RNA结合蛋白多聚嘧啶通道结合蛋白1在肿瘤中的研究进展

多聚嘧啶通道结合蛋白1（PTBP1）是调控可变剪接及mRNA代谢过程中的重要蛋白.它的异常表达可造成其下游靶基因的可变剪接及mRNA水平的改变,直接参与肿瘤的发生、发展.PTBP1是具有很大潜力的肿瘤标志蛋白.

微小RNA-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨微小RNA(miR)-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1(PTBP1)调控乳腺癌细胞生物学的行为机制。方法选取乳腺癌及癌旁组织标本83例,收集患者临床病理资料,同时选取乳腺癌细胞系(MCF-7)、正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A),实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-133b和PTBP1 mRNA表达,分析与临床病理特征的关系,MCF-7细胞分为阴性对照组、miR-133b模拟物(mimic)组、miR-133b inhibitor组、miR-133b mimic+PTBP1沉默组和miR-133b inhibitor+和PTBP1沉默组,噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测MCF-7细胞增殖及周期的变化,划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移及侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和PTBP1蛋白表达,双荧光素酶实验验证miR-133b对PTBP1的靶向调控机制。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,计数资料采用χ^(2)检验和Fisher精确检验进行分析。结果miR-133b和PTBP1 mRNA在乳腺癌组织(0.94±0.18、4.28±0.27)及乳腺癌细胞的表达水平(1.09±0.22、3.65±0.19)分别明显低于和高于癌旁组织(2.12±0.09、t=4.343,P<0.05;1.37±0.21、t=6.006,P<0.05)及MCF-10A细胞(1.99±0.11、t=5.223,P<0.05;1.15±0.09、t=5.774,P<0.05)。miR-133b和PTBP1均与TNM分期(1.204±0.057、3.865±0.172,χ^(2)=6.217,P<0.001)和淋巴转移(0.489±0.041、1.632±0.147,χ^(2)=7.031,P<0.001)等明显相关,而与年龄(0.601±0.052、2.008±0.187,χ^(2)=0.261,P>0.05)、分化程度(0.592±0.057、1.994±0.187,χ^(2)=0.274,P>0.05)和病理分级无关(0.587±0.059、1.921±0.172,χ^(2)=0.257,P>0.05)。与阴性对照组比较,miR-133b mimic组增殖率[(35.43±1.74)%、(8.43±0.35)%,F=166.465,P<0.05]、迁移、侵袭细胞数(109±10.562、77±5.751,t=4.663,P<0.05;128±11.624、81±7.251,t=7.453,P<0.05)、bcl-2(2.78±0.32、0.76±0.11,t=4.122,P<0.05)和PTBP1表达(3.45±0.33、0.89±0.26,t=3.154,P<0.05)明显降低,G1期阻滞明显延长(F=276.872,P<0.05),bax表达明显增加(1.22±0.12、3.39±0.46,t=9.123,P<0.05),miR-133b mimic+PTBP1沉默组变化更为明显(1.22±0.12、7.71±0.23,t=6.009,P<0.05),miR-133b inhibitor组明显逆转上述指标变化(1.22±0.12、0.76±0.11,t=3.334,P<0.05),miR-133b inhibitor+PTBP1沉默组逆转更为明显(1.22±0.12、0.33±0.11,t=5.098,P<0.05)。双荧光素酶实验显示miR-133b可靶向调控PTBP1。结论miR-133b靶向调控PTBP1从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

四氢嘧啶对HaCaT细胞活力及AQP3、Claudin-1、ZO-1表达的影响

目的研究四氢嘧啶(Ectoine)对人角质形成细胞(HaCaT)的细胞活力、细胞凋亡率和细胞活性氧(ROS)的影响,并分析水通道蛋白3(AQP3)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白(ZO-1)的表达水平。方法设置Ectoine浓度实验组和空白对照组,培养HaCaT细胞(24 h),采用CCK8法检测HaCaT细胞的细胞活力,甄选最佳的Ectoine作用浓度。用Western Blot法检测HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平;用流式细胞仪检测HaCaT细胞的凋亡率及胞内ROS水平。结果CCK8法检测结果显示,0.10%Ectoine组、0.20%Ectoine组、0.30%Ectoine组的HaCaT细胞活力均高于120%,其中0.20%Ectoine组最高(146.92%±7.67%)。Ectoine浓度实验组相对于空白对照组,HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平明显升高(P<0.05),且细胞凋亡率和胞内ROS水平均明显降低(P<0.05)。结论Ectoine可提高HaCaT细胞的细胞活力,降低凋亡率和胞内ROS水平,上调AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平。Ectoine可能与相关保湿蛋白的表达相关,对HaCaT细胞具有一定的保护作用。

