牙鲆黏膜IgM与多聚免疫球蛋白受体同源分子的应答动态研究

本文采用注射和浸泡灭活鳗弧菌(Vibrio anguillarum)免疫牙鲆(Paralichthys olivaceus),研究其黏液(鳃、皮肤和肠)和胆汁中特异性免疫球蛋白M(IgM)及多聚免疫球蛋白受体同源分子(pIgRL)的变化,分析这两种分子在肠组织中的分布及共定位。研究显示,两种免疫方式均可诱导牙鲆黏液及胆汁中pIgRL和IgM水平升高,pIgRL应答时间早于IgM。浸泡免疫后,牙鲆的鳃、皮肤和肠的黏液及胆汁中pIgRL水平分别于第3、5、7和10天达到峰值,而IgM分别于第7、10、21和21天达到峰值。注射免疫后,上述分泌液中pIgRL分别于第5、7、10和10天达到峰值,而IgM在皮肤和鳃黏液中于第14天达到峰值,在肠黏液和胆汁中于第21天达到峰值。多重染色结果表明:免疫前,pIgRL和IgM阳性信号主要位于肠黏膜固有层;浸泡免疫后,IgM信号增强,随后IgM大量出现于肠上皮层,第14天时荧光最强,pIgRL信号也明显增强且少量出现在肠上皮层,在肠黏膜中观察到代表pIgRL和IgM共定位的橘黄色荧光。ImageJ定量分析显示,二者共定位的像素占比在免疫前为19%,免疫后第3、7、14、21和28天时分别为25%、41%、35%、28%和28%,表明存在IgM-pIgRL复合物的跨上皮转运。研究结果为深入理解pIgRL在黏膜免疫防御中的作用和揭示鱼类黏膜免疫系统功能提供了基础资料。

细胞间黏附分子-1和多聚免疫球蛋白受体在唾液腺上皮细胞中的表达及临床意义

目的探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和多聚免疫球蛋白受体(p IgR)在干燥综合征患者和健康人群唾液腺上皮细胞的表达差异及临床意义。方法收集50例干燥综合征患者(研究组)和40例健康者(对照组)唾液腺上皮细胞,分别运用RTPCR技术、免疫组化技术检测唾液腺上皮细胞中ICAM-1及p IgR的表达情况。结果研究组唾液腺上皮细胞中ICAM-1 mRNA表达水平和ICAM-1蛋白表达水平分别为(6. 573±0. 412)和(0. 419±0. 027),对照组分别为(0. 641±0. 342)和(0. 209±0. 020),研究组表达水平均明显高于对照组(P均<0. 05),研究组p IgR mRNA表达水平和p IgR蛋白表达水平分别为(0. 416±0. 118)和(0. 237±0. 037),对照组分别为(5. 064±0. 275)和(0. 403±0. 018),研究组表达水平均明显低于对照组(P均<0. 05)。结论 ICAM-1、p IgR异常表达与干燥综合征密切相关,ICAM-1高表达及p IgR低表达可能是诱发干燥综合征的一个重要发病机制。

大菱鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆及表达分析

鱼类多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)是黏膜免疫系统的关键因子,能够介导多聚免疫球蛋白向黏液中的转运和分泌。本研究利用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification ofcDNA ends,RACE),首次得到了大菱鲆(Scophthalmus maximus)pIgR完整的cDNA序列,全长1 584 bp,该序列包含一个1 005 bp的开放阅读框及5’和3’UTR,编码334个氨基酸。同源性比较发现,大菱鲆pIgR氨基酸序列与牙鲆(Paralichthys olivaceus)、斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)鲀、红鳍东方(Takifugu rubripes)的序列相似性分别是74%、74%和59%,表现出较高的保守性。多序列比对显示,硬骨鱼pIgR包含两个ILD(Ig-like domain),分别对应哺乳类的ILD1和ILD5区域。系统进化树分析表明,大菱鲆pIgR和牙鲆的聚为一支。半定量RT-PCR显示,pIgR在健康大菱鲆各组织中均有表达,但表达水平不同,其中在黏膜相关淋巴组织中表达最强。经灭活的鳗弧菌菌液浸泡处理后,实时荧光定量PCR结果显示,大菱鲆各组织中pIgR的相对表达量在72 h内均呈现先增加后减少的趋势,在48 h内均有一个最高值出现,且黏膜相关淋巴组织中峰值出现较早,说明pIgR在硬骨鱼类黏膜免疫中发挥了重要作用。

