大菱鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆及表达分析

鱼类多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)是黏膜免疫系统的关键因子,能够介导多聚免疫球蛋白向黏液中的转运和分泌。本研究利用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification ofcDNA ends,RACE),首次得到了大菱鲆(Scophthalmus maximus)pIgR完整的cDNA序列,全长1 584 bp,该序列包含一个1 005 bp的开放阅读框及5’和3’UTR,编码334个氨基酸。同源性比较发现,大菱鲆pIgR氨基酸序列与牙鲆(Paralichthys olivaceus)、斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)鲀、红鳍东方(Takifugu rubripes)的序列相似性分别是74%、74%和59%,表现出较高的保守性。多序列比对显示,硬骨鱼pIgR包含两个ILD(Ig-like domain),分别对应哺乳类的ILD1和ILD5区域。系统进化树分析表明,大菱鲆pIgR和牙鲆的聚为一支。半定量RT-PCR显示,pIgR在健康大菱鲆各组织中均有表达,但表达水平不同,其中在黏膜相关淋巴组织中表达最强。经灭活的鳗弧菌菌液浸泡处理后,实时荧光定量PCR结果显示,大菱鲆各组织中pIgR的相对表达量在72 h内均呈现先增加后减少的趋势,在48 h内均有一个最高值出现,且黏膜相关淋巴组织中峰值出现较早,说明pIgR在硬骨鱼类黏膜免疫中发挥了重要作用。

牙鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆、表达及鉴定

采用PCR扩增、构建重组高效表达载体的方法,进行了牙鲆多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆、原核表达研究,并利用SDS-PAGE、western-blot及ELISA方法对纯化的重组蛋白特性进行了分析。结果表明,PCR扩增出pIgR开放阅读框(ORF)基因全长为1005 bp,所构建的pET-32(a)-pIgR重组质粒经PCR和双酶切鉴定含有ORF全长基因。SDS-PAGE结果表明,表达的目的蛋白相对分子质量为58 kDa,与理论预期值一致,IPTG诱导6h后表达量趋于稳定,经亲和层析纯化得到高纯度的重组蛋白。Western-blot结果表明,重组pIgR能够与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应;ELISA结果表明重组pIgR能够与牙鲆IgM发生特异性结合。本研究获得了纯化的重组pIgR,证明其具有IgM结合活性,为下一步研究牙鲆pIgR的转运机制及在黏膜免疫防御中的作用机理提供了分子基础。

用CODEHOP法设计简并引物克隆草鱼多聚免疫球蛋白受体基因片段

为克隆草鱼Ctenopharyngodon idellus多聚免疫球蛋白受体p IgR基因,本研究中借助于NCBI、Blast等数据库及Primer Premier 5.0、DNAMAN等生物软件,利用CODEHOP法设计了简并引物,并对克隆基因进行同源性比较和系统发生分析。结果表明:用CODEHOP法设计的简并引物特异性强,试验成功率高;草鱼p IgR基因属于整个脊椎动物的p IgR基因群,与鲤Cyprinus carpio同源性最高,为84%。

白细胞介素-4及其受体基因多态性与哮喘儿童血清白细胞介素-4和总免疫球蛋白E含量的相关性

目的探讨白细胞介素-4(IL-4)-基因-589-位点及其受体基因多态性与哮喘患儿IL-4和总免疫球蛋白E(TIgE)含量的相关性。方法选取2017年9月至2020年12月上海市嘉定区中医医院儿科收治的90例哮喘发作患儿作为实验组,另入取同期90名健康体检儿童作为空白组,两组均应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序法进行基因分型。同时采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)法检测两组血清IL-4、TIgE水平,比较两组IL-4-基因-589位点C/T和IL-4R-基因-rs1801275位点A/G基因多态性检测结果、血清IL-4在IL-4-基因-589位点C/T和IL-4R-基因-rs1801275位点A/G不同基因型含量变化、血清TIgE在IL-4-基因-589位点C/T和IL-4R-基因-rs1801275位点A/G不同基因型含量变化。结果两组IL-4R-基因-rs1801275位点基因型频率和等位基因频率、IL-4-基因-589位点基因型频率比较差异无统计学意义;实验组C等位基因频率低于空白组,T等位基因频率高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组TT血清IL-4含量均高于CT、CC,CT均高于CC,且实验组CC、CT、TT血清IL-4含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组GG血清IL-4含量高于AA、AG,AG高于AA,且实验组AA、AG、GG血清IL-4含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组TT血清TIgE含量高于CT、CC,CT高于CC,且实验组CC、CT、TT血清TIgE含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组GG血清TIgE含量均高于AA、AG,AG均高于AA,且实验组AA、AG、GG血清TIgE含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘患儿IL-4基因-589位点和IL-4R-基因-rs1801275位点基因多态性与健康儿童相比未显示出明显差异,TT和GG基因型哮喘患儿IL-4和TIgE水平较其他对应基因型升高,哮喘发作机制需进一步研究。

