用改进的Mg^(++)沉淀多聚核糖体法分离胞质mRNA

本文报道一种用改进的Palmiter的方法分离纯化胞质mRNA。即利用镁离子沉淀核糖体,提取细胞质总RNA,进而纯化胞质mRNA的方法。该方法得到的mRNA是正在翻译的成熟的胞质mRNA。所得mRNA得率和质量都优于其他方法,便于常规检测,并可用于cDNA的合成和PCR扩增。

雌激素对小鼠下丘脑腹内侧核神经元多聚核糖体的影响

电镜观测苯丙酸雌二醇（ＥＢ）和乙酸孕酮（ＨＰＣ）对雌性小鼠下丘脑腹内侧核神经元多聚核糖体的影响。根据雌鼠的动惰周期，对切除卵巢的幼鼠（ＯＶＸ）每５天分别肌肉注射１次８μｇＥＢ、２ｍｇＨＰＣ或８μｇＥＢ加２ｍｇＨＰＣ。疗程２个月。结果显示：（１）神经元胞质中游离型多聚核糖体每μｍ２的含量在ＯＶＸ组与正常组（ＩＮＴ）、ＯＶＸ＋ＥＢ组、ＯＶＸ＋ＨＰＣ组和ＯＶＸ＋ＥＢ、ＨＰＣ组比较均无显著差异（Ｐ＞０．０５）。（２）附着粗面内质网膜表面的结台型多聚核糖体每μｍ含量在ＯＶＸ组分别比ＩＮＴ组、ＯＶＸ＋ＥＢ组、ＯＶＸ＋ＨＰＣ组和ＯＶＸ＋ＥＢ．ＨＰＣ组少２９．８％、２６．２％、３５．２％和３３．７％，均有非常显著差异（Ｐ＜０．００５）。本实验结果证实雌性激素特别是孕酮在小鼠生育早期使下丘脑腹内侧核神经元结合型多聚核糖体含量增多。

在条锈菌侵染早期小麦初生叶内多聚核糖体水平与蛋白质合成能力的变化

小麦初生叶接种条锈菌毒性生理小种（ＣＹ２９）及其弱毒突变菌系（ＣＹ２９－ｍｕｔ３）后，呈不亲和反应的寄主叶片可溶性蛋白质合成能力在接种后２４ｈ显著高于未接种对照，但其后逐渐降低，直至接近对照；而呈亲和性反应的寄主叶片可溶性蛋白质合成在侵染早期与对照相近，但与膜结合蛋白质在９６ｈ时大大高于对照。对接种叶中核糖体的密度梯度分析证实：呈不亲和反应寄主叶片游离多聚核糖体及亲和反应的寄主内与膜结合多聚核糖体均有特异性增加。上述结果表明寄主的抗病和感病反应均与蛋白质合成能力的变化有关。

大鼠肝多聚核糖体及其mRNA的分离和鉴定

利用超速离心法分离大鼠肝多聚核糖体,进一步用Oligo(dT)-Cellulose柱层析法从中直接分离出mRNA。紫外分光光度及蔗糖密度梯度分析均显示此多聚核糖体有较高的纯度。在兔网织红细胞体外翻译系统中,此多聚核糖体表现出较高的生物活性。

雌性激素对小鼠下丘脑腹内侧核神经元多聚核糖体的影响

目的 :电镜观测苯甲酸雌二醇 ( EB)和已酸孕酮 ( HPC)对雌性小鼠下丘脑腹内侧核神经元多聚核糖体的影响。方法 :根据雌鼠的动情周期 ,对切除卵巢的幼鼠 ( OVX)每 5d分别肌肉注射 1次 8μg EB,2 mg HPC,8μg EB加 2 mg HPC。疗程 2个月。结果 :( 1 )神经元胞质中游离型多聚核糖体每 μm2的含量在 OVX组与正常组 ( INT)、OVX+ EB组 ,OVX+ HPC组和 OVX+ EB+ HPC组比较均无显著差异 ( P>0 .0 5)。 ( 2 )附着粗面内质网膜表面的结合型多聚核糖体每μm含量在OVX组分别比 INT组 ,OVX+ EB组 ,OVX+ HPC组和 OVX+ EB+ HPC组少 2 9.8%、2 6.2 %、35.2 %和 33.7%均有非常显著差异 ( P<0 .0 0 5)。结论 :本实验结果证实雌性激素特别是孕酮在小鼠生育早期使下丘脑腹内侧核神经元结合型多聚核糖体含量增多。