多聚免疫球蛋白受体(pIgR)在粘膜免疫中的重要功能

多聚免疫球蛋白受体(pIgR)属于Ⅰ型跨膜糖蛋白,可与多聚免疫球蛋白A和多聚免疫球蛋白M特异性结合,通过穿胞转运,将它们从上皮细胞基底侧膜转运到顶膜,并最终分泌到外分泌液中去.在此过程中,多聚免疫球蛋白受体的细胞外段被水解,释放出与多聚免疫球蛋白A或多聚免疫球蛋白M相结合的细胞外段(又称为分泌成分).分泌成分是sIgA分子的重要组成部分,直接参与sIgA的粘膜防御功能,而且在被动粘膜免疫中也有重要作用.多聚免疫球蛋白受体通过介导细胞内多聚免疫球蛋白的转运,可以在粘膜的腔面阻止病原体粘附,在上皮细胞内中和病毒,也可以将固有层内的抗原分泌出去.因此,多聚免疫球蛋白受体的有效分泌是多聚免疫球蛋白发挥粘膜防御功能的必要条件.但在某些情况下,该受体也可以介导微生物对上皮屏障的入侵.多聚免疫球蛋白受体是高度N-糖基化的,其分子中独特的糖链结构,可能与受体的穿胞转运、sIgA在粘膜的正确定位,以及抗原对上皮细胞的粘附有关.多聚免疫球蛋白受体和分泌成分参与的多重分子机制,使它们在粘膜免疫中起着举足轻重的作用.

多聚免疫球蛋白受体(pIgR/SC)在肺癌组织的表达及其临床意义

背景与目的:探讨多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor/secretory component,pIgR/SC)在肺癌组织中的表达情况及其临床意义。材料与方法:采用大样本石蜡包埋组织(包含344例肺鳞癌、93例肺腺癌、47例小细胞肺癌以及30例同组患者的正常肺组织)构建的组织微阵列,进行免疫组织化学(SP法)染色,分析pIgR/SC蛋白表达情况及其与肺癌临床分期和病理分级间的关系。结果:pIgR/SC蛋白在肿瘤组织(尤其是非小细胞肺癌)中的表达水平(54.1%)显著高于正常对照组织(6.7%),其差异具有统计学意义(P<0.001);在肺癌组织不同病理类型之间的差异具有统计学意义(P<0.001),其表达的阳性率从高到低依次为:鳞癌66.3%>腺癌34.4%>小细胞肺癌4.3%。而pIgR/SC蛋白表达水平在肺癌的临床分期和组织分级间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:pIgR/SC蛋白的异常表达反应了肺癌细胞组织学来源的差异,其过表达可能出现在肺癌(尤其是鳞癌)发生发展的早期阶段。

人多聚免疫球蛋白受体转基因鼠的建立

目的构建携带有多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的转基因鼠,使其能以近乎自然的状态感染EBV,观察EBV在鼻咽部病变过程中的作用。方法采用角质上皮特异性启动子ED-L2调控的pIgR基因,用显微注射方法将其导入受精卵中,使该基因能在F0代转基因鼠鼻咽部特异性表达。结果PCR检测F0代pIgR基因阳性率达37.5%(6/16),Southern杂交F0代pIgR基因阳性率为12.5%(2/16)。结论表达多聚免疫球蛋白受体的转基因动物有望成为研究EBV病毒致病机制的一种新的动物模型。

血浆多聚免疫球蛋白受体(PIgR/SC)与甲胎蛋白(AFP)联合检测对肝癌的诊断价值

目的探讨血浆多聚免疫球蛋白受体(PIgR/SC)、甲胎蛋白(AFP)对原发性肝癌(PHC)的诊断价值及联合检测的意义。方法选取50例原发性肝癌患者、30例肝良性占位患者、45例肝硬化患者和60例健康志愿者进行研究,抽取每位研究对象4 mL空腹静脉血,采用电化学发光全自动免疫分析系统检测患者血清中的甲胎蛋白(AFP)浓度,采用自行包被的ELISA检测板和OD值半定量法检测血浆PIg R/SC。肝癌患者手术切除后1周重复检测AFP和PIgR/SC水平。结果肝癌、肝良性占位、肝硬化和志愿者4组患者PIgR/SC和AFP水平差异有统计学意义(P<0.05),两两分析,肝癌患者PIg R/SC高于肝良性占位患者、肝硬化患者和志愿者(P<0.05)。PIgR/SC诊断原发性肝细胞肝癌的敏感度为76%高于AFP的66%,特异性为68.9%,低于AFP的81.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测PIgR/SC、AFP可提高肝癌患者的诊断率。PIgR/SC与AFP串联检测诊断肝癌的特异度为95.6%,2项指标并联检测诊断肝癌的灵敏度为92.0%,明显高于单用PIgR/SC或AFP(P<0.05);结论联合检测PIgR/SC、AFP可显著提高原发性肝癌患者的诊断率。