半滑舌鳎多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆和表达分析

本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain, ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因检测专家共识

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因家族具有复杂的遗传多态性,既有等位基因水平的多态性,同时还存在KIR单体型组成、基因拷贝数的差异性。为了规范KIR基因检测,中国输血协会人类组织抗原专业委员会与深圳市血液中心组织专家依据国内外文献和实践经验,制定了此专家共识,对KIR基因多态性检测方法、质量控制、检测报告和应用等进行了阐述,旨在提高KIR基因检测的准确性。

人多聚免疫球蛋白受体转基因鼠的建立

目的构建携带有多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的转基因鼠,使其能以近乎自然的状态感染EBV,观察EBV在鼻咽部病变过程中的作用。方法采用角质上皮特异性启动子ED-L2调控的pIgR基因,用显微注射方法将其导入受精卵中,使该基因能在F0代转基因鼠鼻咽部特异性表达。结果PCR检测F0代pIgR基因阳性率达37.5%(6/16),Southern杂交F0代pIgR基因阳性率为12.5%(2/16)。结论表达多聚免疫球蛋白受体的转基因动物有望成为研究EBV病毒致病机制的一种新的动物模型。

浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

本研究的目的是分析浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的多态性及基因型。采用序列特异性引物PCR法(PCRSSP)进行KIR基因低分辨率检测和基因型分析。结果表明:①在浙江汉族人群中共检出目前已知的17个KIR基因。2DL4、3DL2和3DL3基因存在于所有个体,其基因频率为1.00。2DL1、2DL3、2DP1、3DP1003、3DL1、2DS4001/002基因较为常见,频率分别为0.902、0.902、0.902、0.902、0.7598、0.5615;而2DL2、2DL5A、2DL5B、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4003、2DS5、3DS1和3DP1001/002基因频率较低。②浙江汉族人群中以A型单倍型为主,频率高达74.7%。在检测样本中共明确检出12种单倍型,最常见的是单倍型2,频率为53.0%。③共检出26种基因型,最常见为AJ(2,2)、AF(1,2)型,其次为AH(2,5)、NN2(2,6)、AI(1,5)和AG(1,1)。其中有15种基因型在白人中尚未见报道,4种基因型无法根据相关文献标准分析出单倍型。结论:浙江汉族人群有其独特的KIR基因频率和基因型频率分布。

多聚免疫球蛋白受体(pIgR)在粘膜免疫中的重要功能

多聚免疫球蛋白受体(pIgR)属于Ⅰ型跨膜糖蛋白,可与多聚免疫球蛋白A和多聚免疫球蛋白M特异性结合,通过穿胞转运,将它们从上皮细胞基底侧膜转运到顶膜,并最终分泌到外分泌液中去.在此过程中,多聚免疫球蛋白受体的细胞外段被水解,释放出与多聚免疫球蛋白A或多聚免疫球蛋白M相结合的细胞外段(又称为分泌成分).分泌成分是sIgA分子的重要组成部分,直接参与sIgA的粘膜防御功能,而且在被动粘膜免疫中也有重要作用.多聚免疫球蛋白受体通过介导细胞内多聚免疫球蛋白的转运,可以在粘膜的腔面阻止病原体粘附,在上皮细胞内中和病毒,也可以将固有层内的抗原分泌出去.因此,多聚免疫球蛋白受体的有效分泌是多聚免疫球蛋白发挥粘膜防御功能的必要条件.但在某些情况下,该受体也可以介导微生物对上皮屏障的入侵.多聚免疫球蛋白受体是高度N-糖基化的,其分子中独特的糖链结构,可能与受体的穿胞转运、sIgA在粘膜的正确定位,以及抗原对上皮细胞的粘附有关.多聚免疫球蛋白受体和分泌成分参与的多重分子机制,使它们在粘膜免疫中起着举足轻重的作用.

杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体HLA-C基因多态性与不明原因早期复发性流产的相关性

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体HLA-C基因多态性与不明原因早期复发性流产易感性的关系。方法:留取不明原因早期复发性流产患者(38例,URSA组)及正常早孕妇女(35例,对照组)的蜕膜、绒毛组织,抽提基因组DNA,序列特异性引物聚合酶链反应检测蜕膜组织14种KIR基因的表达;DNA测序法分析绒毛滋养细胞HLA-C1、HLA-C2基因多态性。结果:14种KIR基因均以不同频率表达;KIR2DS1基因的频率在URSA组与对照组中分别为60.27%vs41.18%,两组相比,差异有显著性(P=0.03)。两组基因HLA-C1、HLA-C2在绒毛组织中呈不平衡表达,以HLA-C1基因占明显优势。URSA组与对照组HLA-C1基因频率分别为66.67%、81.03%,两组相比差异无显著性,P=0.657;URSA组HLA-C2的基因频率为33.33%,对照组HLA-C2的基因频率为19.07%,两组相比差异有显著性,P=0.007。结论:蜕膜NK细胞活化性KIR基因频率升高,与绒毛滋养细胞的HLA-C2基因结合,传递活化性信号活化NK细胞,可能是引起URSA发病的免疫遗传学因素之一。

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与强直性脊柱炎的关联性

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunogloblin-like receptors,KIRs)基因多态性与强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的关联性。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析86例AS患者和412例无血缘关系的正常人中迄今发现的14个KIR基因和假基因KIRZ的基因频率、基因型和单倍型。结果:AS患者组活化型KIR3DS1、抑制型KIR2DL2和KIR2DL5的基因频率较对照组显著升高(P<0.05);携带2个或2个以上活化型KIR基因的AS患者明显高于对照人群;其余各KIR的基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活化性/抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的失衡可能与AS的发生相关。

NK细胞表面免疫球蛋白受体KIR基因的分析

目的为了探讨人类自然杀伤(NK)细胞的自然杀伤作用机制。方法采用PCR-SSP技术,调查和分析67例国人的KIR基因型和组合型频率。结果在表达出16个KIR基因中,87.5%的KIR基因的频率>0.35;由14个KIR功能基因组成的KIR基因组合型25个,其中仅KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373,而其余频率均≤0.09。比较本文、日本人群、韩国人群和高加索人群中已报道的56个KIR基因组合型,4个民族和地区间基因组合型共享率为8.93%;本文、韩国人群和高加索人群间为5.36%;本文和高加索人群间为1.79%;28.58%为本文首先报道的基因组合型。结论本文证实单个KIR基因多态性有较高的分布频率;在25个KIR基因组合型中,仅有以传导抑制信号为主的组合型KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373(4%),远低于87.5%的单个KIR基因的频率。但是,KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率在四个民族和地区人群中均列第一,提示KIR基因组合型以抑制性信号通路为主是一种常态,使自身细胞不会遭受自然杀伤。研究为可能探讨改变肾移植术通过KIR基因调节NK自然杀伤作用活性的增强或抑制功能,改变终生使用免疫抑制药物的相关研究提供可利用的数据。

江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

目的分析江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因多态性、基因型及单倍型,为研究K IR基因与疾病相关性提供依据。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对江苏地区163名汉族献血员进行K IR基因低分辨率检测和基因型、单倍型分析。结果共检出除框架基因及假基因外的12个K IR基因,其中2DL1和2DL3存在于所有个体,3DL1和2DS4较为常见;其次为1D、2DL5、2DS1、3DS1及2DS5;2DS2、2DL2及2DS3基因频率较低;检出的17种基因型中,以AJ(2,2)和AF(1,2)型最为常见,其次为AH(5,2)和AG(1,1)型。有3种基因型(New1、New11及New19)在白人中未见报道,其中New19国内未见报道;163例个体中明确检出9种单倍型,最常见的是单倍型2,其次是单倍型1。结论江苏地区汉族人群有其独特的K IR基因频率、基因型频率和单倍型频率分布,并有可能存在新的基因型和单倍型。