激动素对绿豆子叶多聚核糖体形成的促进作用及其与RNA合成的关系

50μmol/L 激动素(KT)处理绿豆(Phaseolus radiatus L.)黄化子叶12小时可显著增加其多聚核糖体水平,并使总核糖体水平提高60%以上;KT的这种作用可被放线菌素D(ACTD)抑制。进一步测定表明,KT处理子叶12小时可显著促进RNA合成,使总RNA含量增加30%左右。其中,poly(A)^+-mRNA增加了1.2倍,25S rRNA、18S rRNA和4—5S RNA含量也有不同程度的增加。这些结果表明,KT既可促进单核糖体和核糖体亚单位形成多聚核糖体;又有促进核糖体构建的作用;KT促进多聚核糖体的形成可能依赖于mRNA新合成的增加。

小麦胚在萌发和春化处理过程中核酸含量和多聚核糖体的形成

在春化处理过程中,小麦胚的核酸代谢已被研究。核酸抗代谢物抑制冬性禾谷类作物的春化作用。过去我们已经指出,在剥离的冬小麦胚中,两部分提取性质有差异的RNA的比例,在春化处理过程中是不同的,尽管RNA的量没发现变化。Shiomi和Hori已经报道,在春化的大麦苗中,RNA和DNA的含量发生变化。这些结果说明,低温处理过程中小麦胚的核酸代谢对春化进程起重要作用。 另一方面,在萌发和春化处理过程中,小麦胚蛋白质的离体合成也被研究,在低温条件下,蛋白质合成下降。此外,在离体系统中,萌发的小麦胚和春化的小麦胚的产物之间也有差异。在小麦胚中,虽然多聚核糖体的快速形成都知发生在萌发初期,但是,在春化处理过程中小麦胚蛋白质合成体系的改变仍待阐明。 本研究在于比较萌发的和低温处理的小麦胚之间不同核酸种类的含量变化和多聚核糖体的形成。低温处理过程中,小麦胚的RNA和DNA含量比萌发期高,而两个时期的RNA/ONA、RNA/DNA和SRNA/总RNA的比率是一致的。在萌发和低温处理过程中,小麦胚的多聚核苷酸含量与曲线图之间的差异已被观察到。

冠状动脉CT成像联合血清多聚ADP核糖聚合酶1及硫氧还蛋白相互作用蛋白对冠心病的诊断价值

目的分析冠状动脉CT成像联合血清多聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对冠心病的诊断价值。方法选取2020年1月至2022年1月芜湖市第二人民医院确诊的冠心病患者103例为冠心病组,选取同期体检人群41例作为对照组。通过酶联免疫吸附测定法检测两组血清PARP1、TXNIP水平,分析冠状动脉CT成像、血清PARP1、血清TXNIP以及联合检测对冠心病的诊断价值。结果与对照组相比,冠心病组冠状动脉CT成像检测冠心病的阳性比例高,差异有统计学意义(χ^(2)=75.246,P<0.01)。冠心病组患者血清PARP1水平、TXNIP水平相比对照组较高,差异有统计学意义(t=22.938、14.190,P<0.01)。冠状动脉CT成像、血清PARP1、TXNIP水平以及三者联合检测诊断冠心病的曲线下面积为0.873、0.871、0.849、0.933。冠状动脉CT成像、PARP1、TXNIP以及联合检测与临床诊断的具有一致性(Kappa=0.720、0.720、0.568、0.669,P<0.01)。结论冠状动脉CT成像与血清PARP1、TXNIP水平三者联合对冠心病具有较高的诊断价值。

多聚脱氧核糖核苷酸在组织修复中的应用进展

多聚脱氧核糖核苷酸(PDRN)为低分子量的线性多聚核苷酸片段,是良好的组织修复效应的生物活性分子,主要提取来源为鱼类生殖细胞。研究报道以及临床结果显示,PDRN具有低免疫原性和低毒性。因此,在皮肤创面修复、角膜损伤、消化道损伤修复及骨损伤修复等组织修复中显示出很好的应用潜力。本文重点对PDRN在组织损伤和修复中的应用进展进行总结,全面探讨了PDRN在组织修复中的作用和研究机制,为组织修复材料的研究及开发提供理论支持。

