重组旋毛虫53000抗原蛋白联合亚胺培南对多细菌感染脓毒症小鼠的保护作用

目的观察重组旋毛虫53000抗原蛋白（rTsP53）联合亚胺培南（IMP）对脓毒症小鼠的保护作用，初步探讨其可能机制。方法按随机数字表法将雄性BALB／e小鼠分为5组，采用盲肠结扎穿孔术（CLP）构建多细菌感染小鼠脓毒症模型（CLP组），假手术（Sham）组仅开腹、关腹，不进行结扎。CLP＋IMP组、CLP＋rTsP53组、cLP＋IMP＋rTsP53组分别于术后6h起腹腔注射IMP20mg／kg＋0．1mL白蛋白、rTsP53蛋白6mg／kg＋0．1mL生理盐水（Ns）、IMP20mg／kg＋rTsP53蛋白6mg／kg；Sham组、CLP组则给予0．1mL白蛋白＋0．1mLNS；12h重复1次，至实验结束。各组取20只小鼠观察72h存活情况；并于术后0、6、12、24、36、48、72h各取3只小鼠血标本，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清细胞因子水平，全血培养进行活菌菌落计数。24h处死小鼠取小肠组织，透射电镜下观察小肠黏膜上皮细胞超微结构。结果①cLP＋IMP＋rTsP53组小鼠存活率明显高于CLP组、CLP＋IMP组、CLP＋rTsP53组（85％比20％、55％、25％，均P〈0．05o②Sham组各时间点全血均未培养出细菌；各实验组术后6h活菌计数均显著升高，CLP组呈先升后降趋势，于24h达峰值（×10^6cfu／L：12．74±2．33）；CLP＋rTsP53组12h起显著高于CLP组，于36h达峰值（×10^6cfu／L：22．13±4．28）后逐渐下降；CLP＋IMP组、CLP＋IMP＋rTsP53组于6h达峰值（×10^6cfu／L：5．72±0．50、5．49±0．59）后呈逐渐下降趋势，12h起即显著低于CLP组。③各实验组术后6h起血清细胞因子水平均明显高于Sham组。CLP组肿瘤坏死因子-α（TNF-α）呈先升后降趋势，于36h达峰值（ng／L：1422：67±72．19），CLP＋IMP组、CLP＋rTsP53组、cIJP＋IMP＋rTsP53组达峰值时间提前至12h（nglL：1376．29＋44．67、929．36±40．42、809．61±22．61oCLP组和CLP＋IMP组白细胞介素-6（IL-6）于24h达峰值（ng/L：215．39±16．05、191．63±8．99），CLP＋rTsP53组、cLP＋IMP＋rTsP53组达峰值时间提前至12h（ng／L：113．01±12．11、92．43±6．11℃ LP组IL-4、IL-10均逐渐升高至72h达峰值（ng／L：366．25±24．25、923．14±30．36），CLP＋IMP组IL-4、IL-10分别于12h、24h达峰值（ng／L：281．47±16．33、555．67±13．57）后逐渐下降，CLP＋rTsP53组、cLP＋IMP＋rTsP53组IL-4、IL—10均逐渐升高至72h达峰值[IL-4（ng／L）分别为453．14±18．53、410．43±15．75，IL-10（ng/L）分别为1185．61±16．74、1006．77±36．91]。cLP＋IMP＋rTsP53组12h起各炎性因子水平均显著低于CLP＋IMP组、CLP＋rTsP53组。④术后24h，cLP＋IMP＋rTsP53组小肠黏膜上皮微绒毛、细胞连接、线粒体等超微结构损伤较CLP组、CLP＋IMP组、cLP＋rTsP53组明显减轻。结论rTsP53蛋白联合IMP干预可使多细菌感染脓毒症小鼠促炎因子水平降低、抑炎因子升高、存活率提高；而rTsP53蛋白单独干预未能显现出保护作用，且血细菌计数升高。