多聚嘧啶区结合蛋白1通过调控基因的可变剪接促进胆管癌细胞的生长、迁移及侵袭能力

胆管癌是一种起病隐匿、侵袭性强、致死率高的原发性恶性肿瘤。多聚嘧啶区结合蛋白1(polypyrimidine tract-binding protein 1,PTBP1)已被报道,在多种类型肿瘤组织中异常高表达并参与癌症进展,但其在胆管癌中的作用仍未见报道。该研究旨在探讨PTBP1在胆管癌中的生物学功能,并初步解析其分子机制。本文利用公开的癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据,分析了胆管癌及癌旁组织中的PTBP1 mRNA表达水平。结果显示,PTBP1在胆管癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。随后,在胆管癌细胞系RBE和HuH28中,通过CCK-8和细胞平板克隆实验,评价了PTBP1对胆管癌细胞生长能力的影响。结果显示,过表达PTBP1可显著促进胆管癌细胞的生长(P<0.01),而敲低PTBP1显著抑制胆管癌细胞的生长(P<0.001)。Transwell和Invasion实验结果显示,过表达PTBP1可显著促进胆管癌细胞的迁移和侵袭(P<0.001),而敲低PTBP1显著抑制胆管癌细胞的迁移和侵袭(P<0.001)。转录物组测序和通路富集分析结果显示,在胆管癌细胞中,敲低PTBP1后上调表达的基因显著富集于p53信号通路;而下调表达的基因显著富集于胆固醇代谢、Rho GTPase和TGF-β等信号通路。基于上述转录物组测序数据,本文还分析发现,敲低PTBP1可导致一系列基因发生异常的mRNA可变剪接事件,例如参与TGF-β调控的TGIF1及与p53活性相关的GNAS基因等。综上所述,PTBP1可能通过调控一系列基因的可变剪接而影响多个癌症相关的信号通路,从而促进胆管癌的进展。

多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对DP210细胞小鼠致瘤能力的影响

目的:慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)急变中伴随着多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的表达异常。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA对DP210细胞在动物体内致白血病的作用。方法:分别将稳定表达hnRNP E2诱骗RNA野生序列的DP210-pGD细胞、表达突变序列的DP210-pGM细胞以及对照组DP210细胞通过尾静脉注射CH3小鼠,观察各组小鼠的一般情况以及生存期;外周血白细胞计数(white blood count,WBC)并行外周血涂片及骨髓涂片检查;观察各组小鼠肝、脾和肺组织病理组织学变化。结果:各组小鼠注射不同细胞20 d后,DP210-pGD组小鼠毛色依然发亮,活动力和生长状况较良好,WBC为(8.36±2.81)×109/L,外周血涂片中仅见少量白血病细胞;DP210和DP210-pGM组小鼠的WBC分别为(40.52±12.89)×109/L和(38.73±8.26)×109/L(P<0.01),外周血涂片均可见较多的幼稚白血病细胞。与DP210组和DP210-pGM组小鼠相比,DP210-pGD组小鼠骨髓增生不明显,仍可见许多成熟的粒细胞,肝、脾和肺组织的病理学结构改变较少,白血病细胞浸润程度较低,且生存期明显延长(P<0.01),但最终66 d时全部死亡。结论:hnRNP E2诱骗RNA能延缓DP210细胞对小鼠的致瘤能力。

多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对视网膜血管内皮细胞IGF-1／VEGF信号通路的抑制作用

