84例喘息患儿肺炎支原体的聚合酶链反应检测结果与分析

目的探索肺炎支原体〈MP〉感染与小儿哮喘的关系。方法采用聚合酶链反应〈PCR〉检测MP。结果84例患儿阳性27例，阳性率为32．14％；病程在7天内者，阳性率为19．51％；病程超过7天者，阳性率为44．18％；两组阳性率经卡方检验有差异性（X^2=5．86R0．05）。结论在儿童喘息性疾病中应重视MP感染。PCR技术用于检测MP，具有特异性强，敏感性高，标本易于采集等优点，值得临床使用。

细胞周期蛋白与急性白血病预后的关系研究

背景与目的:细胞的增殖和分化是通过细胞周期转运来实现的,当肿瘤细胞异常增殖时,作为细胞运转正调因子的细胞周期蛋白(cyclins)就有可能表达异常。目前已有较多资料证实cyclins在实体肿瘤中呈高表达。本研究探讨cyclins与急性白血病预后的关系。方法:实验组分为急性白血病完全缓解组(12例)、急性白血病初发未治组(16例)、难治性白血病组(40例);正常对照组为良性血液病患者(15例)。用RT-PCR法检测cyclinA、cyclinD、cyclinE。结果:正常对照组15例的cyclins表达均为阴性,在正常对照组和实验组中,cyclinA的表达没有显著性差异(P>0.05),而cyclinD和cyclinE在实验组的表达均明显高于正常对照组(P<0.01)。在急性白血病完全缓解组,cyclinD和cyclinE的表达无显著性差异(P>0.05);而在难治性白血病中,cyclinD的表达显著高于cyclinE,且cyclinD在难治性白血病组的表达明显高于初发性的病例(P<0.05)。将所有cyclins表达阳性的病例分为表达单一cyclin和表达2个以上cyclins两组,并分别计算两者的阳性率,发现两者的阳性率在急性白血病完全缓解组和难治性白血病组间无显著性差异(P>0.05)。结论:CyclinD可以作为急性白血病的预后指标,不能用cyclins基因类型表达的多寡来判断预后。

E-Cadherin在进展期胃癌转移淋巴结中的再表达及意义

目的检测进展期胃癌及其转移淋巴结中上皮型钙粘蛋白(E-Cadherin,E-Cad)及其mRNA表达,从而为胃癌的诊断、治疗及预后提供依据及线索。方法采用免疫组织化学染色的方法观察比较E-Cad在进展期胃癌原发灶及转移淋巴结中的表达;同时用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测上述标本中E-Cad基因的表达,并对其和临床病理参数的关系进行分析。结果(1)在38例胃癌原发灶中94.7%(36/38)E-Cad表达程度减低,21.1%(8/38)胃癌转移淋巴结中E-Cad再表达阳性,其中高分化胃癌的再表达阳性率为35.3%(6/17);中低分化胃癌的再表达阳性率为9.52%(2/21)。高分化癌相对于中低分化癌更易出现E-Cad的再表达阳性,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)RT-PCR结果显示,38例原发灶组织及相应转移淋巴结均检测到不同程度的E-Cad mRNA表达。E-Cad mRNA在胃癌的表达量(0.737±0.010)明显低于胃正常黏膜表达量(0.799±0.018),两者比较差异有统计学意义(P<0.01);结合临床病理参数分析,高分化胃癌转移淋巴结中E-Cad mRNA表达高于低分化胃癌转移淋巴结,管状腺癌转移淋巴结中E-Cad mRNA表达高于粘液腺癌转移淋巴结。结论E-Cad基因变化与肿瘤的发生、浸润、转移有关,E-Cad基因治疗可作为胃癌治疗的靶点。

