疗效,不同剂量照射后球体细胞的再增殖时间对于设计放疗方案和安排18F-FDG显像时间有指导作用。

A549肺腺癌多细胞球体^(32)P内照射和高能X线外照射后放射生物学效应

目的 探讨A5 4 9肺腺癌多细胞球体内照射合适的3 2 P吸收剂量 ,以便临床对肺癌实体瘤作间质治疗选择核素内照射吸收剂量时给予参考。方法 96孔盘每孔一个球体 ,15Gy3 2 P内照射 2 4h后当天用直线加速器产生的 6MV高能X线作另外一组球体的连续 15Gy外照射 ,剂量率 2Gy/min。照射结束后第 8和第 15d用3 H 脱氧葡萄糖 (3 H DG)和3 H胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)摄取实验 ,流式细胞仪、光镜和电镜观察。结果 ① 15Gy内、外照射结束 8d后3 H DG摄取明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,外照射组低于内照射组 (P <0 .0 5 ) ;3 H Tdr摄取低于对照组 (P <0 .0 1) ,内、外照射组比较P =0 .736 ;15d后 ,内、外照射组和对照组3 H DG摄取比较P >0 .0 5 ,照射组的3 H Tdr摄取低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,照射组之间无显著差异 (P =0 .995 )。②内、外照射结束 1周后 ,外照射组的G2 M %和凋亡率高于内照射组 ,2周后比较两者差别不大。③内照射后球体未明显生长 ,外照射组略大于内照射组 ;电镜观察到坏死和凋亡 ,外照射多于内照射。结论 同等剂量照射时外照射的杀伤力更大 ,为3 2

扬子板块伊迪卡拉(震旦)纪多细胞生物的发展与烃源岩的形成

生物的生产量以及被保存的沉积有机质是烃源岩形成的重要条件。多细胞生物出现并广泛地生活于扬子地区伊迪卡拉纪陡山沱期晚期的浅海中,生物之间相互依赖和共存的多层次化和复杂化生态系统的建立,使陡山沱期成为扬子地区生命演化和发展重要时期。陡山沱期的黑色泥(页)岩在沉积时为富含水份的粥性沉积物,同时当时海洋中的氧化-还原界面较浅,生物遗体可迅速地被沉积物所覆盖而形成烃源岩。伊迪卡拉纪陡山沱期是化学、气候和环境变化的剧烈时期,也是扬子地区生命演化、有机质生产力发展和烃源岩形成的一个重要时期。

A549肺腺癌多细胞球体药敏实验、Mdr1、MRP表达以及^(99m)Tc-MIBI摄取研究

目的探讨A549肺腺癌多细胞球体的多药耐药基因(mdr1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达,甲氧基异丁基异腈(MIBI)摄取结果能否预测化疗效果。方法①血浆高峰浓度的化疗药物顺铂(DDP)、长春花碱酰胺(VDS)、氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶,5-FU)、羟喜树碱(HCP)、丝裂霉素(MMC)、多柔比星(阿霉素,ADM)分别进行药物敏感性实验。②单层贴壁细胞培养。96孔板1个,每组4孔,2×104细胞/孔。③MTT检测观察疗效。细胞加化疗药后培养48h,然后加MTT5mg/mL,每孔20μL,4h后用酶标仪(490nm)测量吸光度值。④RT-PCR检测A549细胞和MCF-7耐药株的mdr1和MRP表达,β2-MG作内参照。⑤96孔板内每孔一个球体,每孔掺入99mTc-MIBI9.25×104Bq(2.5μCi),分别于60和120min结束掺入并测量γ计数。结果①A549细胞药敏实验对DDP不敏感,对MMC、VDS、ADM、5-FU、HCP敏感。②MCF-7长春新碱耐药株(MCF-7/VCR)对DDP、VDS不敏感,对MMC、ADM、5-FU和HCP较敏感。③A549细胞及球体的Mdr1/β2-MG为0,MRP/β2-MG分别为0.76和0.62;MCF-7耐药细胞的mdr1/β2-MG和MRP/β2-MG分别为35和4.36。④A549多细胞球体对99mTc-MIBI120min的摄取值高于60min摄取值(P<0.05)。结论A549多细胞球体的mdr1和MRP表达水平较低以及MIBI摄取阳性提示无多药耐药性产生,与化疗药物敏感性检测结果基本一致。A549细胞对DDP耐药说明除mdr1和MRP之外,还存在与转运蛋白间接相关的其他耐药机制。