背景视网膜新生血管（RNV）是多种眼底血管疾病的共同表现，研究证实胰岛素样生长因子（IGF-1）能够刺激血管内皮细胞的增生，从而促进新生血管的形成，而多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）在IGF-1信号转导的过程中发挥转录抑制的作用。但PSF在RNV形成过程中的作用尚不清楚。目的研究PSF对IGF-1／血管内皮生长因子（VEGF）信号通路的调控作用。方法将猕猴视网膜血管内皮细胞RF／6A进行培养后分为Pegfp-C2-PSF质粒转染组、pGenesil．PSF-RNAi质粒转染组及各自的对照组，分别在细胞中转人真核质粒Pegfp—C2-PSF、pGenesil—PSF—RNAi及相应的空白质粒。各组细胞培养液中分别添加或不添加胰岛素样生长因子1（IGF-1）以刺激细胞生长，采用MTT法检测各组RF／6A细胞的增生率并筛选各组最适PSF剂量，用于进一步的实验。采用逆转录PCR法测定和比较不同PSF转染组间用或不用U0126处理组间RF／6A细胞中VEGFmRNA的表达；采用Westernblot法验证PSF对IGF-1诱导的细胞外调节蛋白激酶（ERK）活化的促进作用。结果IGF-1刺激后Pegfp．C2．PSF质粒转染组以0．50IxgPSF为最适剂量，其RF／6A细胞的增生率为0．220±0．020，细胞中VEGFmRNA相对表达量为0．79±0．07，分别低于其对照组的0．260±0．006和未转染组的1．26±0．19，差异均有统计学意义（P=0．040、0．016）；IGF-1刺激后pGenesil—PSF—RNAi质粒转染组以1．00IxgPSF作为最适剂量，其RF／6A细胞增生率为0．35±0．02，VEGFmRNA相对表达量为2．29＋0．43，分别高于其对照组的0．210-4-0．019和未转染组的1．26±0．19，差异均有统计学意义（P=0．003、0．019）。IGF-1刺激后1、3、6hPegfp-C2-PSF质粒转染组细胞中pERK蛋白表达量均明显低于未转染组，差异均有统计学意义（P=0．017、0．000、0．000）。Pegfp-C2-PSF质粒转染组U0126’处理后细胞中VEGFmRNA的相对表达量为0．93±0．21，明显低于未转染组的1．32±0．08，差异均有统计学意义（P=0．037），同时明显低于Pegfp—C2-PSF质粒转染组无U0126处理的细胞中VEGFmRNA的相对表达量1．23±0．09，差异有统计学意义（P=0．002）。结论PSF可抑制IGF-1诱导的RF／6A细胞中的ERK信号通路的活化，下调VEGF在RF／6A细胞中的表达，进而抑制RF／6A细胞的增生。

探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对32D-BCR／ABL细胞增殖的影响

目的:在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)由慢性期向急性期的过渡阶段伴随有多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的异常表达。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA(decoy RNA)对32D-BCR/ABL细胞增殖的影响及其可能的分子机制。方法:用电转染方法将hnRNP E2诱骗RNA野生序列和突变序列的表达载体(pGD和pGM)转入32D-BCR/ABL细胞,用G418筛选出稳定表达诱骗RNA的细胞。锥虫蓝染色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。FCM分析细胞周期,RT-PCR和Western印迹法检测下游CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-bindingproteinα,C/EBPα)和c-Myc的表达。结果:筛选出稳定表达野生型和突变型诱骗RNA的32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞。野生型32DP210-pGD细胞与未转染32D-BCR/ABL细胞相比,其细胞增殖抑制率为(69.48±5.21)%,克隆形成能力明显减弱,细胞周期由G0/G1期向S期进展受阻;C/EBPαmRNA水平无改变,但在蛋白水平上42 ku-C/EBPα的表达增加(43.83±4.91)%;c-Myc mRNA水平下降(35.67±6.64)%,蛋白水平降低(30.91±3.84)%。突变型32DP210-pGM细胞与未转染32D-BCR/ABL的细胞相比,其上述各指标无明显差异。结论:hnRNP E2诱骗RNA能够抑制32D-BCR/ABL细胞的增殖,其机制可能是诱骗RNA阻断hnRNP E2和C/EBPαmRNA的结合,引起42 ku-C/EBPα表达增加,进而引起其下游靶基因c-Myc下调。

多聚嘧啶区结合蛋白1促进肿瘤发展分子机制的研究进展

多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)是一种已知的转录后基因表达调节因子,可以调控mRNA的可变剪接、翻译、稳定性和定位,具有多种与RNA代谢相关的分子功能。PTBP1在多种恶性肿瘤中高表达,并可以通过影响肿瘤细胞的能量代谢、增殖、凋亡和转移等方式促进胶质瘤、结直肠癌、乳腺癌等肿瘤的恶性进展,具有作为临床诊断标志物和治疗靶标的潜力。

多聚嘧啶序列结合蛋白抑制HBV转录后调节元件的功能

目的探讨多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)对乙型肝炎病毒转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)功能的影响。方法采用pDM138-HPRE CAT(chloramphenicol acetyltransferase)报告体系,通过质粒瞬时转染细胞的方式来探讨PTB对HPRE功能的影响。结果CAT活性检测表明:PTB的过表达使HPRE介导的CAT表达活性下降,并且呈剂量依赖性。当去除质粒上游剪接供体位点时,PTB仍然可以降低CAT的活性。结论PTB抑制HPRE的功能,并且这种抑制作用不依赖于上游剪接供体位点。

