应用红外荧光和加尾引物法进行向日葵SSR遗传分析中的多聚PCR和多聚凝胶电泳的优化(英文)

在向日葵(Helianthus annuus L.)自交系SSR遗传分析中,为了提高SSR荧光分析效率、简化分析程序羊u降低研究费用,我们进行了多聚PCR和多聚凝胶电泳两项技术的优化研究。结果表明,优化多聚PCR和多聚凝胶电泳的影响因子(如逐步降低的退火温度的循环数、各个多聚位点引物浓度的平衡、PCR缓冲液浓度以及Taq DNA多聚酶的浓度等)可以收到更好的实验效果。基于以上的优化研究,系统地提出了一套优化的加尾引物法的策略。同时,提出了在多聚PCR和多聚凝胶电泳中常常遇到的技术难题的有效防止和解决的方法。

普洱茶发酵过程中真菌群落结构的变化分析

该文通过变性剂法提取普洱茶样品中微生物的基因组DNA作为模板,以真菌的通用引物扩增18S rDNA的NS31/Glol区,再将PCR产物用变性梯度凝胶电泳进行分析,通过对DGGE图谱的统计分析和18S rDNA序列分析研究普洱茶发酵过程中真菌群落结构的组成和演变规律。研究结果表明:普洱茶不同发酵阶段的真菌多样性呈现出一定差异和变化趋势,黑曲霉(Aspergillus niger)在整个发酵过程中占有优势地位,此外还包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和光孢青霉(Penicillium glabrum)。

铜绿假单胞菌M2联合小白菜对Pb污染土壤的生物修复

从Pb污染矿区筛选到1株铜绿假单胞菌 （Pseudomonas aeruginosa） （M2）,采用盆栽试验研究其对Pb污染土壤中小白菜生长、Pb吸收和根际微生物的影响. 结果表明：接种M2菌后小白菜生物量提高20.9 %-31.3 %,地上部Pb含量提高15.0 %-25.4 %,根部Pb含量提高15.6 %-36.8 %;对可培养微生物数量的测定表明,在同样的Pb污染浓度下,接种铜绿假单胞菌的土壤中细菌和真菌数量明显提高,细菌提高17.8 %-29.6 %,真菌提高7.2 %-15.4 %,而放线菌提高不明显;细菌16S rDNA的变性梯度凝胶电泳分析表明,接种铜绿假单胞菌的土壤细菌种类比对照土壤多50.0 %-60.0 %. 结果证明,接种铜绿假单胞菌能够促进小白菜生长,维持土壤细菌多样性,对土壤Pb污染的植物修复有明显的促进作用.

直流电场对根际土壤微生物群落的影响及其机理

电场作用下根际土壤微生物群落的变化与利用电场强化植物修复效率密切相关。文章利用改进的PCR-DGGE（多聚酶链式反应-变性梯度凝胶电泳）方法，研究了不同电场条件下根际土壤微生物群落多样性和相似性的变化，分析了直流电场对土壤微生物群落的影响机理。结果表明，电场对根际土壤微生物群落的影响与电场条件有关，合适的电场条件有助于增加土壤微生物群落的多样性，但是电场形式、强度和施加方式不当则会使土壤微生物群落的多样性和结构受到明显影响。电场作用下土壤性质的变化、电场对土壤微生物的迁移作用和致死效应．以及微生物对环境压力的生理响应等是电场影响土壤微生物群落的主要机制。为了避免电场对根际土壤微生物的不利影响，利用电场强化植物修复时需要采用合适的电场条件。

PCR-DGGE分析技术在环境科学研究中的应用

随着分子生物学和遗传工程技术的迅速发展,现代生物技术在环境科学研究中的应用越来越广泛.笔者较系统地综述了多聚酶链式反应结合变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析技术的产生背景、基本原理和在环境科学中的应用现状,总结了该技术的优点和局限性,探讨其在环境科学中应用前景.

投放方式对聚氨酯内微生物及其净化效能影响

为探讨聚氨酯在生物接触氧化池内不同投放方式对污水净化效能的影响,通过3种投放方式(完全悬浮、完全下沉、一半悬浮一半下沉)的比较,分析不同投放方式导致的微生物群落结构差异与系统净化效果之间的关系.结果表明:聚氨酯在生物接触氧化池内一半悬浮一半下沉状态下的净化效果最佳,COD及NH4+-N的去除率可达90%和94%;在此状态下载体附着的微生物数量最多、多样性最高、活性最强、功能结构最合理.聚氨酯在生物接触氧化池内的投放状态直接影响着生物接触氧化池的净化效果,一半悬浮一半下沉是更有效的投放方式.

电针对溃疡性结肠炎大鼠肠道微生态的保护作用

目的:观察电针对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道菌群的影响,从肠道微生态的角度探讨电针治疗UC的机制。方法:39只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(13只)和UC造模组(26只),造模组饮用4%的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7d复制UC模型后随机分为模型组和电针组。电针"天枢""足三里""上巨虚"穴,每日1次,每次10min,治疗5d。观察实验过程中大鼠疾病活动指数的变化;收集各组大鼠粪便排泄物,用多聚酶链反应-变性梯度凝胶电泳法分析肠道菌群的多样性、相似性及丰度值,对优势条带进行回收测序,采用Quantity one等软件对所得结果图谱进行分析,对优势条带进行菌种鉴定及含量分析。结果:模型大鼠肠道菌群的丰度值及多样性指数明显降低,疾病活动指数明显增高(P<0.05,P<0.01)。电针能降低UC模型大鼠疾病活动指数,提高肠道菌群的丰度值及多样性指数(P<0.05,P<0.01);菌种鉴定表明电针能提高UC模型大鼠肠道菌群中乳酸杆菌(Lactobacillus sp.)和毛螺科菌(Lachnospiraceae bacterium)含量,降低双酶梭菌(Clostridium bifermentans)的含量(P<0.05)。结论:电针能明显改善UC模型大鼠肠道菌群的多样性以及有益菌群的含量,对UC模型大鼠肠道微生态发挥的保护作用很可能是电针治疗UC的机制之一。

基于PCR-DGGE研究人参乌梅汤加味对腹泻大鼠肠道菌群构成特征的影响

目的采用多聚酶链反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradientgel electrophoresis,PCR-DGGE)技术研究中药复方人参乌梅汤加味对腹泻大鼠肠道菌群构成特征的影响。方法 48只SD大鼠随机抽取12只为空白组,其余36只参照文献方法以复合因素制作腹泻模型。造模成功后随机分为模型组、西药组、中药组,每组12只。造模21d开始给药干预,空白组和模型组予生理盐水,其余各组分别给予妈咪爱、人参乌梅汤加味,均1次/d,连续给药7d。收集各组大鼠粪便排泄物,提取粪便细菌总基因组DNA,PCR扩增细菌16Sr DNA基因V3可变区,DGGE方法检测PCR产物。对优势条带进行回收测序,鉴定菌种。结果药物处理后腹泻模型大鼠肠道微生物相对丰度最高的为厚壁菌门类细菌,其次为拟杆菌门和变形菌门类细菌。人参乌梅汤加味治疗后大鼠肠道厚壁菌门类细菌含量显著增加(P<0.01),而肠道拟杆菌门类细菌含量显著降低(P<0.01),肠道变形菌门类细菌含量无显著变化(P>0.05)。与空白组相比,经人参乌梅汤加味治疗后大鼠菌群较之西药组更接近空白组。结论人参乌梅汤加味较之西药对肠道菌群平衡更具有良性的调控作用,可能通过影响肠道菌群结构,纠正菌群紊乱,进而发挥生津止泻效应。