多聚免疫球蛋白受体在判断肝癌复发转移中的临床意义

目的：分析多聚免疫球蛋白受体（PIgR）在判断肝癌复发转移中的临床价值。方法选取江苏省连云港市第二人民医院2010年11月～2013年6月收治的40例肝癌患者，作为观察组（A组）；同时选取同期在本院接受体检的40例健康体检者，作为对照组（B组），对以上受检者实施免疫组织化学（SP法）染色，在此基础上，分析pIgR/SC蛋白表达的情形，以及肝癌临床分期与病理分级之间的关联。结果在pIgR/SC蛋白表达水平上，观察组的表达率为60%，对照组为5%，差异有统计学意义（P＜0.05）。在对肝癌组织进行不同病理类型分级时，2组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。pIgR/SC蛋白表达水平在肝癌临床分期、组织分级之间的比较差异无统计学意义。结论多聚免疫球蛋白受体的异常表达显示出肝癌细胞在组织学的来源上具有差异性，其过表达有可能出现在肝癌发生发展的早期阶段。

牙鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆、表达及鉴定

采用PCR扩增、构建重组高效表达载体的方法,进行了牙鲆多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆、原核表达研究,并利用SDS-PAGE、western-blot及ELISA方法对纯化的重组蛋白特性进行了分析。结果表明,PCR扩增出pIgR开放阅读框(ORF)基因全长为1005 bp,所构建的pET-32(a)-pIgR重组质粒经PCR和双酶切鉴定含有ORF全长基因。SDS-PAGE结果表明,表达的目的蛋白相对分子质量为58 kDa,与理论预期值一致,IPTG诱导6h后表达量趋于稳定,经亲和层析纯化得到高纯度的重组蛋白。Western-blot结果表明,重组pIgR能够与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应;ELISA结果表明重组pIgR能够与牙鲆IgM发生特异性结合。本研究获得了纯化的重组pIgR,证明其具有IgM结合活性,为下一步研究牙鲆pIgR的转运机制及在黏膜免疫防御中的作用机理提供了分子基础。

中华鳖免疫球蛋白的理化特性——中华鳖IgM对2-巯基乙醇敏感性、与人IgM的同源性及其相对分子质量的研究

凝集法发现 ,当鳖抗嗜水气单胞菌的血清与 2 -巯基乙醇一起孵育后 ,再与嗜水气单胞菌反应 ,无凝集现象 ,说明鳖免疫球蛋白对 2 -巯基乙醇敏感。用交叉免疫扩散法 ,发现鳖 Ig M与羊抗人 Ig M血清无沉淀反应 ,只与兔抗鳖 Ig M血清出现沉淀反应 ,而人 Ig M只与羊抗人 Ig M血清发生沉淀反应 ,不与兔抗鳖 Ig M血清反应 ,这些表明鳖 Ig M与人 Ig M之间无免疫同源性。用 SDS- PAGE电泳检测到中华鳖免疫球蛋白的相对分子质量约为 8.7× 10 5,重链约为 6 .3× 10 4 ,轻链约为 2 .2× 10

TNF-α调节多聚免疫球蛋白受体和干扰素调节因子-1的表达

目的研究TNF-α对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(PIGR)和干扰素调节因子-1(IRF-1)的影响。方法用不同浓度的TNF-α刺激Caco-2细胞后,采用Real-time PCR方法检测Caco-2细胞表达PIGR和IRF-1的变化。结果 TNF-α浓度为50、100、200和400 ng/mL时,PIGR mRNA和IRF-1 mRNA的相对含量分别为(3.14±0.14)、(5.23±0.19)、(6.45±0.23)、(8.44±0.18)和(6.20±0.21)、(9.00±0.19)、(10.90±0.23)、(14.50±0.25),与无TNF-α刺激时比较,Caco-2细胞表达PIGR和IRF-1明显增加(P<0.01)。结论 TNF-α上调Caco-2细胞中PIGR和转录因子IRF-1的表达。

