藏茵陈上调大鼠肝细胞膜转运蛋白多耐药相关蛋白3和核受体孕烷X受体表达

目的:观察藏茵陈对正常大鼠多耐药相关蛋白3(MRP3)和核受体孕烷X受体(PXR)表达的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为藏茵陈组5只,藏茵陈100 mg·kg-1·d-1灌胃7 d;对照组5只,同体积0.9%氯化钠注射液灌胃。7 d后麻醉处死2组大鼠,取肝脏组织行HE染色检测肝脏形态变化,分别提取肝脏组织RNA、膜蛋白及核蛋白,采用实时聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹检测膜转运蛋白MRP3和核受体PXR在转录与蛋白水平的表达变化。结果:给予藏茵陈后,与0.9%氯化钠注射液比较,未影响肝脏组织的形态结构;藏茵陈可显著刺激正常大鼠肝细胞膜转运蛋白MRP3表达(P<0.01);也可明显上调核受体PXR水平增高(P<0.01)。结论:藏茵陈刺激大鼠肝细胞膜蛋白MRP3的表达上调可能与核受体PXR途径相关。

复方茵丹汤对急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织法尼醇受体及多耐药相关蛋白3表达的影响

目的研究复方茵丹汤对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的大鼠急性肝内胆汁淤积的作用机制。方法将108只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,中药复方茵丹汤高、中、低剂量组和阳性药对照组,每组18只,依据取材时间不同又将各组随机分为24、48、72 h 3个亚组,每组6只。模型组、中药组、阳性药对照组大鼠一次性给予2%ANIT按100 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃造模,正常对照组予等容积色拉油灌胃。造模2 h后,中药高、中、低剂量组分别给予生药含量为24.48 g·kg^(-1)·d^(-1)、12.24 g·kg^(-1)·d^(-1)和6.12 g·kg^(-1)·d^(-1)的复方茵丹汤中药煎剂l ml/100 g体质量灌胃,模型组和正常对照组给予等容积生理盐水灌胃,阳性药对照组给予67.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)熊去氧胆酸(UDCA)水溶液l ml/100 g体质量灌胃,均1次/d。造模后分别于24、48、72 h处死相应时相大鼠,采用RT-q-PCR、Western Blot和免疫组化技术检测法尼醇受体(FXR)及多耐药相关蛋白3(MRP3)在大鼠肝组织的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 RT-q-PCR结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR mRNA表达均明显降低(P值均<0.05);与同时相模型组比较,中药各剂量组及UDCA组FXR mRNA表达明显升高(P值均<0.05);中药高剂量组各时相FXR mRNA表达明显高于中、低剂量组(P值均<0.05)。与同时相正常组比较,模型组MRP3 mRNA表达均显著升高(P值均<0.05);与同时相模型组比较,除低剂量组24 h外,中药各剂量组及UDCA组MRP3 mRNA表达均明显升高(P值均<0.05);中药高剂量组48 h、72 h的MRP3 mRNA表达均明显高于中、低剂量组(P值均<0.05)。免疫组化结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR蛋白表达均显著降低(P值均<0.05);与模型组比较,24 h中药各剂量组及各时相UDCA组FXR蛋白表达均显著升高(P值均<0.05);中药高剂量组FXR蛋白表达明显高于同时相中、低剂量组和模型组(P值均<0.05)。与同时相正常组比较,模型组MRP3蛋白表达显著升高(P值均<0.05);与同时相模型组比较,除低剂量24 h外,中药各剂量组及UDCA组MRP3蛋白表达明显升高(P值均<0.05);中药高剂量组MRP3蛋白表达显著高于同时相低剂量组及72 h中剂量组(P值均<0.05)。Western Blot结果显示,与同时相正常组比较,模型组FXR蛋白表达均显著降低(P值均<0.05);与同时相模型组比较,中药各剂量组及UDCA组FXR蛋白表达均显著升高(P值均<0.05);中药高剂量组FXR蛋白表达均显著高于同时相中、低剂量组(P值均<0.05)。与同时相正常组比较,模型组MRP3蛋白表达均显著升高(P值均<0.05);与模型组比较,48 h及72 h中药中、高剂量组及UDCA组MRP3蛋白表达均明显升高(P值均<0.05);中药高剂量组48 h和72 h的MRP3蛋白表达均高于相应的中、低剂量组(P值均<0.05)。结论复方茵丹汤对ANIT灌胃诱导AIC大鼠的治疗作用可能与其上调FXR和MRP3基因、蛋白表达有关。

IL-18通过NF-κB通路调控MRP3对ANIT引起的胆汁淤积模型的影响及其机制

目的探讨IL-18通过NF-κB通路调控MRP3对ANIT引起的胆汁淤积模型的影响。方法选取10只大鼠用ANIT诱导建立胆汁淤积模型,另取10只作为对照组,HE染色观察肝组织病理变化,全自动生化仪检测大鼠血清ALP、ALT、ALP、TB、DB、TBA以及肝组织TBA含量。取肝组织培养肝细胞,将正常大鼠肝细胞培养出的细胞作为空白组(A组),胆汁淤积模型大鼠肝细胞培养出的细胞分为低(C组)、中(D组)、高浓度组(E组)和非干预模型组(B组),每组10个样本。C、D、E组肝细胞分别给予IL-18(10、30、100 ng/mL)不同浓度处理,A组和E组给予同体积的生理盐水处理。Western blot和RT-PCR分别检测大鼠肝组织IL-18、p-p65、MRP3、YY1、FXR蛋白及其mRNA。结果与对照组比较,胆汁淤积模型大鼠肝脏出现黄染,边缘变钝,空泡变性,汇管区较多纤维组织增生,可见肝细胞出现脂肪变性、轻度坏死。与对照组比较,胆汁淤积模型组血清ALP、ALT、AST、TB、DB、TBA以及肝组织TBA的含量均升高(均P<0.05)。与对照组比较,胆汁淤积模型组大鼠肝组织IL-18、p-p65、YY1、MRP3蛋白及其mRNA相对表达量均升高(均P<0.05),FXR蛋白及其mRNA相对表达量降低(P<0.05)。五组肝细胞p-p65、YY1、MRP3蛋白及其mRNA相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05),与A组比较,B、C、D、E组均升高(均P<0.05);与B组和C组比较,D和E组均升高(均P<0.05),且E组高于D组。五组肝细胞FXR蛋白及其mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),与A组比较,B、C、D、E组均降低(均P<0.05);与B组和C组比较,D和E组均降低(均P<0.05),且E组低于D组。结论IL-18表达和NF-κB通路作用与胆汁淤积模型发生相关,其可能作用机制为IL-18通过诱导p65磷酸化,激活NF-κB通路调控YY1及FXR促进MRP3表达而影响胆汁淤积模型发病。