荧光半定量法检测肺炎支原体DNA的临床意义

目的 探讨荧光半定量技术检测肺炎支原体DNA(MP DNA)在诊断小儿呼吸道支原体感染的临床价值。方法 运用荧光半定量PCR技术检测呼吸道感染患儿咽拭子MP DNA ,并与临床治疗和诊断结果进行相关分析。结果 对 96 8例肺部感染的住院患儿进行了咽拭子MP DNA的检测 ,30 7例 (31.7% )阳性。 185例临床诊断为支原体肺炎。临床诊断符合率为 6 0 .2 6 % ;相关分析表明 :MP DNA半定量的结果与临床诊断呈正相关 ,r =0 .98。结论 荧光半定量PCR法检测咽拭子MP DNA是一种快速、简便、易行、比较敏感的方法。且荧光半定量结果与临床诊断符合率呈正相关关系。

肝癌组织中RUNX3表达及其与临床病理因素的相关性

目的探讨肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3 mRNA和蛋白表达情况,并分析其与临床病理因素的相关性。方法采用反转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学分别检测肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3 mRNA和蛋白表达水平,并分析与临床病理因素的相关性。结果在51例肝癌组织中RUNX3 mRNA表达量相对值为:0.4509±0.096 3;在51例相对应的癌旁组织中RUNX3 mRNA表达量相对值为:0.914 7±0.022 2;两者间差异有统计学意义(t=33.608 7,P<0.001)。在51例肝癌组织中RUNX3蛋白表达阳性率为49.02%(25/51);而在51例相对应的癌旁组织中RUNX3蛋白表达阳性率为82.35%(42/51);两者间差异有统计学意义(χ2=12.570 6,P<0.005)。RUNX3 mRNA和蛋白表达水平均在分化程度、门静脉癌栓、肝内转移等病理因素间差异有统计学意义(P<0.05),而在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 RUNX3基因在肝癌组织中mRNA和蛋白表达水平均显著低于在癌旁组织中的表达水平,RUNX3 mRNA和蛋白表达下调可能在肝癌的发生、发展过程中起着重要作用;RUNX3基因可能是肝癌的一种抑癌基因。

高迁移率族蛋白A2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中的表达及意义。方法:采用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western Blot)检测HMGA2在体外培养的子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及21例子宫内膜癌组织标本和18例正常子宫内膜组织标本中的表达。结果:HMGA2-mRNA在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa中均有表达;在I期、Ⅱ期子宫内膜癌患者中表达的阳性率分别为8.3%(1/12)、88.9%(8/9),HMGA2-mRNA表达的阳性率与手术-病理分期有关(P=0.000,P<0.05),在高分化腺癌、中低分化腺癌的组织标本中表达阳性率分别为66.7%(4/6)、33.3%(5/15),HMGA2-mRNA表达阳性率与子宫内膜癌细胞的分化程度无关(P=0.331,P>0.05);HMGA2-mRNA在18例正常子宫内膜组织标本中无一例表达;Western Blot的结果与RT-PCR的结果相符合。结论:HMGA2基因可能参与了子宫内膜癌的发生和发展,在子宫内膜癌细胞的增殖与侵袭中可能发挥重要作用。

银染PCR-SSCP法检测52例白血病患者p53基因点突变

目的 通过检测白血病患者p5 3基因点突变 ,了解其与白血病的发展、治疗及预后的关系。方法 用银染PCR SSCP法检测 5 2例不同类型白血病p5 3基因第 5、6、7、8外显子的点突变。结果 在 45例急性白血病患者中有 5例发生p5 3基因突变 ,其中 3例对化疗不敏感 ;6例慢性粒细胞白血病中 1例有p5 3基因突变 ,此例患者在住院 1个月内死亡 ,1例毛细胞白血病发生p5 3基因点突变。结论 p5

造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病中监测BCR/ABL融合基因的应用

目的 研究应用筑巢式逆转录多聚合酶链反应法 (nested RT PCR)监测bcr/abl融合基因mRNA在异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病 (CML)效果监测方面的价值。方法 应用RT PCR方法定期检测异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病患者前后bcr/abl融合基因表达情况。结果 异基因造血干细胞移植治疗组完全血液学缓解率为 10 0 % ,分子生物学缓解率分别为87.5 %。结论 bcr/abl融合基因监测可以作为CML评价疗效的指标 ,适用于微小残留病变的监测。