桥本甲状腺炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体与人类白细胞抗原基因对频率的分析

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Kill cell immunoglobulin-like receptor,KIR)与人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)组成的受体-配体基因对与桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)的关联性。方法:选择散发HT患者44例和健康对照43例,提取全血基因组DNA,序列特异性引物聚合酶链反应检测4个KIR基因和8个HLA-C基因,根据受体-配体特异识别原则组成KIR2DL1+HLA-C2、KIR2DL2/2DL3+HLA-C1、KIR2DS1+HLA-C2和KIR2DS2+HLA-C1共4对KIR/HLA-C基因对,分析各基因对频率在两组人群中的差别。结果:活化性KIR2DS2+HLA-C1基因对在HT患者组与对照组频率差异有显著性(36.36%vs 16.28%,P<0.05)。其余基因对在两组间未见明显差异。结论:HT患者活化性KIR/HLA-C基因对频率升高,传递活化性信号活化NK细胞和T细胞,可能是HT发病的免疫遗传学因素之一。

广东汉族人群杀伤免疫球蛋白样受体基因的表达频率

目的检测杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)基因在广东汉族人群中的分布。方法对96例广东汉族以SSP法检测其KIR表型,统计不同KIR基因在人群中的表现频率,并与白种人、北印度人、日本人比较。结果不同KIR的表现表率分别为:2DL1(0.85)、2DL2(0.12)、2DL3(0.58)、2DL4(1)、2DL5(0.24)、3DL1(0.96)、3DL2(1)、3DL3(1)、2DP1(0.97)、2DP2(0.98)、2DS1(0.10)、2DS2(0.30)、2DS3(0.02)、2DS4(0.28)、1D(0.65)、2DS5(0.19)、3DS1(0.23)。比较同一HLA配体相应的KIR,抑制性KIR频率均高于活化性KIR。与白种人和北印度人相比,除KIR2DS4外,广东汉族人群的活化性KIR频率均较低。结论不同KIR基因在广东汉族人中有不同的表达频率。与其他人种比较,KIR基因的分布有着明显的种族差异。

多聚免疫球蛋白受体(pIgR/SC)在肺癌组织的表达及其临床意义

背景与目的:探讨多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor/secretory component,pIgR/SC)在肺癌组织中的表达情况及其临床意义。材料与方法:采用大样本石蜡包埋组织(包含344例肺鳞癌、93例肺腺癌、47例小细胞肺癌以及30例同组患者的正常肺组织)构建的组织微阵列,进行免疫组织化学(SP法)染色,分析pIgR/SC蛋白表达情况及其与肺癌临床分期和病理分级间的关系。结果:pIgR/SC蛋白在肿瘤组织(尤其是非小细胞肺癌)中的表达水平(54.1%)显著高于正常对照组织(6.7%),其差异具有统计学意义(P<0.001);在肺癌组织不同病理类型之间的差异具有统计学意义(P<0.001),其表达的阳性率从高到低依次为:鳞癌66.3%>腺癌34.4%>小细胞肺癌4.3%。而pIgR/SC蛋白表达水平在肺癌的临床分期和组织分级间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:pIgR/SC蛋白的异常表达反应了肺癌细胞组织学来源的差异,其过表达可能出现在肺癌(尤其是鳞癌)发生发展的早期阶段。

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多样性与中国南方汉族人群鼻咽癌相关性的研究

本研究探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多样性与中国南方汉族人群鼻咽癌的相关性。采用序列特异性引物-PCR(PCR-SSP)方法,对67名临床诊断为鼻咽癌(NPC)的南方汉族患者的血样和77例随机健康对照组血样进行KIR基因定型,并采用Wolf法计算相对危险度值。结果表明,与对照组相比KIR2DL3基因频率在患者组显著降低(χ2>3.84,p<0.05,RR=0.08),具有统计学差异;KIR2DS5和KIR2DL5B基因频率在患者组显著升高(χ2>3.84,p<0.05,RR值均>1),具有统计学差异,而其它各KIR基因频率差异无统计学意义。结论 :南方汉族人群NPC患者中KIR2DL3、KIR2DS5和KIR2DL5B基因可能与NPC发病相关。