多聚ADP-核糖聚合酶-1在放射性认知功能障碍中的研究进展

放射治疗后多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP-1)的过度激活与神经炎症反应密切相关,而神经炎症是放射性认知功能障碍(RICD)的主要发病机制。该文分析了RICD中神经炎症反应的病理生理机制,包括小胶质细胞激活、星形胶质细胞的增生、少突胶质细胞的破坏、海马微环境改变和血脑屏障损伤,并对PARP-1通过这些共同机制介导神经炎症反应进而加重RICD的研究进展进行综述。最后,探讨了PARP-1抑制剂对RICD的潜在保护作用,旨在为RICD防治药物的开发提供新方向。

三结构域蛋白8、Ras相关蛋白35、多聚ADP核糖聚合酶1在子宫内膜癌组织中的表达及检测临床意义

目的:探讨三结构域蛋白8(TRIM8)、Ras相关蛋白35(Rab35)、多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及检测临床意义。方法:选择75例EC患者为研究对象,取手术切除的EC组织及癌旁正常子宫内膜组织,以免疫组织化学法检测EC组织和癌旁组织中TRIM8、Rab35、PARP-1蛋白表达情况,并结合患者临床病理因素分析其与临床病理特征的关系,随访5年,记录EC患者生存率,并分析EC患者预后影响因素。结果:Rab35、PARP-1蛋白在EC组织和癌旁组织中阳性表达率分别为71.00%和35.00%、74.00%和43.00%,TRIM8蛋白阳性表达率分别为30.00%和69.00%(均P<0.01)。EC组织中Rab35与PARP-1为正相关性,Rab35和PARP-1与TRIM8表达为负相关性(r=0.542、-0.461、-0.461,均P<0.05)。Rab35阳性患者5年生存率55.17%低于阴性患者70.57%,PARP-1阳性患者5年生存率65.96%低于阴性患者79.24%,TRIM8阳性患者5年生存率93.33%高于阴性患者72.73%(均P<0.05)。FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、肌层浸润深度≥1/2和PARP-1、TRIM8、Rab35表达异常为影响EC患者预后的危险因素(均P<0.05)。结论:子宫内膜癌组织PARP-1、Rab35表达升高、TRIM8表达降低,三者表达变化与子宫内膜癌的发生、发展有显著相关性。

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1调控β-1,4-甘露糖基转移酶介导甲状腺癌细胞增殖机制

目的探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)调控β-1,4-甘露糖基转移酶(ALG1)对甲状腺癌(TC)细胞增殖/凋亡的影响及其潜在机制。方法采用慢病毒表达载体(pLV)构建pLV-EGFP空载与pLV-ALG1过表达8305C细胞系,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞蛋白水平表达,使用Kaplan-Meier数据库分析TC患者总生存期(OS);采用细胞计数试剂盒(CCK)-8和集落形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。从TCGA数据库中筛选出TC患者中与PARP1表达呈显著相关的前1000个差异基因,富集相关信号通路,比较这些通路的差异表达状况,并在过表达细胞系中进行相应验证。结果PARP1在TC细胞系中表达显著增加,且与患者OS呈负相关(P<0.05)。PARP1抑制剂(NMS-P118)显著抑制8305C细胞的增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。TCGA数据库筛选并富集分析发现,N-糖基化修饰信号通路显著富集,NMS-P118显著抑制了β-1,4-甘露糖基转移酶(ALG1)的表达水平(P<0.05),但对p38的影响不明显(P>0.05)。生物素标记的甘露糖结合凝集素(MBL)检测发现NMS-P118显著下调了8305C细胞的甘露糖修饰水平(P<0.05)。Kaplan-Meier数据库分析发现TC中ALG1高表达的患者OS具有降低倾向(P<0.05)。过表达ALG1可逆转NMS-P118对8305C细胞增殖的抑制,减少细胞凋亡(P<0.05)。结论PARP1可通过促进糖基转移酶ALG1的表达介导TC的增殖并抑制其凋亡,PARP1可能是治疗TC的重要新靶点。

点阵激光联合多聚脱氧核糖核苷酸在面部皮肤美容中的应用效果

目的:探讨点阵激光联合多聚脱氧核糖核苷酸(Polydeoxyribonudeotide,PDRN)在面部皮肤美容中的应用效果。方法:选择2020年6月-2022年3月于笔者医院要求改善面部皮肤状况的就医者98例,根据治疗方式不同分为对照组和实验组,各49例。对照组予以点阵激光治疗,实验组在此基础上予以PDRN治疗。观察治疗3个月后,对比两组疗效、症状积分、不良反应和满意度等。结果:实验组治疗有效率95.92%,高于对照组的83.67%(P<0.05),实验组就医者满意度93.88%,高于对照组的79.59%(P<0.05)。实验组总不良反应发生率14.29%与对照组10.20%差异无统计学意义(P>0.05)。结论:点阵激光结合PDRN用于面部皮肤美容疗效显著,有助于改善就医者皮肤微循环,值得临床推广。