改良的网织红细胞富集法

目的 探讨改良网织红细胞的分离方法。方法 在淋巴细胞分离液中添加泛影葡胺,通过细胞计数、测定总RNA量及采用半定量多聚合酶链反应方法比较添加前后从外周血中分离网织红细胞量变化。结果 添加泛影葡胺后,分离细胞总数增加,提取RNA增加,早期红细胞特异的珠蛋白α-mRNA表达量增加。结论 改良后的细胞分离液分离的网织红细胞较以前显著增加。

高迁移率族蛋白A1在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中的表达及意义。方法采用半定量RT-PCR和WesternBlot检测子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及21例子宫内膜癌组织(研究组)、18例正常子宫内膜组织(对照组)中HMGA1-mRNA与HMGA1蛋白的表达水平。结果HM-GA1-mRNA与HMGA1蛋白在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及两组子宫内膜组织标本中均有不同程度的表达,研究组中HMGA1-mRNA与HMGA1蛋白的平均表达水平显著高于对照组(P<0.05),并与手术-病理分期有关(P<0.05),与子宫内膜癌组织的分化程度无关(P>0.05)。结论HMGA1的过度表达可能参与了子宫内膜癌的发生和发展,在子宫内膜癌细胞的增殖与侵袭中可能发挥重要作用。

E-钙粘蛋白在进展期大肠癌转移淋巴结癌细胞中再表达的机制

目的:探讨E-钙粘蛋白(E-cad)在大肠癌转移淋巴结中的再表达机制及临床价值.方法:采用免疫组织化学SP法,Western blot,逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)等方法联合检测32例大肠癌患者原发灶及相应转移淋巴结中E-cad的表达.结果:免疫组织化学结果显示:大肠癌原发灶中E-cad的异常表达率为90.6%(29/32).在转移淋巴结中,37.5%(12/32)E-cad再表达阳性,其中在高中分化、低分化腺癌E-cad再表达阳性率分别为55.6%(10/18)、14.3%(2/14),差异显著(P<0.05).Western blot结果显示:转移淋巴结组织中E-cad蛋白相对强度高于原发癌组织(P<0.05),但低于正常大肠黏膜(P<0.05).在转移淋巴结中,E-cad在高中分化、低分化腺癌蛋白相对强度分别为28-127(98.56±36.09)、11-62(66.21±29.74),差异显著(P<0.05).管状及乳头状腺癌转移淋巴结中E-cad蛋白相对强度高于黏液腺癌转移淋巴结(P<0.05).RT-PCR结果显示:大肠癌原发灶E-cad mRNA表达量相对值明显低于在正常大肠黏膜的表达量(0.733±0.009vs0.796±0.016,P<0.05);大肠癌转移淋巴结中E-cad mRNA表达量相对值明显高于在大肠癌原发灶的表达量(0.739±0.010vs0.733±0.009,P<0.05),但低于正常大肠黏膜表达量(P<0.05).高中分化腺癌转移淋巴结中E-cad mRNA表达量相对值高于低分化腺癌转移淋巴结(P<0.05),管状及乳头状腺癌转移淋巴结中E-cad mRNA表达量高于黏液腺癌转移淋巴结(P<0.05).结论:大肠癌发生发展过程中E-cad在基因及蛋白水平的表达存在一定的变化特征,这种特征可能使其成为大肠癌诊断与治疗的新靶点.

