亚砷酸钠及其代谢产物诱导16HBE细胞BCL2L2-PABPN1表达及机制探讨

目的探讨亚砷酸钠及其甲基化代谢产物诱导16HBE细胞融合基因B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(BCL2L2)-多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1)表达的差异及相关机制。方法(1)分别以浓度为1.5、3.0、4.5μmol/L的亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为低、中、高剂量砷染毒组),以浓度为4.5μmol/L一甲基胂酸(MMA)、二甲基胂酸(DMA)和亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为MMA组、DMA组和亚砷酸钠组),并设无毒物刺激的对照组。培养48 h后,以实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测BCL2L2-PABPN1的表达。(2)设计两种小干扰RNA(siRNA)沉默片段转染16HBE细胞,以敲减BCL2L2-PABPN1,分别设为siRNA-1组和siRNA-2组;另设无敲减BCL2L2-PABPN1转染的对照组。培养48 h后,以qRT-PCR检测3组细胞中BCL2L2-PABPN1的表达,分别以MTS法、JC-1线粒体膜电位检测法检测细胞存活率和早期凋亡率,以Hoechest33342/碘化丙啶(PI)双重染色法观察细胞凋亡情况,以蛋白质免疫印迹法检测P53信号通路相关蛋白表达。结果(1)随着亚砷酸钠染毒剂量的增加,16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平增加(P<0.01);高剂量砷染毒组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、低剂量砷染毒组和中剂量砷染毒组(P值均<0.05)。亚砷酸钠组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、MMA组和DMA组(P值均<0.05);但对照组、MMA组和DMA组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平两两比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(2)siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中BCL2L2-PABPN1相对表达水平和细胞存活率均低于对照组(P值均<0.05);但3组16HBE细胞早期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Hoechest33342/PI双重染色结果显示,siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞核固缩和早期凋亡细胞的数量均较对照组增多。siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中P53、Ser392位点磷酸化P53、B淋巴细胞瘤-2相关死亡启动子、P21和细胞色素C的蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05),P53上调凋亡因子蛋白相对表达水平均低于对照组(P值均<0.05)。结论亚砷酸钠可能通过诱导融合基因BCL2L2-PABPN1的表达,阻滞16HBE细胞凋亡;其机制与激活P53信号通路有关。亚砷酸钠甲基化代谢产物MMD和DMA对BCL2L2-PABPN1的表达无影响。BCL2L2-PABPN1可能通过BCL2L2和PABPN1基因的协同作用发挥抗凋亡效应。

PABPN1基因纯合（GCA）1插入突变致眼咽型肌营养不良一例报道

眼咽型肌营养不良（oculopharyngeal muscular dystrophy，OPMD）是一种晚发性常染色体显性或隐性遗传性骨骼肌疾病，其发病与多聚腺苷酸结合蛋白核l（PABPN1）基因第1号外显子出现（GCG）异常扩增或（GCA）插入而导致PABPNl在肌纤维核内形成类淀粉丝样结构有关。OPMD主要临床特点为眼睑下垂、吞咽困难和肌无力，肌肉病理改变为肌营养不良样病理改变伴随肌纤维内出现镶边空泡，特征性超微病理改变为肌纤维核内出现栅栏样管丝状包涵体.

眼咽型肌营养不良一家系临床与分子遗传学研究

目的探讨一考虑诊断眼咽型肌营养不良(oculopharyngeal muscular dystrophy,0PMD)家系的临床及分子生物学特点。方法收集该家系成员的临床资料,并经包括先证者在内的16位家族成员同意,收集其血样进行聚合酶链反应(PCR)基因验证分析。结果该家系成员男性患者起病以眼睑下垂为首发症状,而后开始逐渐出现以发音及吞咽困难为表现的咽部肌群和肢体乏力为表现的四肢近端肌群受累,而女性患者则往往以吞咽困难为首发表现。参与基因检测的家族成员中共发现10位存在多聚腺苷酸结合蛋白核l(PABPN1)基因的(GCG)6重复异常拷贝为(GCG)10,从而导致了丙氨酸的扩增。结论基因诊断及产前诊断是确诊及预防眼咽型肌营养不良的关键,眼睑下垂可能为携带(GCG)10突变男性OPMD患者的首发症状。