束缚应激对大鼠下丘脑和海马脑区核糖体多聚态的影响及年龄差异

本文运用蔗糖密度梯度超速离心方法分别对青年大鼠(4月龄)和老年大鼠(17月龄)束缚应激0.5小时、1小时、3小时和8小时后海马、下丘脑内核糖体多聚态进行了测定。结果表明,在应激过程中多聚核糖体逐渐解聚,这一现象在海马脑区老年大鼠比青年大鼠出现得早;同时,老年大鼠的寡聚核糖体含量不变或下降,而青年大鼠的寡聚核糖体在应激过程中含量上升。这些结果提示,应激可能引起蛋白质合成活力发生改变,并存在着年龄差异。

人参皂甙Rd预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后多聚ADP核糖聚合物的影响

目的:观察人参皂甙Rd缺血前预给药对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后多聚ADP核糖聚合物含量的影响。方法:60只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重280～300 g,随机分为假手术组(Sham组)、丙二醇组(Vehicle组)和人参皂甙Rd处理组(Rd组),每组20只。Vehicle组和Rd组大鼠采用MCAO线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,2 h后拔出栓线达到再灌注目的,建立急性局灶性脑缺血/再灌注模型。Vehicle组和Rd组分别于造模前30 min腹腔注射丙二醇(人参皂甙Rd稀释液)和人参皂甙Rd(10 mg/kg)。Sham组手术操作同前,但线栓未阻塞大脑中动脉。Western Blot和免疫组织化学方法检测大鼠大脑中动脉阻塞4 h后多聚ADP核糖聚合物的含量。结果:与Sham组相比,Vehicle组和Rd组缺血侧脑组织PAR聚合物含量增加(P<0.01);与Vehicle组相比,Rd组缺血侧脑组织PAR聚合物含量明显上调(P<0.01)。结论:10 mg/kg人参皂甙Rd预处理可能通过增加PAR聚合物的含量起到脑缺血损伤早期神经保护作用。

AngⅡ致内皮细胞凋亡中多聚(ADP-核糖)聚合酶活性变化的研究

目的:探讨体外AngⅡ在引起血管内皮细胞凋亡过程中细胞内多聚(ADP-核糖)聚合酶的活性变化情况。方法:1μmol/L的AngⅡ处理原代培养人脐静脉内皮细胞6、12、24和48h后,用TUNEL法来检测内皮细胞的凋亡,用[3H]掺入法来检测PARP的活性,硝酸还原法检测NO含量。结果:1μmol/L的血管紧张素Ⅱ以时间依赖性引起内皮细胞的凋亡,6h后细胞内的NO含量开始增加(P<0.05),24h达到高峰,48h后下降到对照组水平;6h后PARP的活性上升(P<0.05),12h到达高峰,24h接近正常,48h后PARP的活性显著低于对照组(P<0.05)。结论:NO含量增加导致的细胞毒性在血管紧张素Ⅱ引起内皮细胞的凋亡中有着重要的作用,在这一过程中PARP活性的变化是先上升后下降。

1型多聚ADP核糖聚合酶抑制剂对高同型半胱氨酸血症大鼠内皮功能的保护作用

目的:探讨1型多聚ADP核糖聚合酶(PARP1)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对高同型半胱氨酸血症(Hhcy)大鼠内皮功能的保护作用。方法:SD大鼠30只随机分为3组:模型组、3-AB组和正常对照组,每组10只,分别给予普通饲料加1.7%蛋氨酸、普通饲料加1.7%蛋氨酸同时每天腹腔注射3-AB20mg·kg-1和普通饲料,饲养45d。观察主动脉组织形态结构的改变;测定血浆同型半胱氨酸(Hcy)、内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的水平;检测大鼠胸主动脉环对乙酰胆碱(Ach)与硝普钠(SNP)的反应;检测大鼠胸主动脉PARP1蛋白的表达。结果:大鼠喂以高蛋氨酸饲料45d可诱导Hhcy。与模型组相比3-AB组大鼠NO水平明显升高而ET-1水平明显降低(P<0.01)。病理形态学观察模型组主动脉内膜病变明显,3-AB组病变程度减轻。与正常对照组比较,模型组胸主动脉对Ach引起的最大的内皮依赖性舒张反应(EDR)明显减弱(0.26±0.03vs0.89±0.11,P<0.01);而3-AB组EDR反应较模型组显著改善(0.57±0.12vs0.26±0.03,P<0.01)。模型组较正常对照组大鼠主动脉PARP表达明显升高(P<0.05),3-AB组PARP表达较模型组明显降低(P<0.05)。结论:PARP抑制剂3-AB有效地改善高同型半胱氨酸血症大鼠血管内皮功能,并在一定程度上改善血管早期病理形态学的改变。