宫颈鳞状上皮癌蜡块中 HPV16 感染检测方法的比较研究

分别用原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）和原位多聚酶链反应（ＩＳ－ＰＣＲ）方法，检测３９例宫颈鳞状上皮癌石蜡切片中ＨＰＶ的感染。ＩＳＨ的检出率为４６．２％（１７／３９），明显低于ＩＳ－ＰＣＲ的６６．７％（２６／３９，Ｐ＜０．０１）和ＰＣＲ的８４．６％（３３／３９，Ｐ＜０．０１）。用常规ＩＳＨ和地高辛标记探针能检出宫颈鳞状上皮癌ＨＰＶ１６感染的表皮细胞，而用ＩＳ－ＰＣＲ方法在同样标本中可显示出更多的ＨＰＶ１６阳性表皮细胞，并且着色更深。ＰＣＲ方法敏感性最高，但它不能用于组织细胞内的ＨＰＶ１６ＤＮＡ精确定位。

膀胱移行细胞癌中MT-3的表达及其临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌中金属硫蛋白(MT-3 mRNA)的表达与早期诊断、临床分级和预后的相关性。方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,对12例正常膀胱黏膜和23例膀胱肿瘤MT-3 mRNA的表达进行了检测。结果12例正常膀胱黏膜中MT-3 mRNA表达为0%,18例膀胱癌MT-3 mR-NA有表达为78.3%,并对其进行了临床生物学行为的观察和比较。结论MT-3的表达与膀胱移行细胞癌的早期诊断相关,可能成为一种新的肿瘤标志物。RT-PCR方法检测膀胱肿瘤时具有相对敏感、特异和结果可靠等优点。

β-catenin在大肠癌原发灶和转移淋巴结表达的比较研究

目的检测大肠癌及其转移淋巴结中β-连接素(β-catenin,β-cat)蛋白及mRNA表达,讨论β-catenin的表达与大肠癌生物学行为的关系,为针对大肠癌诊断和治疗的可能新方法提供理论依据.方法采用免疫组织化学染色,蛋白免疫印记(Western Blot),逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)等方法联合检测并比较45例大肠癌患者原发灶和转移淋巴结中β-catenin表达情况,并对其在转移淋巴结内癌细胞再表达的机理进行分析.结果β-cat在转移淋巴结癌细胞中的再表达与肿瘤细胞的分化程度、组织学类型密切相关.(1)免疫组化结果显示:在45例大肠癌原发灶中80%(36/45)β-cat不正常表达,40%(18/45)大肠癌转移淋巴结中β-cat再表达阳性.其中高中分化腺癌转移淋巴结内癌细胞β-cat再表达阳性率为54.2%(13/24),而低分化腺癌为23.8%(5/21),高中分化腺癌相对于低分化癌更易出现β-catenin的再表达阳性(P<0.05);在管状及乳头状腺癌β-catenin在转移淋巴结癌细胞中的再表达阳性率为35.7%(10/28),而在粘液腺癌则为47.1%(8/17,P<0.05).β-cat在转移淋巴结内癌细胞的再表达与肿瘤部位、浸润深度以及患者的性别和年龄无关;(2)RT-PCR结果显示,45例原发灶组织及相应转移淋巴结均检测到不同程度的β-cat基因表达.β-catmRNA在大肠癌的表达量为(0.724±0.006),明显低于正常大肠粘膜表达量(0.785±0.017,t=21.066,P<0.01);β-catmRNA在大肠癌转移淋巴结表达量明显高于大肠癌原发灶表达量,但低于正常大肠粘膜表达量;结合临床病理资料分析,高中分化大肠癌转移淋巴结中β-cat mRNA表达量高于低分化大肠癌转移淋巴结,管状腺癌转移淋巴结中β-cat mRNA表达量高于粘液腺癌转移淋巴结;(3)Western Blot结果显示:与25例均表达β-cat的正常大肠粘膜相比,45例原发肿瘤组织中41例检测到不同程度的β-cat表达,4例未表达:41例表达β-cat的原发肿瘤组织中其相应转移淋巴结中均检测到不同程度的β-cat蛋白表达,而4例未表达β-cat的原发肿瘤组织中有1例在其转移淋巴结中发现了β-cat的表达;这41例原发灶组织中各例蛋白相对强度分布区间为6～108(54.3±38.1),明显低于正常大肠粘膜蛋白表达量15～172(95.4±49.8),β-cat在大肠癌转移淋巴结蛋白表达量明显高于大肠癌原发灶蛋白表达量,但低于正常大肠粘膜蛋白表达量;结合临床病理资料分析,转移淋巴结中,高中分化大肠癌转移淋巴结中β-cat蛋白表达量高于低分化大肠癌转移淋巴结,管状腺癌转移淋巴结中β-cat蛋白表达量高于粘液腺癌转移淋巴结.结论大肠癌发生发展过程中β-cat在基因及蛋白水平的表达存在一定的变化特征,这种特征使其有可能成为大肠癌诊断与治疗的新靶点.