选择性剪接多聚嘧啶结合蛋白及其同源蛋白与恶性肿瘤相关性的研究进展

选择性剪接(alternative splicing)是指一个前体mRNA通过选择不同的剪接位点产生多个可编码功能相似或相反的mRNA剪接异构体的过程。多聚嘧啶结合蛋白(polypyrimidine tract-binding protein,PTB)是一种剪接调控因子,通过结合新生mRNA而抑制剪接发生。有关研究提示PTB及其同源蛋白剪接调控功能出现异常时可以导致肿瘤的发生。综述PTB及其同源蛋白与恶性肿瘤相关性的研究进展,有可能为肿瘤治疗提供新的选择,为未来靶点治疗提供新的思路。

RNA结合蛋白PTBP 1与磷酸化-AXL共表达在骨肉瘤中的临床意义

【目的】探索RNA结合蛋白PTBP1与p-AXL在骨肉瘤中的表达情况及其临床病理联系,并进一步探讨PTBP1/p-AXL共表达在骨肉瘤中的预后评估意义。【方法】应用GEO和Target数据库分析PTBP1与AXL在骨肉瘤和正常组织中的表达差异及PTBP1的预后价值。收集2016年3月至2020年10月中山大学第一附属医院76例骨肉瘤和37例非恶性骨组织(骨痂、骨纤维结构不良或骨样骨瘤)及其病例信息,应用免疫组化法检测PTBP1和p-AXL蛋白的表达情况并行统计学分析。【结果】GEO数据库分析结果显示PTBP1和AXL在骨肉瘤组织的表达具有高于正常组织的趋势,但尚未达到统计学意义;Target数据分析结果显示PTBP1高表达组骨肉瘤患者总生存期(OS)与无进展生存期(PFS)均短于低表达组,但差异尚未达统计学意义(P=0.064;P=0.134)。免疫组化结果显示PTBP1和p-AXL蛋白的表达在骨肉瘤组织中显著高于非恶性骨组织;p-AXL阳性表达率与肺转移相关(P=0.025);Kaplan-Meier分析发现肺转移、复发、PTBP1表达及PTBP1/p-AXL共表达等因素与骨肉瘤患者不良总生存期相关;且多变量Cox回归分析显示肺转移(P<0.0001)、PTBP1表达阳性(P=0.041)是骨肉瘤患者总生存期(OS)独立危险因素;PTBP1/p-AXL共表达患者的OS(P=0.017)和PFS(P=0.043)均低于非PTBP1/p-AXL共表达患者。【结论】PTBP1、p-AXL在骨肉瘤中高表达,PTBP1与p-AXL共表达与患者预后差相关,且PTBP1可作为骨肉瘤患者独立预后指标。

结直肠癌组织miR-330-5p、PTBP1的表达与病理参数和预后的关系

目的分析结直肠癌组织微小核糖核酸-330-5p(miR-330-5p)、多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)的表达与病理参数及预后的关系。方法选取2018年1月—2020年5月南通市中医院肛肠科收治的结直肠癌患者101例,收集术中部分癌组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-330-5p、PTBP1 mRNA表达。通过Targetscan数据库预测miR-330-5p与PTBP1的结合位点,分析miR-330-5p、PTBP1 mRNA在结直肠癌组织不同临床病理参数中的差异;采用K-M法绘制其生存曲线;多因素Cox回归分析患者预后影响因素。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织miR-330-5p表达降低,PTBP1 mRNA表达升高(t/P=24.000/<0.001、19.233/<0.001)。miR-330-5p与PTBP1存在结合位点,二者在结直肠癌组织表达呈负相关(r/P=-0.679/<0.001)。与低分化程度、TNMⅢ期、有淋巴结转移比较,中高分化程度、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移结直肠癌组织miR-330-5p升高、PTBP1 mRNA表达降低(t/P=2.490/0.014、2.479/0.015,2.837/0.006,2.953/0.004,3.319/0.001、3.307/0.001)。101例结直肠癌患者3年总生存率为83.17%(84/101)。miR-330-5p高表达组、PTBP1 mRNA低表达组3年总生存率分别高于miR-330-5p低表达组、PTBP1 mRNA高表达组(χ^(2)/P=6.466/0.011、11.697/0.001)。结直肠癌患者死亡的独立危险因素为低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和PTBP1 mRNA≥1.50,独立保护因素为miR-330-5p≥0.57[OR(95%CI)=3.642(1.278~10.381)、3.817(1.375~10.598)、4.013(1.418~11.351)、2.684(1.025~7.029)、0.338(0.129~0.890)]。结论结直肠癌组织miR-330-5p低表达和PTBP1 mRNA高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