人卵巢癌Skov3多细胞团簇对细胞外基质和人腹膜间皮细胞的黏附性研究及β1-整合素的影响

目的:通过测定卵巢癌细胞系Sk-ov3多细胞团簇对细胞外基质(ECM)和人腹膜间皮细胞的黏附性,以及β1整合素抗体对此黏附性的影响,探讨多细胞团簇在卵巢癌扩散和转移中的作用,以及β1整合素的作用。方法:Skov3团簇通过液体重叠培养系统获得。无血清的Skov3团簇悬液加入覆以ECM、牛血清蛋白(BSA,作为对照)或单层腹膜间皮细胞的96孔板,镜下记数团簇,培养6或12h。PBS洗掉未黏附细胞,同法记数。为了检测β1-整合素对团簇黏附的影响,团簇悬液中分别加入CD29mAb或正常鼠免疫球蛋白(mIgG,作为对照)培养30min,再同法培养、记数。结果:Skov3团簇对ECM的黏附率为38%±12%,而对BSA的黏附率为8%±16%,P=0·001。mIgG组黏附率为37%±10%,CD29mAb组黏附率为14%±3%,P=0·001,CD29mAb的黏附抑制率为60%。团簇黏附于单层间皮细胞,mIgG组黏附率为41%±11%,而CD29mAb组黏附率为17%±5%,P=0·001。CD29mAb的抑制率为55%±2%。结论:本实验结果提示:卵巢癌多细胞团簇可通过β1整合素黏附于ECM和人腹膜间皮细胞。因此,团簇在卵巢癌播散和转移中具有不可忽视的作用。β1整合素介导这种黏附,阻断β1整合素的功能,可部分阻断团簇的黏附。提示,抗细胞黏附可能为治疗卵巢癌提供一种新方法。

肿瘤多细胞球:一种近似实体瘤的体外肿瘤模型

本文介绍了一种简便易行的方法,用以在体外建立近似体内实体瘤的肿瘤模型———肿瘤多细胞球模型(multicellular tumor spheroids,MCTSs)。采用液滴重叠法(liquid overlay method)来构建HeLa肿瘤多细胞球模型,并在光镜下对肿瘤多细胞球的生长状况进行观察描述,再应用场发射扫描电镜和透射电镜观察MCTSs对肿瘤多细胞球的外部和内部超微结构及双光子激光共聚焦荧光显微镜对活细胞球进行激光层切,建MCTSs的三维立体形貌。还利用该模型对于表面不同电荷的量子点进行筛选。结果表明,该模型的建立相对简便易行,并具有明确形态学表征,可广泛应用于对抗肿瘤药物和纳米材料进入肿瘤方式和作用机制等研究。

卵巢癌患者多细胞球体化疗耐药研究进展

肿瘤多细胞球体是由多个肿瘤细胞组成的球状聚集体 ,组织结构与实体瘤微区相似 ,是研究实体瘤的良好模型。和肿瘤单细胞相比 ,多细胞球体对化疗耐药性增加 ,研究卵巢癌多细胞球体形成与耐药机制及其逆转对于提高卵巢癌化疗效果 。

粘附分子与卵巢癌SKOV3ipl多细胞团簇形成和耐药的关系

目的 :以卵巢癌SKOV3ipl细胞形成的多细胞团簇为模型 ,检测CD4 4、CD5 4、CD2 9、E 钙粘蛋白 (E cadherin ,E cad)mRNA水平及蛋白表达 ,探讨粘附分子与多细胞团簇形成及耐药的关系。方法 :用液体重叠系统获得SKOV3ipl多细胞团簇 ,以单层细胞为对照 ,用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测上述四种粘附分子mRNA水平 ,用流式细胞检测法 (FCM)测定其在团簇细胞中的表达。结果 :RT PCR结果表明 ,团簇细胞的CD4 4mRNA和CD2 9mRNA条带光密度值分别是单层细胞的 0 6 2 6和 0 792倍 ,CD5 4mRNA和E cadmRNA条带光密度值分别是单层细胞的 1 815和 1 344倍 ,提示单层SK OV 3ipl细胞形成团簇后CD4 4和CD2 9基因表达活性下调 ,而CD5 4和E cad基因表达活性增强。FCM结果表明 ,SKOV3ipl单层细胞及团簇细胞CD4 4表达率分别为 (75 995± 3 0 4 6 % )、(5 0 70 0± 9 35 1% ) ,团簇细胞CD4 4表达比单层细胞明显降低 (P =0 0 0 1)。和对照细胞相比 ,单层SKOV3ipl细胞不表达CD5 4 (P =0 5 6 3) ,形成团簇后表达明显升高 (P <0 0 1)。单层细胞和团簇细胞CD2 9都有高表达 ,阳性率分别为 (96 2 90± 1 2 0 1% )、(92 4 94± 2 0 5 5 % ) ,团簇细胞CD2 9表达明显低于单层细胞 (P =0 0 14 )。和对照细胞相比 。