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂AG014699联合化疗对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）抑制剂AG014699联合多西他赛（DTX）或卡铂（CBP）对三阴性乳腺癌细胞株MDA—MB-231增殖的影响，探讨PARP抑制剂AG014699联合化疗是否有协同抗肿瘤效应。方法PARP抑制剂AG014699与DTX、CBP单独或联合作用于MDA—MB-231细胞，细胞增殖及细胞毒性实验法检测细胞增殖并用联合用药公式分析合用效应（q值0.85—1．15为单纯相加，〉1．15为协同，〈0．85为拮抗）；流式细胞仪分析细胞凋亡及周期分布。结果PARP抑制剂AG014699、DTX、CBP单独作用于MDA—MB-231细胞，均可抑制增殖，诱导凋亡，引起细胞周期阻滞；PARP抑制剂AG014699（10μmol／L）与DTX（10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L）、CBP（10^-5、10^-4mol／L）联合作用时，q值在0．85—1．15，显示相加效应；PARP抑制剂AG014699与CBP（10^-3mol／L）联合作用时，q值〉1．15，显示协同效应。PARP抑制剂AG014699联合DTX或CBP能进一步促进凋亡，并使G2／M期细胞比例增加。结论PARP抑制剂AG014699联合化疗药物DTX或CBP能显著抑制MDA—MB．231细胞增殖，发挥相加或协同抗肿瘤作用。

多聚(ADP-核糖)聚合酶和半胱天冬蛋白酶-3在过氧亚硝基阴离子致气道上皮细胞损伤中的作用

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)介导气道上皮细胞损伤的作用机制。方法 :在培养的大鼠气道上皮细胞 (RTE) ,观察应用多聚 (ADP -核糖 )聚合酶 (PARP)抑制剂 3 -氨基苯甲酰胺 (3 -AB)和半胱天冬氨酸蛋白酶 - 3 (caspase - 3 )抑制剂Ac -DEVD -CHO后 ,外源性给予ONOO-对RTE细胞乳酸脱氢酶 (LDH)释放、凋亡百分率的影响 ,用Westernblot分析PARP裂解片段。结果 :3 -AB不能完全抑制ONOO-引起的RTE细胞LDH释放率的增高。 3 -AB对ONOO-引起的RTE细胞凋亡无明显影响。Ac -DEVD -CHO呈剂量依赖性抑制ONOO-诱导的RTE细胞凋亡。ONOO-致RTE细胞凋亡过程中有PARP的裂解。结论 :PARP活化是ONOO-介导RTE细胞损伤的途径之一 ,过度的PARP活化参与了ONOO-所致的RTE细胞坏死 ;caspase -

多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对高浓度锌损伤PC12细胞的保护作用

探讨多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对400μmol/L氯化锌损伤PC12细胞的保护作用及其对锌造成的细胞死亡类型的影响。应用MTT法,免疫细胞化学和Western印迹分别测定PC12细胞的存活率和PARP活性;用Hoechst33342/PI荧光双染色、膜联蛋白V结合实验及DNA断裂分析等方法检测细胞死亡类型。结果表明:在400μmol/L氯化锌的作用下,细胞存活率降至(22.7±4.6)%,PARP活性增强,坏死、凋亡和正常细胞百分比分别为(58.4±6.3)%、(18.0±5.6)%及(23.6±4.2)%;3-AB使细胞存活率提高至(76.9±4.7)%,PARP活性减弱,坏死细胞百分数降至(19.2±5.2)%,而正常和凋亡细胞百分数增加到(43.3±1.9)%和(37.5±6.5)%。实验证明,PARP参与了高浓度锌诱导的PC12细胞损伤,抑制PARP活性可提高细胞的存活率,而这种保护作用在于减少细胞的坏死而非凋亡。