剪接因子PTBP1在消化道肿瘤中作用的研究进展

RNA剪接失调是肿瘤重要的分子病理特征之一,与剪接因子异常表达密切相关。多聚嘧啶串结合蛋白1(PTBP1)是剪接因子不均一核糖核蛋白家族成员之一,可通过调控增殖、迁移、侵袭、自噬、凋亡、免疫监视及代谢重编程等环节参与多种肿瘤的发生与发展,是消化道肿瘤的潜在临床应用靶点。PTBP1作为关键的剪接因子调节靶基因前体mRNA的剪接及mRNA稳定性等,其调控可变剪接的新型分子机制在消化道肿瘤中也得到了进一步阐述。该文对剪接因子PTBP1在消化道肿瘤中作用的研究进展作一综述。

lncRNA BCRT1、PTBP3在老年乳腺癌组织中的表达及预后的关系分析

目的 研究长链非编码RNA乳腺癌相关转录物1(lncRNA BCRT1)、多聚嘧啶结合蛋白3(PTBP3)在老年乳腺癌组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2018年3月至2020年3月于该院诊治的126例老年乳腺癌患者。采用实时荧光定量PCR检测组织中lncRNA BCRT1、PTBP3 mRNA表达。采用免疫组化检测组织中PTBP3蛋白表达。采用Pearson相关分析癌组织中lncRNA BCRT1与PTBP3 mRNA表达的相关性。随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同lncRNA BCRT1、PTBP3表达老年乳腺癌患者无进展生存预后的差异。采用Cox回归分析老年乳腺癌无进展生存预后的相关因素。结果 癌组织中lncRNA BCRT1表达为(2.84±0.63),高于癌旁组织(1.13±0.25),差异有统计学意义(t=28.320,P<0.001)。癌组织中PTBP3 mRNA表达为(2.17±0.59),高于癌旁组织(0.75±0.26),差异有统计学意义(t=24.722,P<0.001)。癌组织中lncRNA BCRT1表达与PTBP3 mRNA呈正相关(r=0.712,P<0.001)。lncRNA BCRT1、 PTBP3 mRNA在乳腺癌中的表达与肿瘤分化程度、TNM分期有关,差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNA BCRT1高表达组3年累积无进展生存率低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=12.577,P<0.001)。PTBP3 mRNA高表达组3年累积无进展生存率低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=9.617,P=0.002)。lncRNA BCRT1高表达组3年无进展生存期为(30.56±2.23)个月,短于低表达组的(33.65±1.27)个月,差异有统计学意义(t=9.595,P<0.001)。PTBP3 mRNA高表达组3年无进展生存期为(31.66±2.15)个月,短于低表达组的(34.19±1.73)个月,差异有统计学意义(t=7.370,P<0.001)。lncRNA BCRT1高表达、PTBP3 mRNA高表达、TNM分期Ⅲ期、低分化程度是老年乳腺癌患者无进展生存预后的相关因素(P<0.05)。结论 老年乳腺癌中lncRNA BCRT1、PTBP3表达升高,均与TNM分期、肿瘤分化程度有关,是评估老年乳腺癌无进展生存预后的肿瘤标志物。