多细胞趋磁原核生物研究进展

多细胞趋磁原核生物指一类由含有磁小体的革兰氏阴性原核细胞聚集而成的球形或者卵球形细胞聚集体,一般由745个细胞组成,直径在223μm之间,它们可在地磁场或外加磁场中沿磁力线定位并做定向运动。通过对巴西潟湖、美国盐湖、德国和法国海岸带花瓣型MMPs以及最近对中国青岛海域潮间带菠萝型MMPs研究结果的总结,分别从MMPs的生物学特征、细胞内容物以及生态学分布及分类地位等方面的研究进行综述,并对未来研究方向进行一定的展望。

中链脂肪酸复合物和亚油酸对卵巢癌多细胞球体化疗效果的影响

目的观察中链脂肪酸复合物(MCFA)和亚油酸(LA)对卵巢癌多细胞球体(MCS)化疗效果的影响。方法分别用含有MCFA和LA的培养液培养卵巢癌MCS,观察在化疗药物顺铂(DDP)作用下,MCS细胞抑制率和细胞周期各时相细胞数量的变化情况。结果当DDP浓度为10μmol/L时,MCFA组(51.60%)和LA组(42.97%)的细胞抑制率均明显高于对照组(30.27%)(P<0.01),其中MCFA组抑制率也明显高于LA组(P<0.05)。当两种脂肪酸分别与DDP(10μmol/L)合用时,MCFA+DDP组和LA+DDP组处于G0/G1期的细胞数量均明显高于其他组(P<0.05),且MCFA+DDP组也明显高于LA+DDP组[(70.2±5.3)%vs.(68.3±4.5)%,P<0.05]。结论MCFA和LA都可增强DDP的化疗效果,其中MCFA的作用更强。MCFA和LA的协同作用可能与其阻滞卵巢癌MCS细胞的增殖和抑制癌细胞生长有关。

FAK靶向RNAi重组体的构建及其抗多细胞球体形成效应

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制黏着斑激酶(FAK)表达,并探讨其对结肠癌多细胞球体(MCSs)形成的影响。方法针对FAK cDNA序列设计并合成1对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其对照序列,经退火后插入pGenesil-1中构建重组体。经双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染结肠癌HT29细胞,并用G418稳定筛选,采用Real-time PCR和Western blot检测干扰前后FAK在HT29内的表达变化,并作细胞悬浮培养观测靶向干扰FAK对MCSs形成的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;靶向干扰FAK后,其mRNA和蛋白表达分别显著下调(79.20±2.97)%和(78.47±4.39)%,且细胞不易聚集形成MCSs。结论成功构建FAK靶向RNAi重组载体,显著地抑制FAK表达,并能有效地抑制MCSs的形成。

A549肺腺癌多细胞球体的生长特性

背景与目的 放射生物学试验时单层细胞或移植瘤均存在不同程度的局限性，而多细胞球体（multieellularspheroid，MTS）作为实体瘤的模型应用较多。本研究旨在了解A549肺腺癌MTS的生长特性，有助于选择最佳MTS用于实验研究。方法1．75×10^7的A549细胞株35mL转移人2％琼脂糖封底的100mm培养皿中旋转培养，60r／min，40h时分离MTS到2％琼脂糖封底的96孔板中，每孔一个MTS，静止培养。结果 旋转培养阶段A549MTS形态较圆，大小均一，细胞间连接不紧密。经过约10天的静止培养，直径在429～570μm时MTS的细胞间连接紧密，静止培养26．5天时直径达1358．5μm，已经不能用于试验。电镜观察MTS的细胞生长良好，很少有凋亡和坏死。MTS的细胞周期以G0～G1期占优势。结论 旋转结合静止培养方法简单，所得MTS的生长特性与实体瘤相似，直径在500μm左右时最适合用于实验研究。