血浆多聚免疫球蛋白受体(PIgR/SC)对肝癌诊断的作用研究

目的:探讨血浆PIgR/SC对原发性肝癌的诊断价值.方法:选取60例原发性肝癌患者、60例肝硬化患者和60例健康志愿者进行研究,抽取患者4mL空腹静脉血,采用电化学发光全自动免疫分析系统检测患者血清中的AFP浓度,采用自行包被的ELISA检测板和OD值半定量法检测血浆PIgR/SC.肝癌患者手术切除后1个月重复检测AFP和PIgR/SC水平.结果:肝癌、肝硬化和志愿者三组患者PIgR/SC和AFP水平差异有统计学意义(p＜0.01),两两分析,肝癌患者PIgR/SC高于肝硬化患者和志愿者(p＜0.01),肝硬化患者与志愿者差异无显著性差异(p＞0.05);肝癌患者AFP高于肝硬化患者和志愿者,肝硬化患者高于志愿者,差异均有统计学差异(p＜0.01).PIgR/SC诊断原发性肝细胞肝癌的敏感度为90.5％高于AFP的54.8％,特异性为84.6％,低于AFP的91％,约登指数为0.751,高于AFP的0.458,AUC面积为0 920,高于AFP的0.761.对两种检测指标的AUC比较,差异有统计学意义(Z=3.251,p＜0.05).结论:PIgR/SC在原发性肝癌诊断中价值高于AFP,具有较高的临床价值.

多聚免疫球蛋白受体在变应性鼻炎患者鼻黏膜的表达及临床意义

目的探讨多聚免疫球蛋白受体(pIgR)在变应性鼻炎(AR)患者下鼻甲黏膜的表达情况。方法采集2016年1月~2017年5月在我科行鼻内镜手术的AR患者12例和10例同期行鼻内镜手术治疗鼻中隔偏曲患者(对照组)正常的下鼻甲鼻黏膜组织,采用免疫组织化学检测法及实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测鼻黏膜组织pIgR和IgA的mRNA和蛋白表达情况。结果免疫组织化学染色显示,pIgR主要表达在鼻黏膜的上皮层和固有层腺体,IgA主要表达在鼻黏膜的固有层;AR组鼻黏膜pIgR表达水平明显低于对照组,IgA表达水平明显高于对照组(P<0.05)。RT-PCR显示,AR组鼻黏膜pIgR mRNA的表达水平明显低于对照组,而IgA mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论多聚免疫球蛋白受体在AR鼻黏膜的表达下调,提示pIgR介导的天然免疫在鼻黏膜防御作用下降,可能是AR的一个重要发生机制。

免疫球蛋白重链可变段和T细胞受体可变段的分子进化研究

为阐明免疫球蛋白(Ig)和T细胞受体(TCR)在抗体多样性产生机理上的异同,作者比较了Ig重链可变段(Ig V_H)和TCR可变段(TCR V)的密码子替代率和协同进化,并分析异同的原因。共搜集8种鼠和3种人的TCR α链可变段(V_α),11种鼠和1种人的TCRβ链可变段(V_β),以及2种鼠和4种人的T细胞γ链可变段;同时搜集11种鼠、3种人、3种南美鳄鱼和1种鲨鱼的Ig V_(H_(o))研究结果揭示:(1)对编码蛋白质的密码子来说,TCR V(包括V_α和V_β)的核苷酸替代率为Ig V_H的2.4倍,说明前者有更高的替代率。(2)以协同进化而言,TCR V和Ig V_H的基因重复率分别为1.7×10^(-6)和1.6×10^(-6)/基因年。两者几乎相同,均系低速保持者。TCR V的数目(V_α为100,V_β为30)远少于Ig V_H(数目为300),原因是前者受到主要组织相容性复合体的制约,即受到负选择,这与中性学说观点相一致。文章还讨论了体细胞突变和DNA重排对两类抗体多样性产生上的作用,并探讨了IgV_H和TCR V的假基因问题。

半滑舌鳎多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆和表达分析

本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain, ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。

多聚免疫球蛋白受体与EBV感染上皮细胞

病毒受体决定了病毒对细胞、动物的易感性。EB病毒与鼻咽癌发病关系密切,但EBV进入上皮细胞的机制至今不明。本文对多聚免疫球蛋白受体的结构、功能及其与EBV感染上皮细胞的关系作一综述。