多嘧啶序列结合蛋白1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

目的检测多嘧啶序列结合蛋白1(PTBP1)在前列腺癌中的表达水平,并探究PTBP1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法运用UALCAN数据库分析PTBP1基因在前列腺癌组织中的表达水平、PTBP1基因与前列腺癌患者总生存期(OS)的关系,收集前列腺癌及癌旁组织,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测前列腺癌及癌旁组织、正常前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞中PTBP1 mRNA和蛋白质的相对表达水平。在前列腺癌PC3细胞中转染siRNA-PTBP1,将细胞分为转染组(si-PTBP1)和对照组(NC),采用RT-qPCR和Western blot验证转染效率。利用细胞克隆形成实验和细胞计数盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;利用Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)及EMT标志蛋白的表达水平;所有结果应用SPSS 26.0统计软件分析。结果UALCAN数据库显示PTBP1基因在前列腺癌组织中表达水平升高(P<0.001),患者总生存期(OS)与PTBP1表达水平呈负相关(P<0.05);RT-qPCR和Western blot结果表明前列腺癌组织中PTBP1 mRNA和蛋白相对表达水平高于癌旁组织(mRNA:2.31±0.12比1.02±0.11,t=14.343,P<0.05;蛋白:101.00±9.54比42.33±8.50,t=7.951,P<0.05),PC3和DU145细胞中PTBP1相对表达水平高于正常前列腺上皮细胞(mRNA:7.13±0.09比1.02±0.13、4.31±0.11比1.02±0.13,t=66.578、33.310,P<0.05;蛋白:202.67±11.50比101.33±9.07、172.67±13.05比101.33±9.07,t=11.979、7.773,P<0.05);转染组细胞PTBP1 mRNA和蛋白相对表达水平低于对照组(mRNA:0.32±0.09比1.03±0.09,t=9.040,P<0.05;蛋白:43.33±11.50比104.33±11.06,t=6.621,P<0.05);细胞克隆形成实验结果表明转染组细胞克隆形成数目低于对照组[(81.33±11.50)个比(181.00±12.00)个,t=10.385,P<0.05];CCK-8实验中,转染组细胞在48、72、96 h的增殖活性均低于对照组(48 h:0.40±0.09比0.62±0.11、72 h:0.63±0.11比1.01±0.09、96 h:0.85±0.11比1.65±0.09,t=2.076、4.692、9.549,P<0.05);Transwell迁移实验中,转染组细胞迁移数目低于对照组[(43.33±11.50)个比(131.33±10.59)个,t=9.744,P<0.05],侵袭实验中,转染组细胞侵袭数目低于对照组[(36.00±10.54)个比(91.67±8.62)个,t=7.082,P<0.05];此外,Western blot实验结果表明转染组细胞β-catenin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达水平低于对照组(β-catenin:99.33±8.02比24.33±8.02,t=11.452,P<0.05;N-cadherin:101.67±8.50比21.33±7.51,t=12.267,P<0.05;Vimentin:102.67±8.50比20.00±10.15,t=10.813,P<0.05),转染组细胞E-cadherin的蛋白表达水平高于对照组(100.67±7.51比189.33±8.50,t=13.539,P<0.05),以上差异均有统计学意义。结论PTBP1在前列腺癌组织和细胞中异常高表达,可促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和EMT。

RNA结合蛋白PTB在精子发生中的研究进展

RNA结合蛋白通过与新生转录子相互作用来调节细胞的功能,因而在人体发育和内环境中越来越受到关注。多聚嘧啶序列结合蛋白(PTB)家族是RNA结合蛋白的重要组成部分,且在基因表达的转录后调控中起到至关重要的作用。随着对PTB转录后调控以及各个亚型的深入研究发现,在精子发生过程中,Ptbp1(polypyrimidine tract-binding protein 1)在精原细胞有丝分裂中为主要表达亚型,而Ptbp2在精母细胞减数分裂期至精子细胞阶段中大量表达,且能与磷酸甘油酸激酶2(PGK2)mRNA 3'端非编码区结合,从而使Pgk2 mRNA在小鼠生殖细胞中稳定表达。当睾丸组织中Ptbp2表达失活时,生精小管中生精细胞分化停滞在圆形精子细胞阶段并伴有大量的巨型多核细胞(MNCs)产生,精母细胞凋亡增加,生精小管变细,精子成熟障碍,进而影响男性生育能力。本文就PTB的结构及其在精子发生中的调控作用进行综述。

NSCLC患者血清中PTBP1、CDCP1的表达及临床预后意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中多聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)、含CUB结构域的蛋白质1(CDCP1)的表达及临床预后意义。方法 选取于贵州航天医院就诊的90例NSCLC患者为NSCLC组,以同期诊治的40例肺部良性疾病患者为良性疾病组,40例体检健康者为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清PTBP1、CDCP1水平,并比较各组血清PTBP1、CDCP1水平差异,比较不同临床病理特征患者血清PTBP1、CDCP1水平差异。采用Pearson相关分析NSCLC组血清PTBP1与CDCP1水平的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线分析血清PTBP1、CDCP1水平对NSCLC患者生存预后的影响,采用单因素及多因素Cox回归分析影响NSCLC患者生存预后的因素。结果 NSCLC组血清PTBP1、CDCP1水平明显高于良性疾病组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组患者血清PTBP1与CDCP1水平呈正相关(r=0.721,P<0.001)。不同肿瘤分期、淋巴结转移患者血清PTBP1、CDCP1水平差异有统计学意义(P<0.05)。PTBP1高表达组和低表达组NSCLC患者的平均生存时间分别为(27.59±3.32)个月、(31.47±3.68)个月,Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,PTBP1高表达组患者累积生存率低于PTBP1低表达组患者(χ^(2)=5.910,P=0.015)。CDCP1高表达组和低表达组平均生存时间分别为(27.34±3.29)个月、(32.27±3.54)个月,CDCP1高表达组患者累积生存率低于CDCP1低表达组患者(χ^(2)=7.544,P=0.006)。肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、PTBP1高表达、CDCP1高表达是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素。结论 NSCLC患者血清PTBP1、CDCP1水平升高,二者与肿瘤分期及淋巴结转移有关,是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素,二者是潜在的NSCLC肿瘤标志物。

靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白shRNA慢病毒干扰质粒的构建及鉴定

目的构建靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract-binding protein,PTB)的shRNA慢病毒干扰质粒,并对其进行鉴定。方法根据Gen Bank中登录的PTB的基因序列设计并合成2条靶向MA104细胞PTB基因的shRNA干扰序列(shPTB1、shPTB2)和1条阴性对照序列(shControl),分别插入载体p LVshRNA-EGFP(2A)Puro后,构建慢病毒重组质粒;利用HEK293Ta细胞包装针对PTB基因的shRNA的重组慢病毒颗粒;感染MA104细胞后,经Resl-time PCR、免疫荧光和Western blot法分别检测MA104细胞中PTB基因的转录和蛋白表达水平。结果 PCR及测序鉴定证明3种重组慢病毒质粒构建正确。3种重组慢病毒质粒转染HEK293Ta细胞48 h后,均可见绿色荧光表达,3组细胞的病毒滴度均为2×106 TU/ml。3种重组慢病毒感染MA104细胞48 h后均可见绿色荧光表达。经嘌呤霉素加压筛选后,p LVshPTB1-EGFP-2A和p LVshPTB2-EGFP-2A组MA104细胞仅有少量细胞于细胞核中表达,p LVshPTB1-EGFP-2A组MA104细胞中PTB基因转录及蛋白表达的水平均低于p LVshPTB2-EGFP-2A组。结论成功构建了靶向MA104细胞PTB蛋白的shRNA重组慢病毒,shRNA序列可成功下调PTB在MA104细胞中的表达,为PTB在RV增殖过程中调控作用的研究奠定了基础。

多聚嘧啶区结合蛋白1对胃癌细胞增殖和转移的作用机制

目的探讨多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)在胃癌组织和人胃癌细胞株中的表达,以及PTBP1对胃癌细胞增殖与转移的作用机制。方法收集2019年1至6月于西安交通大学第一附属医院行外科手术切除的胃癌患者的癌组织与对应的癌旁组织。运用Kaplan-Meier Plotter数据库分析胃癌患者的生存情况。选择PTBP1表达水平相对较高的人胃癌细胞株SGC7901和AGS进行小干扰RNA(siRNA)转染下调PTBP1表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和PTBP1敲低组。分别运用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测胃癌细胞中PTBP1 mRNA和PTBP1的表达。通过MTT法转染24、48、72、96 h后,观察PTBP1对胃癌细胞增殖的作用;Transwell实验检测下调PTBP1后胃癌细胞侵袭和迁移的变化,蛋白质印迹法检测下调PTBP1后胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的改变。采用独立样本t检验、方差分析和秩和检验进行统计学分析。结果Kaplan-Meier Plotter预后分析显示,高表达PTBP1胃癌患者总生存期短于低表达PTBP1胃癌患者[9.2个月(6.2个月,17.2个月)比19.0个月(14.5个月,28.4个月)],差异有统计学意义(Z=5.31,P<0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示,人胃癌细胞株SGC7901和AGS中,PTBP1敲低组PTBP1 mRNA表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:0.78±0.11比3.10±0.19、2.99±0.23。AGS:0.80±0.09比3.55±0.24、3.50±0.18),差异均有统计学意义(tSGC7901=10.57、8.08,tAGS=10.91、13.42;P均<0.01)。蛋白质印迹结果显示,人胃癌细胞株SGC7901和AGS中,PTBP1敲低组PTBP1表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:0.38±0.04比1.42±0.05、1.35±0.09。AGS:0.17±0.02比1.52±0.08、1.38±0.45),差异均有统计学意义(tSGC7901=15.94、10.57,tAGS=16.60、20.80;P均<0.01)。MTT结果显示,转染48、72、96 h后,PTBP1敲低组的吸光度值较阴性对照组分别下降了0.25±0.01、0.38±0.02、0.84±0.04,其中转染96 h后的差值最显著,差异有统计学意义(t=10.21、14.32,P均<0.01)。Transwell实验结果显示,人胃癌细胞株SGC7901和AGS中,PTBP1敲低组发生侵袭和迁移的细胞数均少于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:42.00±5.91比116.40±10.23、114.40±10.43;39.60±6.77比125.80±11.51、122.40±5.90。AGS:40.20±7.25比115.60±14.63、117.40±9.12;36.00±5.20比122.40±12.10、125.40±12.74),差异均有统计学意义(tSGC7901=14.07、13.50、14.43、20.62,tAGS=10.27、14.75、14.68、16.76;P均<0.01)。蛋白质印迹结果显示,PTBP1敲低组E-钙黏蛋白表达水平均高于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:1.42±0.05比0.53±0.05、0.57±0.03。AGS:1.34±0.04比0.54±0.03、0.61±0.01),而N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:0.50±0.03比1.64±0.05、1.46±0.07,0.32±0.07比1.42±0.07、1.33±0.07。AGS:0.37±0.06比1.47±0.04、1.36±0.04,0.41±0.04比1.53±0.06、1.37±0.04),差异均有统计学意义(tSGC7901=11.63、13.19、18.83、11.68、11.43、10.43,tAGS=15.02、16.23、14.67、12.97、14.45、17.18;P均<0.01)。结论胃癌组织和细胞中PTBP1表达水平均升高,并且参与调控胃癌细胞的增殖、转移和EMT。

