流式细胞术外周血样本预处理最佳试验条件探索

目的 探索流式细胞术基于外周血样本预处理抗体量、样本放置时间、样本固定与否的最佳试验条件。方法 采集3只正常大鼠EDTA抗凝全血进行白细胞及淋巴细胞计数,随机定义为样本A,B,C,各样本分为4份,分别用于检测各淋巴细胞亚群CD3^(+),CD3^(-)CD45RA^(+),CD3^(+)CD4^(+),CD3^(+)CD8^(+)的含量,每份样本抗体上样量都以标示量1μg的1/4,1/2,1,2倍孵育并标记。根据试验结果,1/4倍抗体完全满足检测所需,又采集3只正常大鼠血液样本,随机定义为样本D,E,F,处理同样本A,B,C,每份样本抗体上样量都以标示量1μg的1/4,1/8倍孵育并标记。将1/4抗体标示量处理好的样本D,E,F,即刻上机检测(固定前),之后将样本分成两部分:一部分分别于固定后15 min,24 h上机检测;另一部分2~8℃避光保存,分别保存0.5,1.5,3 h后上机检测。结果 (1)各样本淋巴细胞数处于47万~100万。样本A,B,C抗体使用量降至0.25μg时,各样本淋巴细胞亚群比例没有显著性下降。样本D,F抗体使用量在标示量的1/8时,CD3^(+),CD3^(-)CD45RA^(+),CD3^(+)CD8^(+)细胞的比例显著降低(P<0.05),样本E淋巴细胞亚群数量未发生显著性变化。(2)与固定前比较,固定15 min后样本D,E,F的CD3^(+),CD3^(+)CD4^(+),CD3^(+)CD8^(+)细胞比例在各血样样本中均有不同程度的下降(P<0.05)。(3)非固定样本D,E,F中CD3^(+),CD3^(+)CD4^(+),CD3^(+)CD8^(+),CD3^(-)CD45RA^(+)测定值的总体变化趋势为随保存时间延长逐渐下降,而其中样本D中CD3^(-)CD45RA^(+)测定值在保存3 h时未发生显著性变化。(4)与固定保存15 min比较,固定保存24 h后样本D、E中CD3^(+),CD3^(+)CD4^(+)细胞比例显著下降(P<0.05),样本F淋巴细胞亚群数量未发生显著性变化。结论 淋巴细胞数处于47万~100万时,0.25μg检测抗体完全满足检测所需。样本固定、固定后放置过长时间、样本不固定放置1.5 h以上都会对淋巴细胞亚群数量产生一定影响。

用流式细胞计数法诊断猪瘟

德国研究人员介绍了一种流式细胞计数(FC)方法,用多聚甲醛固定从试验感染猪获得的白细胞,并与特异性单克隆抗体孵育,然后,与结合荧光素的抗-鼠Ig C孵育,用荧光激活细胞扫描器分析这些细胞,在2-和3-维柱形图中其结果可视。