多聚免疫球蛋白受体功能及其表达调节机制

黏膜免疫是机体免疫系统的重要组成部分,鱼类的皮肤、鳃、肠等黏膜免疫相关组织及黏液是机体免疫保护的第一道防线。分泌型抗体(SIgs)是黏膜免疫的主要组成成分,经多聚免疫球蛋白受体(pIgR)介导的转胞吞作用穿过上皮细胞转运至黏膜表面发挥免疫防御功能。目前,对哺乳动物pIgR介导SIgs的转运过程,pIgR功能及调节因子,以及细胞因子、微生物、激素等调节pIgR表达的信号通路已研究得较透彻,而鱼类pIgR研究多集中于基因克隆、组织差异表达等,对pIgR表达调节方面的研究较少。本文综述了哺乳动物pIgR的功能、调节机制以及硬骨鱼类pIgR的相关研究进展,为探究鱼类pIgR表达的调节机制提供参考资料。

多聚免疫球蛋白受体在肝细胞癌发病及诊治中的作用

肝脏慢性炎症是促进肝细胞癌发展的危险因素,在病毒感染的情况下,Fc受体信号加强也会进一步加重炎症反应,参与癌变的过程。多聚免疫球蛋白受体(pIgR)不仅在抗感染免疫第一线发挥至关重要的作用,在早期肝细胞癌的肿瘤转移和肿瘤生长中也发挥促进作用。将p IgR鉴定为早期肝癌患者转移潜能的预测指标可以有助于早期患者的分层和制订治疗决策,对改善患者预后具有积极意义。靶向抑制pIgR/Yes信号级联反应作为一种潜在的治疗方案可能会为控制肿瘤大小以允许切除或移植提供更多的治疗选择。

鼻咽癌组织中多聚免疫球蛋白受体的表达及意义

目的：观察多聚免疫球蛋白受体（ pIgR）在鼻咽癌组织中的表达变化，并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测279例鼻咽癌患者（鼻咽癌组）和30例慢性鼻炎患者（对照组）组织中的pIgR，并分析其与临床病理特征的关系。结果观察组和对照组的pIgR阳性表达率分别为15．8％（44／279）、90．0％（27／30），P＜0．05。 pIgR表达与鼻咽癌患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤病理类型和临床分期无关（P均＞0．05），与血清EB病毒壳抗原免疫球蛋白A（VCA／IgA）、EB病毒早期抗原免疫球蛋白A有关（P均＜0．05）。鼻咽癌组5年总生存率为64．6％，pIgR表达阳性者5年总生存率明显低于pIgR表达阴性者（χ2＝4．714，P＝0．030）。多因素分析显示，仅T分期和N分期与总生存期相关。结论 pIgR在鼻咽癌组织中呈低表达，可能参与鼻咽癌的发生、发展，可作为鼻咽癌患者生存期的预测指标。

罗非鱼多聚免疫球蛋白受体的生物学特性及对罗非鱼湖病毒增殖的影响

罗非鱼湖病毒TiLV是一种新发RNA病毒,对罗非鱼养殖业造成巨大威胁。为明确罗非鱼(Oreochromis niloticus)多聚免疫球蛋白受体基因(OnpIgR)的序列和结构特征及其对TiLV增殖的影响,本研究首先对PCR扩增获得的OnpIgR完整的ORF,进行了结构域预测、三维结构预测以及遗传进化树分析,然后采用荧光定量PCR方法分析了罗非鱼感染TiLV后该基因在各组织的表达模式,最后构建了OnpIgR过表达质粒,初步研究了OnpIgR对TiLV增殖的影响。结果表明,PCR扩增获得了完整的OnpIgR ORF序列,长度为1023 bp,该ORF序列具有一个信号肽,两个Ig样结构域,同源建模结果显示,pIgR蛋白整体呈扭曲的“L”型,主要由反平行β片层和无规卷曲组成;系统发育树显示OnpIgR与大口黑鲈(Micropterus salmoides)以及斜带石斑鱼(Epinephelu coioides)的pIgR聚为一支;感染TiLV后,罗非鱼皮肤、脾脏以及肾脏中pIgR均呈现先上升后下降的趋势;成功构建了pEGFP-OnpIgR并在TiB细胞中过表达OnpIgR后感染TiLV,发现TiLV的S8和S10节段mRNA相对表达量显著增多,TiLV拷贝数也显著增多,初步表明OnpIgR对TiLV的增殖具有促进作用。