多聚嘧啶区结合蛋白1通过上皮间质转化途径促进结直肠癌的转移与侵袭

目的分析多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)在结直肠癌中的表达水平,并探讨其对结直肠癌细胞侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法(1)下载TCGA数据库中结直肠癌转录组数据集,用Limma包分析结直肠癌组织(n=479)和正常组织(n=42)中PTBP1的表达及其与患者临床预后的相关性。(2)第1转染组和第2转染组为SW480细胞中分别转染对照慢病毒(ShCtrl)5μL和PTBP1敲低慢病毒(ShPTBP1组)5μL;第3转染组和第4转染组为LoVo细胞中分别转染ShCtrl和ShPTBP1各5μL;第5转染组和第6转染组为HCT116细胞中分别转染对照质粒(Vector)5μg和PTBP1过表达质粒(plasmid+PTBP1组)5μg;第7转染组和8转染组为HT29细胞中分别转染Vector和plasmid+PTBP1各5μg。以Transwell小室检测上述不同转染组细胞的侵袭能力,用蛋白质印迹法检测各组细胞中的PTBP1、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达水平。结果(1)PTBP1在结直肠癌组织和正常组织中的表达量分别为62.05±30.21和39.38±10.06,2组间比较差异有统计学意义(P<0.05),并与临床不良预后有关。(2)第1至第8转染组的侵袭细胞百分比分别为(100.00±6.28)%,(45.77±1.68)%,(100.00±7.27)%,(41.05±5.68)%,(100.00±6.55)%,(157.65±4.24)%,(100.00±9.80)%和(189.51±4.66)%;这8组的PTBP1蛋白表达水平分别为1.22±0.10,0.80±0.09,0.93±0.04,0.69±0.05,0.96±0.04,1.11±0.01,0.92±0.04和1.17±0.04;这8组的E-cadherin蛋白表达水平分别为0.36±0.05,0.87±0.12,0.64±0.00,1.00±0.06,0.60±0.02,0.49±0.02,0.53±0.02和0.30±0.01;这8组的Vimentin蛋白表达水平分别为0.82±0.02,0.65±0.05,0.72±0.04,0.54±0.04,0.46±0.06,0.74±0.04,0.45±0.06和0.74±0.05;这8组的Snail蛋白表达水平分别为0.96±0.04,0.74±0.05,0.72±0.04,0.57±0.01,0.55±0.01,0.82±0.09,0.58±0.02和0.90±0.09。以上指标:第2转染组与第1转染组比较,或第4转染组与第3转染组比较,或第6转染组与第5转染组比较,或第8转染组与第7转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PTBP1表达与Vimentin和Snail呈正相关,而与E-cadherin呈负相关。结论PTBP1在结直肠癌组织中异常高表达,且与癌细胞的侵袭能力呈正相关,其机制可能与诱导EMT途径有关。