中国江苏地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的多态性

本研究探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)在江苏汉族人群中的分布规律。用PCR-SSP方法对江苏地区269名汉族非亲缘健康人群行KIR基因分型。结果表明:在江苏人群中检出了目前已知的所有KIR基因,共发现江苏汉族人群KIR基因型34种;15种基因型在浙江和香港人群中亦有报道(AA1、BX2、BX3、BX4、BX5、BX6、BX8、BX9、BX11、BX13、BX33、BX68、BX69、BX70、BX75);19种基因型未见于浙江和香港人群(BX10、BX12、BX17、BX23、BX26、BX27、BX28、BX31、BX35、BX42、BX47、BX57、BX72、BX74、BX79、BX154、BX188、BX231、BX370)。在江苏汉族人群中发现仅在希腊人群中罕见的基因型BX42和仅在瑞典人群罕见的基因型BX231,及仅在马其顿人群中罕见的基因型BX370。结论:在江苏汉族人群中检出了目前已知的所有的16个KIR基因,总计发现了KIR基因型34种,其中BX42、BX231和BX370是罕见的KIR基因型。

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在淋巴细胞来源肿瘤中检测的临床意义

目的 探讨克隆性免疫球蛋白重链 (Ig H )和 T细胞受体γ(TCRγ)基因重排在淋巴细胞来源的肿瘤的检测意义。方法 用多聚酶链反应 (PCR)方法检测 15例急性淋巴细胞性白血病 (AL L )、2 5例非霍奇金淋巴瘤(NHL )、10例多发性骨髓瘤 (MM)、4例慢性 B细胞性淋巴细胞性白血病 (B- CL L )和 2 0例正常人骨髓、周围血和(或 )淋巴结中单个核细胞 (MNCs) Ig H、TCRγ基因重排。结果 Ig H和 (或 ) TCRγ基因重排在淋巴细胞来源的恶性肿瘤检出阳性率为 92 .6 % (5 0 / 5 4) ,在 NHL为 84.0 % (2 1/ 2 5 ) ,在 AL L为 10 0 % (15 / 15 )。Ig H重排在 T- NHL和 B-NHL中阳性率分别为 2 0 .0 % (2 / 10 )和 86 .7% (13/ 15 ) ,TCRγ重排在 T- NHL和 B- NHL中分别为 80 .0 % (8/ 10 )和 5 3.3% (8/ 15 )。2 2例 NHL患者骨髓形态学检查阳性率 5 0 .0 % (11/ 2 2 ) ,基因检测阳性率 81.8% (18/ 2 2 ) ,两者差异有显著性 (P<0 .0 5 )。 10例 MM和 4例 B- CL L均检出 Ig H重排。 2 0例正常人未检测出克隆性 Ig H、TCRγ基因重排。结论 Ig H、TCRγ基因重排检测可用于 NHL、AL L、MM和 CL L等淋巴细胞来源的肿瘤的诊断和鉴别诊断 ,并判断 NHL的早期骨髓浸润和临床预后。 TCRγ、Ig H基因重排在 T。

Graves病患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因型分析

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型在Graves病(GD)患者中的分布规律。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)的方法,分析96例Graves病患者和96例正常对照人群的KIR基因型。结果:GD患者中2DS2-,2DL2-,2DL3+,2DL1+,3DL1+,3DS1-,2DL5-,2DS3-,2DS5-,2DS1-,2DS4-基因型频率高于对照组(6.25%vs0,P<0.05);对照组中,基因频率最高的基因型为2DS2-,2DL2-,2DL3+,2DL1+,3DL1+,3DS1-,2DL5-,2DS3-,2DS5-,2DS1-,2DS4+,该基因型的基因型频率较GD患者组高,且有显著性差异(28.13%vs10.42%,P<0.01);GD患者组不携带活化性KIR基因的基因型频率较对照组明显升高(10.42%vs0%,P=0.001)。结论:KIR基因型在GD患者与正常人群分布的差异可能与GD的发病有关。