PCDH10基因DNA甲基化在胃癌中的研究

目的:探讨PCDH10(原钙粘蛋白10)基因DNA发生甲基化后,其表达与胃癌发生的关系。方法:采用甲基化特异性PCR (methy-lation specific PCR)法和实时荧光定量逆转录–多聚合酶链反应(real-time RT-PCR)方法检测100例胃癌组织及正常组织中PCDH10基因启动子区的甲基化情况。结果:胃癌组织中PCDH10基因的甲基化阳性率较正常组织明显升高,差异具有统计学意义。结论:PCDH10的基因DNA甲基化可能与胃癌发生有关。

系列PCR方法检测淋巴细胞白血病克隆性基因重排的选择应用

以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ克隆性基因重排。结果显示：多重ＰＣＲ和１次ＰＣＲ的敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０￣（－５）～１０￣（－６）水平。ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排阳性率为６７．２％和６２．０％；半巢式ＰＣＲ检测ＩｇＨ重排阳性率为７０．７％。上述结果表明：多重ＰＣＲ可同时检测两对目的基因，适于初治病例检测，而对缓解病例的检测则需采用敏感度较高的半巢式ＰＣＲ方法。

广西地区胃癌与P_（53）基因突变关系的初步研究

用聚合酶链式反应──限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术检测８例胃癌及１例正常胃组织Ｐ５３基因第２４９密码子点突变，结果未发现异常，提示Ｐ５３基因第７外显子第２４９密码子点突变不是本地区胃癌Ｐ５３基因突变的常见类型。

多种方法研究乙型肝炎病毒多聚酶变异

以DNA测序结果为标准,采用寡核苷酸芯片技术和基于荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的UniArray技术分析24例使用拉米夫定治疗12个月以上的慢性乙型肝炎(CHB)患者YMDD变异的情况,检测HBV DNA和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,以探讨上述两种方法检测YMDD突变的价值及拉米夫定治疗乙型肝炎过程中出现的耐药状况.

肝癌患者及正常人群中黑色素瘤相关抗原1的基因多态性

目的 研究黑色素瘤相关抗原1(MAGE-1)在中国肝癌患者中的表达,并阐明MAGE-1基因变异是肿瘤细胞内的突变还是单核苷酸多态性(SNP),以及基因变异在人群中的分布状况。 方法 提取19例原发性肝癌(HCC)患者的癌组织、癌旁组织总RNA,用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测组织MAGE-1基因mRNA的表达,并通过PCR产物测序分析编码基因是否存在变异,提取HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞基因组DNA,以及23例正常献血员外周血细胞基因组DNA,分析MAGE-1编码基因的变异状况并利用软件对变异抗原蛋白的生物学意义进行了初步探讨。 结果 癌组织中MAGE-1表达阳性率为47.4％(9/19),癌旁组织无表达。序列测定显示,MAGE-1 cDNA编码基因存在3种类型:一类是Ⅰ型(GenBank M77481),发生率为11.1％(1/9);另一类型(C159T,A272G,G393A)发生率为55.6％(5/9),称之为TGA型,导致编码的2个氨基酸的改变分别是T32A和R72Q;第三种类型(A272G,C991T,A1125G)发生率为33.3％(3/9),仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A),称之为GTG型。经对基因组DNA分析,证实以上3种基因类型不是肝癌组织的基因突变,而是SNP,其在肝癌患者和正常献血员中分布的比例分别为:Ⅰ型占26.3％(5/1 9)和60.9％(14/23);TGA型占57.9％(11/19)和47.8％(11/23),GTG型占21.