禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR诊断方法的建立

利用分子生物学方法,选择禽流感病毒的M基因、新城疫病毒的F基因以及传染性支气管炎病毒的N基因,分别在基因序列的保守区域设计1对特异性引物,利用所合成的3对引物对相应靶基因进行RT-PCR扩增,在优化单项RT-PCR条件的基础上,建立禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR的检测方法,同时对该检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这3对引物分别能特异性地扩增出禽流感病毒的M基因片段、新城疫病毒的F基因片段及传染性支气管炎病毒的N基因片段,大小分别为385 bp、520 bp和748 bp,初步建立了快速、敏感、特异鉴别检测禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒的分子诊断方法。

H1、H3、H9亚型禽流感病毒多联RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的H1、H3、H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列,通过多序列对比,在保守区域内设计了3对特异性引物,对PCR反应体系的各组分进行试验调整,建立了一种H1、H3、H9亚型AIV多联RT-PCR检测方法,在2h内即可判断待检样品中是否有这3种亚型AIV的存在。经灵敏性及特异性试验以及临床样品检测结果证明,该方法灵敏度高、特异性好、结果准确,能够作为H1、H3、H9亚型AIV的快速检测方法。

H5、H7和H9亚型禽流感分子鉴别诊断方法的建立

为快速、敏感、特异地鉴别诊断现较为重要的禽流感病毒亚型,根据H5、H7和H9亚型禽流感病毒HA基因序列的保守区域设计出并合成3对特异性引物,利用这3对引物对H5、H7和H9亚型禽流感病毒的HA基因片断进行多联RT-PCR扩增,并对多联RT-PCR检测方法进行敏感性及特异性实验。结果表明:3对引物能特异性地扩增出H5、H7和H9亚型禽流感病毒HA基因片段,大小分别为490bp,365bp和686bp;该检测方法敏感性高,特异性强;初步建立起快速、敏感、特异地鉴别检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的分子诊断方法。